滑膜间充质干细胞成纤维软骨分化条件初步探索

目的采用正交实验研究滑膜间充质干细胞(synovial derived MSCs,SMSCs)成纤维软骨分化的条件。方法 5只成年新西兰白兔,活检取滑膜组织。贴壁法获取SMSCs后采用流式细胞仪及成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定。根据预实验与文献综述寻找与SMSCs成纤维软骨分化可能相关的条件,采用缺失实验初筛必要条件后,TGF-β1、BMP-2、地塞米松、脯氨酸、柠檬酸(ascorbic acid,ASA)、丙酮酸、胰岛素+转铁蛋白+亚硒酸预混液、牛血清白蛋白、b FGF、间断静水压、BMP-7、IGF纳入正交实验,采用SPSS18.0统计软件设计L60(212)正交实验及表头,定义2水平条件,在SMSCs-三维小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)支架上诱导成纤维软骨分化。使用流式细胞仪计数,检测CD151+/CD44+细胞并记录SMSCs向纤维软骨分化的转换率,采用免疫组织化学染色,结合细胞形态、甲苯胺蓝染色、半定量RT-PCR检测SOX9、聚集蛋白聚糖、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、ColⅡ、ColⅨ基因表达,进一步验证结果。检验指标rate是CD151+/CD44+细胞与高表达ColⅠ细胞的比例乘积。同时采用Pico Green Assay测量细胞总DNA量,以反映细胞扩增情况。正交实验结果采用直观观察和主体间方差分析方法,考虑部分因子间的1阶交互作用,组间差异采用LSD和q检验验证,使用Ⅲ型平方和校正模型,检验水准α=0.05。结果实验获取的细胞为SMSCs,细胞倍增时间为28 h。成纤维软骨分化过程中SMSCs-三维SIS支架体积5 d倍增,14 d后得到甲苯胺蓝染色阳性的细胞-支架复合物。正交实验结果直观分析示,TGF-β1对成纤维软骨分化转化率的作用最明显,BMP-7采用水平2有利于得到更高的转化率,但与BMP-2存在交互作用;其余第1区组水平值加和高于22.5的因子有DEX、ASA、ITS、转铁蛋白、b FGF,模型的相关性好。方差分析校正模型P=0.000,能够满足实验设计;截距P=0.000,说明各因子对因变量影响差异不完全相同。TGF-β1、ASA、b FGF、IGF对因变量调控作用较其他因子显著,差异有统计学意义,与直观观察结果相似。结论 TGF-β1、ASA、b FGF、IGF显著影响SMSCs成纤维软骨分化,通过合理调整上述因子浓度,可显著提高SMSCs成纤维软骨分化转化率;精确的调控条件和调控机制有待进一步探索。     

男性泌尿生殖系感染的相关病原生物研究进展

男性生殖健康已日益受到人们的关注。许多病原生物与男性生殖系统感染、男性不育以及一些性传播疾病都密切相关。本文介绍4种重要的病原生物：支原体、沙眼衣原体、大肠杆菌和阴道毛滴虫。支原体中主要是溶脲脲原体(Uu),它是引起非淋菌性尿道炎     

儿童脑脊液漏引起枕骨板障内假性囊肿一例并文献复习

由于脑脊液漏产生的颅骨板障内囊肿非常罕见,成人和儿童均可发病,多数都有外伤史.目前国内鲜有报道,国外文献报道板障内液性囊肿约20余例.我院2012年收治1例无明确外伤史的小儿脑脊液漏继发枕骨板障内假性囊肿病例,现报告如下并作相关文献的复习.     

Kartogenin与软骨修复的研究进展

骨关节炎是一种由多因素引起的退行性病变,以关节软骨退化、关节边缘和软骨下骨反应性增生为特征,而干细胞用于软骨再生有良好的发展前景.目前,一种新的小分子化合物kartogenin(KGN)被发现,它拥有极强的促软骨分化能力,能有效地促进间充质干细胞向软骨细胞分化.当KGN可明显抑制白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)引起的细胞外基质和蛋白聚糖的减少,同时KGN对于促进软骨细胞分泌物lubricin的分泌与转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)具有协同作用,此外,KGN还促进腱-骨连接处形成软骨样组织,并且与壳聚糖结合的KGN较未结合的KGN成软骨能力更强.本文就KGN对于软骨修复的研究进展作一综述.     

Kartogenin与TGF-β3/BMP-2/DEX对兔滑膜间充质干细胞增殖及成软骨分化的对比研究

目的：比较Kartogenin（KGN）与转化生长因子β3（TGF?β3）/骨形态发生蛋白2（BMP?2）/地塞米松（DEX）对兔滑膜间充质干细胞（synovial?derived mesenchymal stem cells, SMSCs）增殖及成软骨分化的作用。方法于6~10月龄新西兰大白兔膝关节处滑膜中分离培养SMSCs,并进行鉴定。设置KGN组（采用KGN干预）、T/B/D组（TGF?β3/BMP?2/DEX联合干预）及空白对照组,采用PELLET系统培养法分别培养各组细胞。通过比较各组细胞的增殖速度、软骨微球的直径和重量、Ⅱ型胶原（Col?Ⅱ）表达情况、成软骨分化相关标志基因表达及蛋白质合成量等指标来评价KGN对SMSCs增殖及成软骨能力的影响。结果成功从兔膝关节滑膜分离出SMSCs;KGN组的SMSCs增殖能力弱于T/B/D组,但KGN组软骨微球直径最大,重量最重,Ⅱ型胶原合成量最多,且均显著高于其他组;PCR及Western Blot结果表明KGN组成软骨分化相关基因的表达最强,蛋白质合成量最多。结论 KGN不能明显增强SMSCs的增殖能力,但对SMSCs的成软骨分化能力强于TGF?β3/BMP?2/DEX,将来可能应用于修复软骨损伤。     

淀粉样前体蛋白调节神经干细胞增殖与分化的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种常见的脑退行性疾病,是导致老年前期和老年期痴呆的主要原因,其表现是进行性的记忆减退、认知障碍和人格改变.AD的主要病理学特征是在大脑海马区域和大脑皮层形成大量的老年斑(SP)和神经元纤维缠结(NFT)以及出现弥漫性脑萎缩.SP的主要成分是β-淀粉样多肽(Aβ),而淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)是Aβ的前体,因此一直吸引着研究者们对其在AD的病理过程中影响的研究,但对其在正常体内的生理意义却知道得不多.     

囊肿-腹腔分流术治疗儿童中线部位巨大蛛网膜囊肿

目的 总结囊肿-腹腔分流手术治疗儿童中线部位巨大蛛网膜囊肿的临床经验.方法 回顾性分析2005年1月至2011年12月应用囊肿-腹腔分流手术治疗的儿童中线部位巨大蛛网膜囊肿的临床资料,总结分析其发病特点合并畸形及预后情况.结果 17例患儿接受囊肿-腹腔分流手术,多因头围增大就诊或孕期超声发现囊肿,多伴有邻近脑组织的发育不良,可有一定程度的生长发育落后,经分流手术后症状消失,发育改善.结论 儿童中线部位巨大蛛网膜囊肿早期进行分流手术简单、有效,预后较好.     

肾上腺髓质素对人牙髓干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）对人牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）增殖、成牙本质分化能力的影响。方法 体外培养的人DPSCs传至第3代,培养液中加入不同浓度ADM（10^-6、10^-7及10^-8 mol/L）处理细胞24 h,并设置空白对照组。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,定量PCR和蛋白质印迹法检测成牙本质分化标记物碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的mRNA及蛋白表达。结果 细胞周期检测结果显示,3种浓度ADM干预DPSCs后G₂/S/M期细胞比例均较空白对照组上升（P<0.05）,但各干预组间差异无统计学意义; 细胞凋亡检测结果显示,3种浓度ADM干预组的Annexin Ⅴ⁺/PI^-标示细胞比例均较空白对照组下降（P<0.05）,但各干预组间差异无统计学意义; 定量PCR及蛋白质印迹检测结果显示,DPSCs中ALP mRNA及蛋白表达较空白对照组上升（P<0.01）,但各干预组间差异无统计学意义。结论 ADM具有促进DPSCs的增殖、抑制凋亡及促其向成牙本质分化的作用。     

儿科急诊6463例疾病谱特征调查分析

目的：了解儿科急诊疾病谱特点,提高儿科急诊医师的诊治水平和抢救成功率。方法i对2010—05—2011-05在我院儿科急诊就诊,随机选择诊断明确的6463例进行回顾性分析。结果：普通急诊患儿6172例（95．5％）,发病年龄集中在28d～3岁,共4532例（73．43％）,位列前五位疾病是上呼吸道感染4222例（68．41％）,支气管炎623例（10．09％）,腹泻病411例（6．66％）,胃肠炎271（4．39％）,支气管肺炎262例（4．24％）。重症急诊患儿291例（4．50％）,发病年龄也集中在28d～3岁,共245例（84．19％）,位列前5位疾病是重症肺炎99例（33．68％）,惊厥67例（23．02％）,腹泻病并脱水31例（11．00％）,哮喘持续状态16例（5．5％）,肺炎伴先心13例（4．47％）。结论：儿科急诊疾病谱以呼吸系统和消化系统常见的感染性疾病为主,发病年龄以婴幼儿居多,重症常继发休克、心力衰竭、呼吸衰竭而危及生命。应引起儿科急诊医生注意。     

体外条件下TGF-β3、BMP-2和DEX诱导兔滑膜间充质干细胞向软骨细胞谱系分化的研究

目的：本实验拟将分离纯化得到的滑膜间充质干细胞（ synovial-derived mesenchymal stem cells,SMSCs ）在体外培养条件下进行成软骨刺激诱导,并从转录和翻译两个水平寻找进入软骨细胞分化谱系的证据,进而判断转化生长因子β3（ transforming growth factor-β3,TGF-β3）、骨形态发生蛋白（ bone morphogenetic protein-2,BMP-2）和地塞米松（ dexamethasone,DEX ）诱导 SMSCs 进入软骨细胞分化谱系。方法贴壁法分离纯化得到 SMSCs,在体外培养条件下用含500 ng / ml BMP-2、10 ng / ml TGF-β3、10-7 M DEX 的高糖 DMEM 培养基进行刺激诱导,并在倒置相差显微镜下观察分化过程中其形态学的变化,以 RT-PCR检测I、II型胶原及软骨特异性Aggrecan （ AGN ）的mRNA表达,细胞免疫荧光化学染色的方法检测细胞分化过程中I、II型胶原的表达,碱性甲苯胺蓝细胞化学染色检测软骨特异性GAG的表达,证实SMSCs的诱导成软骨作用。结果 SMSCs在前述诱导条件下,诱导后14天细胞逐渐由小梭形变为多角形、类软骨细胞样形态,RT-PCR可以检测到I、II型胶原及AGN基因的表达,细胞免疫荧光化学染色I、II型胶原、碱性甲苯胺蓝细胞化学染色结果呈阳性。而未经诱导的SMSCs形态基本保持梭形,基因表达和染色呈阴性,两组间差异显著。细胞免疫荧光化学染色分析SMSCs在软骨诱导培养基中诱导后14天表达I、II型胶原;未经诱导的SMSCs不表达I、II型胶原。说明SMSCs在软骨诱导培养基中诱导后14天进入软骨细胞分化谱系,可作为种子细胞在同样的诱导条件下向软骨分化。结论 SMSCs作为新的MSCs家族成员,显示出与BMSCs相似的多向分化潜能,500 ng/ml BMP-2、10 ng/ml TGF-β3、10-7 M DEX的高糖DMEM培养基中培养后14天,SMSCs已进入软骨细胞分化谱系。SMSCs可作为半月板组织工程的种子细胞。