移植人羊膜细胞对大鼠创伤性脑损伤的实验研究

目的 探究大鼠TBI后脑内移植人羊膜细胞（HACs）对大鼠运动功能的影响。方法 HACs经分离、Hoechst33342标记后重悬调整细胞浓度为10^5/μl；采用改进的Feeney自由落体法打击大鼠脑皮层后肢运动区域，损伤后24h经微量注射器和立体定向仪将Hoechst33342标记的HACs 10μl分别移植于挫伤灶中心和挫伤灶边缘；在TBI后的28d内采用钉板平衡木行走测试大鼠运动功能变化，运动功能检测结束后取出脑组织行组织学检测。结果 治疗组滑落脚步数明显少于对照组（P〈0．05）；移植的HACs呈蓝色荧光；部分移植HACs可见MAP-2阳性表达。结论 移植HACs使大鼠TBI后运动功能明显改善。     

神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 研究神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的可行性。方法 取孕龄为12－16天的母鼠，从胎脑中分离神经细胞，进行培养、鉴定。用出生7天的SD大鼠的新生鼠制作缺氧缺血性脑损伤的动物模型，7天后接受神经干细胞移植（移植组，n＝16只），同时设置对照组，只注射磷酸缓冲液（对照组，n=8只），8－10周后，作Y迷宫实验检测大鼠的学习能力和记忆能力。取脑组织作免疫组织化学检查。结果 从大鼠胎脑中成功培养出神经干细胞，培养条件下呈悬浮状态生长，形成神经球，绝大多数的细胞表达神经干细胞的标志物神经巢蛋白（nestin）。接爱神经干细胞移植组大鼠的学习能力、记忆能力和对照组相比，有明显提高，差异具有显著性（P＜0.05）。接受神经干细胞移植大鼠组织中可见存活的移植细胞，并和宿主脑组织融合在一起。结论 在体外培养条件下，可从胎脑组织中培养出神经干细胞，移植到缺氧缺血性脑损伤大鼠脑内后，细胞与宿主的脑组织融合在一起，动物的学习、记忆能力有改善。移植神经干细胞是治疗缺氧缺知性脑损伤的有效方法之一。     

一种症状性大鼠脑损伤模型的建立

使撞击锤从一定高度下落通过撞杆损毁大脑皮层后肢运动区域，在TBI后的28d内采用钉板平衡木行走实验检测大鼠行为学变化，行为学测试结束后取脑组织检查组织结构的变化。结果：TBI组大鼠在TBI28d内的钉板平衡木行走测试中受损后肢功能障碍表现明显（与对照组比较，P〈0．05）；挫伤处大脑皮层坏死明显。结果表明：通过落体撞击法损伤大脑皮层后肢运动区域可成功建立一种症状性大鼠脑损伤模型。     

转基因小鼠高表达的FasL对Sertoli细胞免疫调节功能的影响

目的 :研究转基因小鼠高表达的FasL对Sertoli细胞在睾丸局部感染时的免疫调节作用的影响。方法 :将溶脲脲原体 (UU)分别注入FasL转基因及野生型小鼠膀胱 ,模拟上行性感染的途径。分别在感染后 1、2和 3wk处死小鼠 ,分离睾丸组织观察其病理变化 ,并用免疫组化染色法比较UU感染前后 ,Ser toli细胞上FasL和TGF β、IL 1α、IL 6的表达及分泌格局的差异。从野生型小鼠睾丸组织中分离高纯度的Sertoli细胞 ,与未感染UU的对照组相比 ,观察UU感染后FasL Sertoli细胞介导Fas Jurkat细胞的凋亡能力的变化。结果 :UU感染组的转基因小鼠 ,睾丸组织发生的病理改变比野生型更为明显 ;两种小鼠感染后Sertoli细胞分泌的调节因子变化格局不同 ;感染后Sertoli细胞对Jurkat细胞的杀伤能力增强。结论 :在抗感染免疫中 ,转基因表达的FasL可影响Sertoli细胞分泌细胞因子的格局 ,进而影响睾丸局部的免疫平衡。过高表达的FasL对机体的抗感染应答并非一定有利。     

皮肤来源的前体细胞培养和向神经元分化的观察

目的　研究皮肤来源的前体细胞 (SKPs)的体外培养方法 ,为神经移植提供一种新的细胞来源。方法　分离培养小鼠皮肤组织的细胞 ,在无血清的培养基中培养 ,用机械方法对细胞进行传代 ,免疫细胞化学方法对细胞进行鉴定。结果　从成年和幼年的小鼠皮肤组织中分离培养出SKPs ,这种细胞在体外可以长期增殖和传代 ,体外培养可超过 8代 ,这种细胞大部分表达纤维粘连蛋白 ,约50 %的细胞表达巢蛋白。在有血清的培养基中培养 ,约 5%的细胞分化为神经元样细胞 ,表达神经元特异性烯醇化酶和神经微丝 ,部分细胞分化为脂肪细胞 ,其余的细胞分化为成纤维细胞样细胞。结论　皮肤组织中存在的前体细胞可在体外稳定增殖 ,能够分化为神经细胞、脂肪细胞和成纤维细胞样细胞。这种前体细胞有潜力成为神经移植的一种细胞来源     

人羊膜细胞与创伤性脑组织提取液共培养的实验研究

目的 探究将人羊膜细胞(HACs)置于创伤性脑组织提取液的条件培养基中,模拟HACs在创伤性脑损伤微环境下的分化和增殖情况,为HACs脑内移植提供基础研究.方法 取无并发症剖官产羊膜,用0.25%胰酶反复消化3次提取HACs,接种后48h去除未贴壁的HACs.采用改进的Feeney法制作大鼠创伤性脑损伤(TBI)模型,TBI 24 h后制备创伤性脑组织提取液.将HACs分别接种于RPMI 1640培养基(1640)、RPMI 1640培养基与正常脑组织提取液(1640 NB)、RPMI 1640培养基与创伤件脑组织提取液(1640 TBI)3组.共培养7 d后HE染色显微镜下检测各组细胞形态.培养前后分别行Nestin和MAP-2单抗免疫组化检测.将HACs以104/ml密度分别接种上述3种培养基,培养后1、4和7 d经酶联免疫检测仪行四氮唑盐(MTT)比色法检测各组HACs活性.结果 1640组HACs呈圆形或椭圆形,核大居中;1640 TBI组部分HACs形态出现锥形、三角形等神经元样改变.HACs培养前可见Nestin阳性细胞,培养后1640 TBI组可见MAP-2阳性表达.各组HACs增殖性均不佳.结论 HACs与创伤性脑组织提取液共培养后可转化为神经元样细胞.HACs增殖性不佳.     

Angiostatin的分离纯化及对B16黑色素瘤的抑制作用

目的:研究Angiostatin对黑色素瘤的治疗作用.方法:从人血浆组分Ⅲ中用亲和层析的方法分离Plasminogen和通过离子交换层析和分子筛技术得到弹性蛋白酶纯品.经此酶分离Plasminogen进行有限酶解,产物经亲和层析分离得到Angio-statin.结果:体外实验表明,Angiostatin能显著抑制牛主动脉弓内皮细胞的增殖.体内实验发现,以0.6 mg/kg·d的剂量腹腔注射14d后,B16黑色素瘤生长抑制率达77%(P<0.05);以小鼠尾静脉注射的方法建立黑色素瘤转移模型,采用同样的方法冶疗18d后,B16黑色素瘤的肺转移率降低了65%(P<0.05).结论:本研究为Angiostatin用于黑色素瘤的治疗提供了实验依据,说明Angiostin在肿瘤治疗方面有着广泛的应用前景.     

表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤体内抑制作用

目的:研究表达Angiostatin基因的B16黑色素瘤的体内生长行为.方法:通过改造Plasminogen cDNA得到Angiostatin基因,构建成真核表达载体pAGAGS3后导入B16黑色素瘤细胞使其表达.结果:表达Angiostatin的B16黑色素瘤细胞体外生长速率和软琼脂中克隆形成能力均未改变.但接种小鼠26d后,体内生长抑制率达87%(P<0.01).结论:表达Angiostatin的B16黑色素瘤体内生长受到显著抑制.     

体外培养人类神经干细胞神经球中髓鞘的形成

目的：探索人类神经干细胞的体外培养条件和其形成的神经球的超微结构。方法：从胎脑皮质中机械分离细胞，N2培养基培养和扩增人类神经干细胞，应用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定。对形成的神经球应用透射电镜进行超微结构研究。结果：从胎儿的脑皮质中成功分离培养出神经干细胞，形成典型的神经球，大部分细胞表达神经干细胞的标志物波形蛋白，细胞贴壁后可诱导分化 为神经元和胶质。早期培养的神经球中有典型的髓鞘形成。结论：从胎儿的脑皮质中成功地分离、培养出人类的神经干细胞，细胞呈悬浮状态生长，形成神经球。这种早期培养的神经干细胞有形成髓鞘的能力，可作为治疗人类脱髓鞘病变的潜在细胞来源。     

表达胶质细胞源性神经生长因子的骨髓基质干细胞的神经分化潜能

有研究表明，骨髓基质干细胞(BMSC)可以向神经细胞分化，且易于获取，因此被认为是治疗中枢神经系统疾病理想的细胞载体。我们以胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)为目的基因，采用阳离子脂质体转染方法，对BMSC的基因工程化和神经分化潜能进行了初步研究。