联合应用酶消化和机械刷洗提取气道上皮细胞的实验技术

采用低浓度胰酶对兔气道的上皮侧进行温和消化后用乳胶刷机械刷洗,获取兔气管、支气管上皮细胞进行原代培养。通过免疫细胞化学、电子显微镜等鉴定细胞,测定细胞成活率及细胞膜完整性,并与单纯机械刷洗及单纯酶消化进行比较。结果显示,用该实验技术获得的气管、支气管上皮细胞有较高的纯度和成活率,是一种实用、有效的小动物支气管上皮细胞分离方法     

充分利用医学机能学实验中心资源为教学科研服务

该文介绍了机能学实验中心的资源,以及如何充分利用实验中心良好的仪器设备和动物资源,更好地为本科生和研究生的教学和科研服务。     

血管活性肠肽对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达MMP-9的影响

目的：探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)对经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞分泌和表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及明胶酶谱法（gelatin zymography），观察经LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞给予不同浓度的VIP（10-10～10-6mol/L）作用24h后MMP-9基因表达量和活性的变化。结果：(1)正常肺泡巨噬细胞仅分泌和表达少量的MMP-9，经不同浓度LPS（0.1～10mg/L）诱导后MMP-9活性和表达均明显高于未经LPS诱导的对照组（P<0.01）；(2)不同浓度VIP (10-10～10-6mol/L）的干预，均可下调LPS诱导的MMP-9的活性和表达（P<0.01）；(3)该作用可被蛋白激酶C和钙调蛋白的相应阻断剂H-7,W-7部分逆转（P<0.01）。结论：VIP能降低LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9的表达及活性，其细胞内信号途径可能与蛋白激酶C和钙调蛋白有关，提示VIP在肺内炎症时可能具有保护性作用。     

基础医学精品课程建设的研究与实践

我院以精品课程建设为龙头,从基础医学教育的各主要环节入手,按照新医学模式和医学教育国际标准的需求,制订课程建设目标,调整课程设置,更新教学内容,创新教学方法,优化师资队伍,组建公用平台,加强教材建设,建立质量监探体系,显著提高了教学效果。     

医学实验室的生物安全防护管理

在生物学、微生物学、免疫学、化学血液学、生物物理学、细胞学、病理学等医学实验中,生物安全是一个十分重要的问题。实验室生物安全是保护被实验因子免受污染、保证实验研究可信性与科学性的必要条件。因此,生物安全建设已成为医学实验室发展不可缺少的环节。现针对医学实验室生物安全防护管理,进行初步研究和探讨。     

表皮生长因子对气道上皮细胞VIP分泌及VIPR表达的影响

用放射免疫法检测支气管上皮细胞（ＢＥＣ）和肺泡巨噬细胞（ＡＭ）血管活性肠肽（ＶＩＰ）的分泌,放射配基法测定ＢＥＣ的ＶＩＰ受体（ＶＩＰＲ）表达,观察表皮生长因子（ＥＧＦ）的调控效应。结果示：①电镜下,ＢＥＣ细胞内有神经肽分泌颗粒特征,ＢＥＣ及ＡＭ均有ＶＩＰ基础分泌;②ＥＧＦ呈剂量依赖性促进ＢＥＣ的ＶＩＰ分泌,并促进ＡＭ分泌ＶＩＰ;③ＥＧＦ呈剂量依赖性上调ＢＥＣ的ＶＩＰＲ表达。提示气道上皮存在ＶＩＰ的自分泌或旁分泌,其保护效应受局部生长因子的调控。     

内皮素-1对肺泡Ⅱ型上皮细胞肺表面活性物质合成的调控

采用离体培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞（ＡＴⅡ）观察内皮素１（ＥＴ１）对肺表面活性物质（ＰＳ）合成的影响。结果显示：１０－１１～１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１的ＥＴ１可促进ＰＳ的合成,量效关系显著。与肺组织块培养相比,促进ＡＴⅡ细胞ＰＳ合成所需的ＥＴ１浓度较大。ＥＴ１的促ＰＳ合成效应可被ＥＴＡ受体拮抗剂ＢＱ１２３阻断,而不受ＥＴＢ受体拮抗剂ＢＱ７８８影响。ＥＴ１作用１６ｈ对ＡＴⅡ型细胞的增殖无显著影响。结果表明,ＥＴ１既可通过ＥＴＡ受体直接促进ＡＴⅡ细胞合成ＰＳ,又可通过其它肺细胞实现对ＡＴⅡ细胞的间接调控     

蛙皮素受体亚型-3对人支气管上皮细胞的抗损伤保护作用

目的：研究蛙皮素受体亚型-3（bombesin receptor subtype-3，BRS-3）激活对人支气管上皮细胞（human brochial epithelial cells，HBECs）增殖的影响及对HBECs抗损伤的保护作用，并探讨其初步机制。方法：应用MTT法[噻唑蓝3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide]观察BRS-3特异性激动剂P3513对HBECs增殖的影响；在O3应激作用下，观察HBECs的^3H-Udr漏出率、乳酸脱氢酶释放活性、过氧化氢酶活性，以及P3513对其影响；观察P3513对HBECs上皮钙黏素（epithelial cadherin，E-cd）、整合素蛋白表达的影响。结果：（1）P3513能显著促进HBECs增殖（10^-9～10^-7mol／L），其作用呈剂量依赖性。（2）O3应激使^3H—Udr漏出率增加，LDH释放活性增加；P3513可显著降低O3应激的HBECs ^3H—Udr漏出率、LDH释放活性，但能增加过氧化氢酶活性；（3）钙调素抑制剂W7，酪氨酸激酶抑制剂PD98059和蛋白激酶A抑制剂H89能阻断P3513的促增殖和抗损伤保护效应；（4）P3513可使03应激的HBECs钙黏素、整合素蛋白的表达增强。结论：P3513介导的BRS-3激活对O3应激的HBECs有抗损伤保护作用，其信号途径可能与Ca^2＋通路、MEK和PKA有关。     

气道上皮细胞趋化活性测定方法的研究

目的探讨气道上皮细胞趋化活性的测定方法,建立气道上皮损伤修复的评价指标. 方法以不同浓度的胰岛素作为趋化因子,测定气道上皮细胞的趋化活性.同时观察选用不同孵育时间时气道上皮细胞趋化活性的变化. 结果在一定浓度范围内,气道上皮细胞的趋化活性随胰岛素浓度的升高而增加;孵育时间以6 h最佳. 结论本文建立的气道上皮细胞趋化活性的测定方法稳定可靠.     

BRS-3激活对人支气管上皮细胞MMP-9和TIMP-1分泌的影响及其机制

目的观察蛙皮素受体亚型-3(bombesin receptor subtype3,BRS-3)激活对人支气管上皮细胞MMP-9/TIMP-1分泌的影响及MMP-9、TIMP-1对人肺成纤维细胞增殖的影响。方法人支气管上皮细胞常规培养,ELISA检测基质金属蛋白酶及其抑制物分泌,MTT检测人肺成纤维细胞增殖。结果(1)臭氧应激使支气管上皮细胞基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的分泌增加及MMP-9/TIMP-1的比值降低;用特异性人工激动剂P3513激活BRS-3可选择性下调臭氧应激所诱导的MMP-9、TIMP-1的分泌及使MMP-9/TIMP-1的比值增高;激活BRS-3下调支气管上皮细胞分泌MMP-9、TIMP-1的作用可为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD98059所部分逆转。(2)MMP-9可促进肺成纤维细胞增殖,但TIMP-1对肺成纤维细胞的增殖无显著影响。结论BRS-3激活下调臭氧应激所诱导的支气管上皮细胞MMP-9及TIMP-1分泌,从而改变MMP-9/TIMP-1比值,其机制与丝裂原活化蛋白激酶途径有关;另MMP-9可促进人肺成纤维细胞增殖。上述结果提示BRS-3参与了气道重构,可能在哮喘等气道高反应性疾病中起保护作用。