半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Q热立克次体的16S和23S rRNA基因及其间区的序列。设计3条引物,建立了扩增16S－23S mRNA基因间区的半套式PCR方法,并将扩增片段制成探针,建立了斑点杂交技术。结果 10株Q热立克次体分离株均可扩增出572bp的PCR条带,而对照菌都为阴性,此半套式PCR方法的灵敏度高达1pg;用九里株扩增片段标记后制成的探针,与10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,此杂交方法的灵敏度为0．5ng。结论 基于Q热立克次体16S－23S rRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度,可联合应用于Q热的病原学诊断。     

睾丸高表达蛋白质HSD-14对小鼠精子发生的影响

目的 研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响.方法 利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因.纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体.通过HE染色观察腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后小鼠睾丸组织的生精变化,并进行TUNEL凋亡检测.结果 电子克隆获得HSD-14基因,在原核表达系统中表达成功.小鼠腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后,均发现曲细精管中生精细胞大量脱落,生精细胞的层次紊乱,管腔内有时可见成团脱落的生精细胞,附睾中几乎观察不到成熟精子.TUNEL凋亡检测结果表明,抗体注射组小鼠曲细精管中生精细胞(以精母细胞为主)凋亡程度较正常小鼠睾丸和免疫前血清注射组明显,且多数细胞停留在精母细胞甚至精原细胞的阶段.结论 HSD-14通过诱导精母细胞凋亡抑制小鼠精子发生.     

临床医学七年制微生物学实验课的改革与实践

为了培养学生的动手能力、综合分析问题和解决问题的能力，我们对临床医学七年制微生物学实验课教学大纲、教学计划、教学内容及教学方法进行较系统改革。使实验课形成一门独立的微生物学实验技能课，在微生物学理论课上完后集中授课；增删重组实验内容，压缩印证性实验，增加综合性和探索性实验内容；实验课强调预习，材料尽量让学生自己准备，自己规划安排实验。教员加强实验指导，随时纠正操作上的错误，严格要求，严格训练。要求写出论式实验报告；在老师的指导下设计探索性实验，对确实合理而且有意义的课题，学校给予一定的资助在课余时间完成。实验效果初步证明，我们的实验教学改革可以保证实验教学的整体性和连续性，有利于培养学生动手能力和对科学研究的兴趣，有利于调动学生的学习积极性。     

PCR-SSCP分析Q热立克次体中国分离株16S-23S rDNA基因间区

目的 建立快速分析Q热立克次体分离株16S-23S rDNA基因间区株间差异的PCR-SSCP方法。方法 用半套式PCR扩增7株中国分离株（七医、新桥、雅安、李、YS-8、YS-9和YH-11）和3株国际参考株（九里、Henzerling和Grita）的16S-23S rDNA基因间区,对扩增产物进行PCR-SSCP分析。结果 3株云南分离株（YS-8,YS-9和YH-11）与其它7株之间的差异较大。与此区域的序列分析结果一致。结论 Q热立克次体分离株的16S-23S rRNA基因间区由于适应不同的地理环境可发生变异,PCR-SSCP是快速分析这些变异的有效方法。     

Q热立克次体17kD外膜蛋白基因的克隆与表达

Ｑ热立克次体１７ｋＤ外膜蛋白基因的克隆与表达余全俞树荣胡廷徽Ｑ热立克次体外膜蛋白在其致病、诊断及亚单位疫苗的研制中有重要意义。在建立Ｑ热立克次体中国分离株（七医株）基因表达文库的基础上，将七医株多价血清经连接有大肠杆菌Ｙ１０９０裂解上清的Ｓｅｐｈａｒ...     

原代培养肝细胞对登革病毒易感性的研究

目的 探讨登革病毒在原代肝细胞中的增殖规律及感染后肝细胞损伤特点。方法以Ⅱ型登革病毒感染原代肝细胞,采用空斑试验、生化方法和形态学方法检测病毒在细胞内的增殖及肝细胞损伤特点。结果感染后2～6d的培养上清液内均可检测到较高的病毒滴度,波动在10^5-10^6／mL。免疫荧光染色发现：感染早期细胞内有少量的病毒抗原,在核周分布,感染晚期细胞内病毒抗原量明显增多,阳性反应呈斑块状,分布在核周和胞浆内。登革病毒感染后,培养上清液中3种肝细胞分泌酶也有不同程度的变化,以乳酸脱氢酶变化最为明显,感染后1d,即呈现少许上升趋势,以后逐渐上升,7d达峰值,为20．75U／L。血清白蛋白在感染后晚期明显升高,达3．20％。谷丙转氨酶在感染3～7d升高,峰值达22．23U／L。结论原代肝细胞可支持登革病毒在其中增殖,感染后肝细胞有现明显损伤。     

睾丸高表达蛋白质HSD13调节CHO细胞系周期进程

 目的 研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法 利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库，通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达，并用免疫组化观察其在小鼠睾丸组织中的表达定位。通过构建HSD13过表达的CHO稳定细胞系，用双胸苷阻断法并结合流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果 电子克隆获得HSD13基因。HSD13蛋白在睾丸组织中高表达，主要定位于生精细胞中的精原细胞和初级精母细胞。成功构建HSD13过表达和对照的CHO稳定细胞株，过表达HSD13蛋白可以显著加快细胞G2/M期进程。结论 HSD13蛋白于睾丸中精子发生早期表达，其过表达能够加速细胞周期进程。