不同孕期羊水间充质干细胞体外培养方法的比较

背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB（-）,ACP、PAS、AENE（＋）,而NAP有1%为（＋）,不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈＂S＂形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡcomplete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。     

AQP4真核表达载体的构建和AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达

目的：构建水通道蛋白4（AQP4）真核表达载体pmCherry-N1-hAQP4-M23,检测AQP4-M23蛋白在中国仓鼠肺细胞系V79中的表达。方法：采用PCR方法扩增hAQP4-M23基因,经双酶切后与真核表达载体pmCherry-N1连接,构建pmCherry-N1-hAQP4-M23重组表达质粒。采用脂质体将其转染至V79细胞中,将细胞随机分为对照组（未转染重组质粒的V79细胞）和转染组（转染重组质粒的V79细胞）。利用RT-PCR法和荧光显微镜检测2组细胞中hAQP4-M23基因的表达;取视神经脊髓炎（NMO）患者血清中抗AQP4抗体,与2组细胞结合,采用免疫荧光和水通透性法检测2组细胞中hAQP4-M23的活性。结果：成功构建AQP4真核表达载体;荧光显微镜观察,转染组细胞膜清晰表达红色荧光;免疫荧光检测,转染组细胞膜呈现绿色荧光,表明转染组细胞膜AQP4-M23蛋白可与NMO患者血清成分结合;与对照组比较,转染组细胞中hAQP4-M23活性升高（P<0.05）。结论：成功构建表达AQP4基因的真核表达载体,并在V79细胞系中成功表达hAQP4-M23蛋白。     

FGFR3真核表达载体的构建及其在人白血病细胞系K562中的表达

目的：构建成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）真核表达载体MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN,并检测FGFR3蛋白在人白血病细胞系K562中的表达。方法:通过PCR法获得FGFR3全长基因（fgfr3-WT）和截短失活型的FGFR3（fgfr3-DN）,经双酶切后与真核表达载体MSCV/puro连接,构建MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组表达质粒。经PCR、双酶切及测序鉴定正确后,脂质体介导转染至人白血病细胞系K562中,经puromycin抗性筛选后,Western blotting法和流式细胞术检测细胞中FGFR3蛋白的表达。结果：PCR法鉴定MSCV/puro-fgfr3-WT和MSCV/puro-fgfr3-DN重组质粒,2个质粒分别扩增出2　400 bp的fgfr3-WT全长基因片段和1　200 bp的fgfr3-DN截短型片段,表明成功扩增fgfr3-WT全长基因和1　200 bp的fgfr3-DN基因;双酶切MS
CV/puro-fgfr3-WT重组质粒,获得2　400 bp的目的基因片段;测序显示,fgfr3-WT片段大小为2　400 bp,Blast对比分析表明测序结果与GenBank中的FGFR3序列完全一致。fgfr3-DN片段大小与预先设计的序列完全一致,表明成功构建野生型FGFR3和突变失活型FGFR3真核表达载体;Western blotting 检测,与对照组（K562-MSCV）比较,MSCV/puro-fgfr3-WT转染组（K562-WT）FGFR3蛋白表达水平增加,表达水平是对照组的10倍以上;MSCV/puro-fgfr3-DN转染组（K562-DN）的截短型的FGFR3（K562-DN）高表达,而对照组和K562-WT转染组则无此片段;流式细胞术检测,K562-WT组有57.5%的细胞高表达FGFR3,K562-DN组有41.5%的细胞高表达FGFR3-DN。结论：成功构建高表达野生型和突变型FGFR3的人白血病细胞系K562。     

生物化学检验实验教学改革,提高学生创新能力

临床生物化学检验是医学检验专业的主干专业课程之一,为培养具备创新能力,具有高尚医德医风的临床检验人员,修改实验教学计划与大纲、改革实验教学培养学生的创新实践能力。     

复合因素法致大鼠肝纤维化模型的建立

目的探讨一种新的制备肝纤维化动物模型的方法,为下一步研究肝纤维化发生机制、治疗方案提供稳定、可靠的动物模型。方法将80只雄性Wistar大鼠随机分成两组,对照组腹腔内注射橄榄油2 mL/kg,2次/周,并给予普通饮水及饲料。模型组采用腹腔注射猪血清+四氯化碳(CCl4)+高脂低蛋白饲料(10%猪油、2%胆固醇)+普通饲料+乙醇进行诱导。共8周,实验结束进行肝功能生化指标测定及病理学观察并加以评估。结果模型组70只,造模结束时死亡10只,死亡率14.3%。血清ALT、AST、ALP、GGT和Hyp与正常对照组有显著性差异(P<0.01),病理切片均可看到明显的肝纤维化形成,造模成功60只,成模率85.7%。对照组10只全存活。结论该方法可成功建立肝纤维化模型,为实验研究应用。     

不同孕期羊水间充质干细胞体外培养方法的比较

背景：以往对羊水间充质干细胞的培养多采集孕中期羊水,对妊娠其他阶段羊水进行间充质干细胞培养的研究还很少,特别是系统地对不同孕期羊水和不同培养基进行间充质干细胞培养的效果还未见报道。 目的：比较不同孕期羊水中间充质干细胞体外培养的效果。 方法：采用两种不同细胞培养基分别对60份妊娠时间为15~42周的羊水进行间充质干细胞的分离培养,观察间充质干细胞培养过程中生长状况及间充质干细胞培养成功率;细胞化学染色法检测间充质干细胞的化学性质;MTT法检测传代后间充质干细胞的生长曲线。 结果与结论：采用含体积分数为10%胎牛血清的PRMI-1640培养基和AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基对孕期为37~42周羊水的间充质干细胞培养成功率分别为8%和44%,孕期为21~36周羊水的间充质干细胞成功率分别为20%和60%。而孕期为15~20周的羊水用两种培养基培养成功率为100%。细胞化学染色结果显示：POX、SB(-),ACP、PAS、AENE(+),而NAP有1%为(+),不同孕期染色结果无差异。MTT法测定羊水间充质干细胞的生长曲线呈“S”形。孕期在15~36周的羊水间充质干细胞可以传15代以上仍然旺盛,而孕期为37~42周的羊水间充质干细胞传10代即表现为生长缓慢。结果表明采用AmnioMAXⅡ complete羊水专用细胞培养基可以明显提高晚期羊水间充质干细胞培养的成功率。羊水的最佳采集时间为15~20周。     

人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的人参皂甙单体Rg3,并设置空白对照组.用MTT比色法观察Rg3对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度人参皂甙单体Rg3对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR);硝基四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力测定试验检测分化指标;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱.结果 MTT比色法测定显示,人参皂甙单体Rg3作用于K562细胞后可以抑制其增殖并诱导其凋亡,且呈剂量依赖性.结论 人参皂甙单体Rg3能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

温补脾肾经验方治疗视神经脊髓炎谱系疾病作用机制的网络药理学分析

目的：通过网络药理学分析和动物实验探讨温补脾肾经验方（TSKEP）治疗视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）的潜在作用靶点和信号通路,为治疗NMOSD提供理论依据。方法：采用中药系统药理学数据库及分析平台（TCMSP）筛选TSKEP的化合物和靶点,通过GendCard等数据库确定NMOSD的相关靶点基因;构建化合物-靶点网络确定核心化合物;利用STRING数据库和Cytoscape 3.6. 0软件中的Network Analyzer插件获得蛋白-蛋白互作（PPI）网络的拓扑参数并识别核心靶点;利用OmicShare平台对核心靶点进行基因本体论（GO）功能注释分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析并构建靶点-通路网络,以识别关键的生物过程和信号通路;基于AutoDock软件对核心化合物和核心靶点进行分子对接。18只小鼠分为对照组、NMOSD组和TSKEP组,每组6只,HE染色观察3组小鼠大脑组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清中相关细胞因子水平。结果：动物实验,TSKEP组小鼠神经功能缺损评分与NMOSD组比较明显降低（P<0.01）,同...     

微波照射对大鼠造血系统影响的实验研究

目的探讨微波照射对大鼠造血系统影响的程度和时相性。方法采用血细胞分析和瑞姬氏染色的方法对不同微波辐射剂量照射组的Wistar大鼠在不同时间段(1天、7天、14天)的外周血细胞及骨髓象进行分析。结果微波照射组大鼠血液中的各种细胞参数相对于空白对照组有不同的改变,骨髓象破坏现象明显;以辐射剂量为200 mW/cm2照射后的第7d改变更为显著。而第14d时除WBC、LY#、MID#、N#升高,PLT和PCT仍然减低外其他参数均恢复至空白对照组。结论微波辐射对大鼠的血液系统有影响,且随着辐射剂量的加大,影响越显著。     

林蛙油对大鼠肝纤维化的影响

目的 探讨林蛙油对大鼠肝纤维化的治疗效果.方法 用林蛙油治疗CCl4诱导的肝纤维化模型,观察它对肝细胞实验室检查及氧化和抗氧化能力指标的影响.结果 林蛙油能降低肝纤维化大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨基转移酶(GGT)、羟脯氨酸(Hyp)及丙二醛(MAD),增加超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px).结论 林蛙油能改善其肝脏损伤程度,减少肝纤维化大鼠肝组织中胶原的增生,增加抗氧化能力,延缓肝硬化的形成,对大鼠肝纤维化有很好的治疗作用.