柴苓小方对大鼠肾小球系膜细胞异常增殖的影响

目的：探讨柴苓小方对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）异常增殖的影响及相关机制。方法：采用脂多糖刺激系膜细胞异常增殖。MTT法检测柴苓小方对㈣异常增殖的影响；免疫细胞化学方法检测药物作用后增殖细胞核抗原（PCNA）的表达；乳酸脱氢酶释放实验检测柴苓小方的细胞毒作用。采用RT—PCR检测药物作用不同时间点细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的表达。结果：柴苓小方可以剂量依赖性的抑制系膜细胞异常增殖并显著减少PCNA阳性细胞数而没有明显的细胞毒作用。并且柴苓小方可以显著地上调p21基因的表达（P〈0．05）。结论：柴苓小方可剂量依赖性的抑制GMC8异常增殖．其机制可能与上调p21mRNA表达有关。     

糖尿病肾病ETFβ表达变化与脂毒性关系研究

目的 通过检测ETFβ在糖尿病肾病中的改变, 探讨其与脂毒性的关系。方法 体内实验采用腹腔注射链脲佐菌素合并单侧肾切除建立糖尿病肾病模型, 并评价肾小管损伤情况, 检测ETFβ在肾皮质中的表达变化。体外建立脂肪酸诱导肾小管细胞NRK 52E凋亡模型, 构建ETFβ重组质粒, 并将其转染至NRK 52E细胞, 观察ETFβ过表达对脂肪酸诱导细胞凋亡的作用。结果 链脲佐菌素合并单侧肾切除诱导的糖尿病肾病大鼠模型中, 肾小管明显损伤, ETFβ mRNA 和蛋白表达均下降。脂肪酸可诱导NRK 52E细胞凋亡, 过表达ETFβ可减少凋亡。结论 糖尿病肾病模型中ETFβ表达下降, 过表达ETFβ可降低脂肪酸诱导的肾小管细胞凋亡。     

二甲双胍对2型糖尿病伴非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用研究

目的 观察二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)伴非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝功能及肝组织病理形态学的影响,并探讨其可能的作用机制. 方法 按随机数字表法将36只Wistar大鼠分成正常组(12只)和造模组(24只),采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高脂饲料喂养建立T2DM伴NAFLD模型. 将造模成功的大鼠随机分为单纯模型组(14 只)和二甲双胍组(10只),比较各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白胆固醇 (LDLC-)水平,肝组织TG、CHO、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)水平. 结果 与正常对照组比较,单纯模型组血清ALT、AST、TG、CHO、LDL-C水平均显著升高(P<0.05);肝组织TG、CHO、NO、NOS水平显著升高(P<0.05),SOD及CAT水平降低(P<0 0.5 ). 与单纯模型组比较,二甲双胍组血清ALT、AST、TG、CHO、LDL-C 水平均显著降低(P <0.05),肝组织 TG、CHO、NO、NOS 水平显著降低(P<0.05);SOD 及CAT水平升高(P<0.05). 结论 二甲双胍治疗可显著改善T2DM伴NAFLD大鼠的脂肪肝,其机制可能与二甲双胍改善肝脏组织应激有关.     

人参皂苷Rb1和Re对乌头碱所致心肌细胞损伤的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1和Re对乌头碱导致的心肌细胞损伤的影响。方法选用乳鼠心肌细胞,观察人参皂苷Rb1和Re分别与乌头碱配伍使用后,乳鼠心肌细胞上清心肌酶谱的改变,采用RT-PCR的方法,观察人参皂苷Rb1和Re与乌头碱配伍对心肌细胞钙离子通道基因Cav1.2 mRNA的影响。结果人参皂苷Rb1和Re可以有效对抗由乌头碱导致的心肌酶谱改变。同时,可以对抗乌头碱所致的钙离子通道基因Cav1.2 mRNA表达上调。结论人参皂苷Rb1和Re与乌头碱配伍具有减毒增效的作用,这可能与人参皂苷减轻了乌头碱所致的心肌细胞损伤和改善钙离子通道异常表达有关。     

大鼠Uqcrfs1重组质粒的构建及其在HEK293T细胞中的表达

目的:构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达。方法:应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码Uqcrfs1的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定及测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK 293T细胞,使用RT-PCR、Western Blot方法检测重组质粒在转录及蛋白水平的表达。结果:测序结果证实PCR扩增得到编码Uqcrfs1的cDNA序列正确;磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,在基因转录与蛋白表达水平,结果达到预期。结论:成功构建大鼠Uqcrfs1的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达。     

应用红外热成像技术辨析疼痛性质和发病机制

目的 应用红外热成像技术辨析不明疼痛的性质,探讨疼痛发病机制和分型.方法 应用红外热成像技术并与风湿因子和X线片、CT相对照.观察健康者、湿寒、血循环障碍、无菌炎症、微循环障碍、混合型(寒、瘀并存)患者各40例,男女各半,年龄均在23-65岁.结果 湿寒组痛区图温低于其他组、图像呈深蓝色;血循环障碍组痛区图温高于湿寒组...     

切应力和TNF-α调节人血管内皮细胞质膜微囊蛋白的表达

目的：质膜微囊蛋白（caveolin）是细胞质膜微囊的主要结构蛋白，研究显示caveolin可与多种信号分子相互作用，在细胞信号转导和多种疾病的发生中有重要意义。本研究观察切应力和肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人主动脉内皮细胞（HAECs）caveolin-1表达的调节作用。 方法： 使用培养的3-5代HAECs细胞，采用平行板流动室，产生切应力为1.0 Pa的稳定流动环境。内皮细胞经切应力和TNF-α刺激不同时间后，采用Western blot和RT-PCR测定caveolin-1蛋白和mRNA表达的变化。 结果： 1.0 Pa切应力作用24 h可明显引起caveolin-1蛋白和mRNA表达的下调，尤其是mRNA表达的下调（P<0.05）。1 h和4 h的切应力刺激可以引起caveolin-1 mRNA表达的明显下调（P<0.05），但4 h时caveolin-1蛋白表达尚没有明显下降。24 h TNF-α刺激可以引起caveolin-1蛋白和mRNA表达的明显下调（P<0.05）。 结论： 切应力和TNF-α可以抑制caveolin-1 mRNA和蛋白表达，这种改变可能会影响动脉粥样硬化斑块的形成。     

Decorin基因过表达对HEK 293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达的影响

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达的影响。方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl转录水平及翻译水平的表达。结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中。Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达。RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-II的翻译水平均显著降低。结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclinl表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础。     

甘草苷对乌头碱致心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察甘草苷对乌头碱导致心肌细胞损伤的保护作用并探讨相关机制。方法:利用原代培养的乳鼠心肌细胞,观察甘草苷对乌头碱引起的心肌细胞释放乳酸脱氢酶(LDH)的影响;采用RT-PCR的方法,观察甘草苷与乌头碱配伍后对心肌细胞钙离子通道编码基因Cav1.2 mRNA以及钾离子通道编码基因Kv4.3 mRNA表达的调控作用,半定量分析甘草苷与乌头碱配伍对上述离子通道基因表达的影响。结果:甘草苷可以减低由乌头碱导致的大鼠心肌细胞LDH释放;可以拮抗由乌头碱引起的Cavl.2基因的mRNA表达升高,和Kv4.3基因的mRNA表达的降低。结论:甘草苷与乌头碱配伍可以减轻乌头碱的毒性作用,这可能与甘草苷改善了乌头碱对心肌细胞钾、钙离子通道编码基因的异常表达有关。     

甘草苷及人参皂苷对乌头碱导致心肌细胞离子通道mRNA表达变化的影响

目的:观察乌头碱对心肌细胞钠、钾、钙通道mRNA表达的影响,并观察甘草苷、人参皂苷Rg1、Rb1、Re对乌头碱的减毒作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞分为正常组、乌头碱组以及乌头碱与甘草苷、人参皂苷Rg1、Rb1和Re配伍组,培养8h.Trizol法提取RNA,逆转录-聚合酶链反应方法观察SCN5A.Kv4.3及Cav1.2离子通道基因mRNA的表达,半定量分析这些药物与乌头碱配伍对上述离子通道基因表达的影响.结果:乌头碱组SCN5A及Cav1.2基因的mRNA水平较对照组明显升高(P＜0.01),而Kv4.3基因的mRNA水平较对照组显著降低(P＜0.01).甘草苷、人参皂苷Rg1、Rb1和Re对乌头碱的这些作用有不同程度的拮抗.结论:甘草苷和人参皂苷Rg1、Rb1和Re与乌头碱配伍具有减毒增效的作用,这可能与他们改善了乌头碱对心肌细胞钾、钠、钙离子通道编码基因的异常表达有关.