复合珊瑚羟基磷灰石人工骨的研制及其成骨效应

目的 自行研制复合珊瑚羟基磷灰石人工骨并评估其成骨效应。方法 取南海澄黄滨珊瑚碳酸钙在特定条件下经过“热液交换反应”，制成单纯珊瑚羟基磷灰石(coralline Hydroxyapatite，CHA)人工骨，并将其与基因重组骨形态发生蛋白(rhBMP2)和几丁糖复合制成了三种复合珊瑚羟基磷灰石(composite Coralline Hydroxyapatite，CCHA)人工骨，将此三种不同配型的复合人工骨和单纯CHA人工骨分别植入四组24只SD大白鼠肌肉内。手术后2、4、6、8周取材进行组织学观察，计数高倍单位视野内的成骨细胞数量和炎性细胞数量。采用SPSS8.0统计软件处理系统分析。结果 术后各时期取材结果显示：B组(CHA rhBMP2)和D组(CHA rhBM2P 几丁糖)的单位视野内成骨细胞数量明显多于A组(单纯CHA)和C组(CHA 几丁糖)：而C组和D组的单位视野内炎性细胞数量明显少于A组和B组。即D组人工骨的单位视野内的成骨细胞数量多、炎性细胞少。结论 rhBMP2-几丁糖／CHA复合人工骨不但具有显著的成骨诱导作用，还具有炎症反应轻及持续的诱导成骨作用，是一良好的骨移植替代物。     

中药升降胶囊对大鼠胃排空的影响

[目的]观察中药升降胶囊对大鼠胃排空的影响,并从红细胞乙酰胆碱酯酶活性和血浆胃动素(Mot)、生长抑素(SS)方面探讨其作用机制。[方法]将8周龄的SD大鼠随机分成B组(升降胶囊高剂量组),C组(升降胶囊低剂量组),D组(枳壳白术组),A组(正常对照组)和E组(西沙比利组)。用药10d后用同位素法检测其胃排空功能,微量羟胺法检测其红细胞乙酰胆碱酯酶活性,放免法检测其血浆Mot和SS。[结果]B、C、D组30min胃排空率分别为(51.44±6.38)%、(40.82±7.24)%和(40.22±7.16%,均高于八组的(33.18±6.32)%;3组红细胞乙酰胆碱酯酶活性、MOT和SS分别为:B组(0.856±0.128)μmol/h,(124.26±25.94)ng/L和(39.42±7.%)ng/L,C组(0.726±0.164)μmol/h,(119.86±29.38)ng/L和(38.33±7.64)ng/L,均高于A组的(0.576 ± 0.150)μmol/h,(91.28±26.84)ng/L和(28.22±7.68)ng/L。[结论]升降胶囊可促进胃排空,其机制可能与增强胆碱能神经功能及提高血浆Mot和SS水平有关。     

红景天拮抗脉冲噪声所致豚鼠听力损伤的实验研究

目的　探讨红景天对噪声所致豚鼠听力损伤的拮抗作用。方法　将40只豚鼠随机分为四组，每组10只。第1组（实验对照组），噪声暴露前3天给予安慰剂淀粉片处理；第2组（实验组），噪声暴露前3天给予诺迪康胶囊处理，第1组和第2组同时暴露在相同条件的脉冲噪声中；第3组（红景天组），只给予3天诺迪康胶囊预处理，不做其他处 理；第4组（生理盐水组），只给予3天生理盐水预处理，不做其他处理。采用听性脑干反应（ABR）、扫描电镜、酶联免疫吸附测定（ELISA）法比较4个组豚鼠实验前后听阈变化、观察耳蜗毛细胞纤毛变化情况及检测耳蜗中半胱天冬酶-3（caspase-3）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia induciblefactor-1α，HIF-1α）和4-羟基壬稀酸（4-hydroxynonenal，4-HNE）表达情况。结果　实验前4个组豚鼠听阈比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验后24小时，第1组与第2组豚鼠听阈比较差异有统计学意义（t =21.675，P＜0.05），第3组和第4组豚鼠听阈比较差异无统计学意义（P＞0.05）。实验前后第1组和第2组听阈相差20 dB，差异有统计学意义（t 第1组=-39.000，t 第2组=-24.187，P 均＜0.05）。第1组高倍镜下见耳蜗外毛细胞纤毛大片缺失，第2组发现外毛细胞纤毛呈个别、散在缺失，第3组和第4组外毛细胞纤毛未见明显损伤；4个组豚鼠内毛细胞纤毛均未见缺失。4个组间caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达比较，差异有统计学意义（F =24.674、90.258和51.663，P 均＜0.05)；第1组和第2组 caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达显著高于第3组和第4组，差异有统计学意义（caspase-3：t 第1、3组=6.624，t 第1、4组=6.685，t 第2、3组=4.658，t 第2、4组=4.844；HIF-1α：t 第1、3组=14.697，t 第1、4组=11.895，t 第2、3组=7.060，t 第2、4组=4.938；4-HNE：t 第1、3组=9.188，t 第1、4组=11.261，t 第2、3组=4.974，t 第2、4组=6.484，P 均＜0.05），且第1组的caspase-3、HIF-1α和4-HNE表达较第2组升高，差异有统计学意义（t caspase-3=2.607，t HIF-1α=7.598， t 4-HNE=4.433，P 均＜0.05）。结论　红景天能显著降低脉冲噪声暴露后ABR听阈，降低耳蜗中caspase-3、HIF-1α和4-HNE浓度，减轻耳蜗外毛细胞纤毛缺失，从而减轻听力损伤。     

SPF级新西兰兔脏器参数、血液指标、颈动脉血压、心率、心室压的测定与比较

目的 准确测定SPF新西兰兔生物学特性尤其是疾病相关的指标,并进行性别间比较。 方法 取70-80日龄左右SPF新西兰兔30只,饲养一周后,精确称量体重及主要脏器重量;采集动脉血测定血液生理、生化、血气指标;颈动脉插管测定动脉压,呼吸支持情况下进行开胸测定心室压。 结果 雄性与雌性新西兰兔比较： 甲状腺、肾上腺、肝的质量差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;脑、脑垂体、甲状腺的脏器系数差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;甲状腺、肾上腺、肝的脏脑比系数差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）。红细胞平均体积、平均血红蛋白量的差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;谷氨酰转肽酶、淀粉酶的差异有显著性意义（P＜0.05或P＜0.01）;血气分析、心率、颈动脉收缩/舒张压,左心室收缩/舒张压,右心室收缩/舒张压不存在性别间差异。 结论 性别对新西兰兔脏器重量及血液生理生化指标有一定影响,而血气、血压、心率及心室压等不存在性别间差异。     

环丙氟哌酸在犬胆汁、血中药代动力学的研究

为了有效治疗胆道感染的病人，提供合理选择抗生素的理论依据，我们检测了犬经口给予环丙氟哌酸后在胆汁及血中的药代动力学变化规律。结果表明犬经口给予0．25克环丙氟哌酸后，胆汁中浓度能较快上升，0．91h达峰值时间；峰值浓度为(Cmax)为11．8μg／ml，仅略低于血中的峰值浓度(14．36μg／m1)；半衰期(T1／2β)较长为7．66h．是血中半衰期(T1／2β)3．31h的2倍；清除率(CL)是30ml／min；表观分布容积为19．88L。由于经口给予环丙氟哌酸后，药物在胆汁中含量较高，半衰期长，所以，急、慢性胆道感染时该药是较为理想的口服抗生素之一。     

重组人BMP-2生物活性的鉴定

目的鉴定在大肠杆菌中表达的重组人骨形态发生蛋白2（recombinant human bone morphogeneticprotein-2,rhBMP-2）的生物学活性。方法构建重组人BMP-2的原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,纯化复性后,采用细胞及动物实验对其生物活性进行鉴定。结果细胞实验表明,重组人BMP-2具有诱导MC3T3-E1前成骨细胞向成骨细胞分化的特性。动物实验显示,重组人BMP-2在大鼠肌肉内具有诱导异位成骨功能。结论制备的重组人BMP-2具有较好的生物学活性。     

缺血性老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化

背景：神经生长因子(nerve growth factor，NGF)在神经元的生长、存活、分化、保护神经元的退行性改变及神经损伤的自我保护与修复中具有重要作用，目前NGF保护神经元的分子病理学机制还有许多需要深入探讨的。目的：观察脑缺血老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化。设计：完全随机对照实验研究。地点与材料：本研究的地点为广州军区广州总医院实验科：材料为36只SD大鼠2～2．5年龄，雌雄不限。干预：用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型，将SD大鼠随机分成正常对照组(A组)、假手术组(B组)、缺血30min再灌注6h(C组)、12h(D组)、24h(E组)、48h(F组)、7d(G组)和14d(H组)，用免疫组织化学ABC染色法检测部分脑区神经元及小脑NGF的表达。在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化。主要观察指标：各组神经元NGF表达定性及定量观察。结果：除A、B组外，各组顶叶皮质神经元均有NGF表达，其中E组和G组中量表达，神经元数量分别为(58．4&;#177;9．18)mm^2和(56．2&;#177;10．87)mm^2；除A组、B组、F组和H组外各组海马均有少量表达，神经元数量C组为(28．8&;#177;6．42)mm^2、D组(30．4&;#177;12．12)mm^2、E组(24．2&;#177;5．18)mm^2、G组(15．6&;#177;4．39)mm^2；小脑均没有表达；再灌注超过48h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重，顶叶皮质神经元轻度水肿；结论：老年大鼠在受到缺血性脑损伤时，内源性NGF在大脑皮质和海马有部分表达，小脑始终没有表达。内源性NGF对脑组织具有一定的保护作用，早期注射外源性NGF可能对脑组织损伤后修复具有重要意义。     

骨唾液酸蛋白在体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的角色

目的：骨唾液酸蛋白在骨矿化形成方面扮演重要角色，实验观察其是否能诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法：实验于2005—10／2006—12在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。①材料来源：选取在本院体检的健康志愿者2人，对本实验均知情同意。采用Ni-NTA亲和纯化技术，从本室构建的毕赤酵母GS115／pPICZaA-hbsp发酵上清中纯化重组人骨唾液酸蛋白。②实验方法：对健康志愿者进行髂骨穿刺抽取骨髓液，采用贴壁法培养得到骨髓间充质干细胞。设立4组：骨唾液酸蛋白组添加0．1nmol／L骨唾液酸蛋白；成骨诱导液组添加10nmol／L地塞米松、10mmol／L磷酸甘油、50mg／L抗坏血酸；联合组添加上述两组的所有试剂；空白对照组不添加任何处理因素；各组均处理细胞12d。⑧实验评估：光镜及电镜观察培养的细胞形态；以细胞计数法测定生长曲线，应用流式细胞仪分析细胞周期，采用免疫荧光细胞化学法和流式细胞分析检测干细胞标志物STRO-1的表达；生化试剂盒测定碱性磷酸酶活性；von Kossa染色法检测钙沉积。结果：①单个骨髓间充质干细胞为长梭形，经骨唾液酸蛋白处理后细胞大而扁平，原来密集的克隆分散开。②与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组引起细胞生长曲线右移，细胞Go／G，期比例平均增加12．09％（P〈0．01），S期比例减少65．92％（P〈0．01），STRO-1阳性细胞百分率下降26．54％（P〈0．01）。⑧与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组细胞碱性磷酸酶活性增加50．0％，成骨诱导液组增加59．5％，联合组增加71．43％，并且随着处理时间的延长，活性增加越显著。④空白对照组细胞vonKossa染色呈阴性，其余各组均呈阳性。其中联合组的黑色矿化结节体积最大、数目最多；骨唾液酸蛋白组的结节体积较小、数目较少；成骨诱导液组居中。结论：骨唾液酸蛋白对人骨髓间充质干细胞有促进成骨分化和矿化作用，且与成骨诱导液联用效果更佳。     

安可梦口服液对慢性疲劳小鼠免疫调节功能的影响

目的:探讨中药复方制剂安可梦口服液治疗慢性疲劳综合征的作用机制。方法:选用BALB/c小鼠,应用强制冷水游泳加进食时电击复合应激因素建立慢性疲劳动物模型,除正常组(n=12)外,成模小鼠分为4组:模型组、复方阿胶浆组犤50g/(kg·d)复方阿胶浆灌胃犦、安可梦口服液小剂量组和大剂量组犤分别以25g/(kg·d)和50g/(kg·d)安可梦口服液灌胃犦,每组12只。正常及模型组灌胃生理盐水0.5mL。各组灌胃2次/d,连续14d。对各组动物白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、干扰素、自然杀伤细胞的活性进行了检测。结果:模型组的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性比正常组显著降低,差异有显著性(q=12.88,P<0.01);安可梦口服液大、小剂量组的IL-2、干扰素、自然杀伤细胞活性与模型组比较均有显著升高,差异有显著性(q=10.06,8.28;P均<0.01),且作用优于复方阿胶浆组(q=6.68,2.12;P<0.05～0.01)。结论:提高和调整机体低下的IL-2-干扰素-自然杀伤细胞免疫调节网水平,可能是安可梦口服液发挥滋补肝肾、健脾养心、安神定志功效,治疗慢性疲劳综合征的机制之一。     

高温高湿环境下战创伤创面模型的建立

目的建立高温高湿环境下猪战伤后创面的动物模型,以供对爆炸伤引起的战伤慢性创面病理生理以及修复治疗进行研究。方法选用藏香猪8头,采用KTY-08型瞬发纸质雷管的爆炸源模拟爆炸冲击波,制作猪的两侧臀部战创伤创面,共计16个创面。致伤后随机分为两组,即常温常湿组（对照组）：气温（Ta）（22．0±0．5）℃,相对湿度（RH）50％;高温高湿组：Ta（39．0±0．5）℃,RH8I）％～85％。每组4只,观察伤后不同时间段创面的大体、病理切片变化及创面愈合时间。结果创面大小平均为（6．0±0．9）cmX（6．5±1．2）cm×（1．5±0．3）cm,12h后高温高湿组较常温常湿组创面明显扩大,有感染征象,第21天时创面愈合率为0,第28天时愈合率为12．5％（1／8）。常温常湿组24h后出现明显感染,第21天后创面完全愈合,愈合率100％。结论藏香猪臀部战创伤创面模型创面面积大,未伤及骨组织,动物可长期存活,且皮肤结构及创面愈合与人类相似,是高温高湿环境下良好的战创伤创面动物模型。