Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体蛋白的研究

目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体 (mIL-4RA)蛋白.方法 PCR方法扩增小鼠IL-4 C118截断型基因,定向克隆入转移质粒pFastBacHTB中,转化感受态DH10Bac细胞,在DH10Bac细胞内重组pFastBacHTB与杆粒发生转座.筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染sf9昆虫细胞株,获取完整重组杆状病毒.反复感染sf9细胞,扩增病毒同时表达目的 蛋白;用ELISA方法进行蛋白鉴定并初步定量.结果 经核苷酸序列测定及PCR方法,鉴定成功获得含mIL-4RA基因的重组杆粒;通过杆粒转染后sf9细胞所表现出来的细胞病变,推断成功转染并获得重组杆状病毒;最后ELISA方法初步定量sf9细胞培养上清中mIL-4RA蛋白表达量为(1.15±0.12) ng/mL.结论 本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达mIL-4RA蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础,同时亦为其他蛋白质的真核表达提供了方法学的参考.     

小鼠STAT4，STAT6基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒.方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒.同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列.结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符.结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体.为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础.     

长期吸入糖皮质激素对支气管哮喘患儿身高的影响

支气管哮喘(哮喘)是儿童期最常见的慢性疾病,吸入糖皮质激素(ICS)仍是目前哮喘治疗中最有效的方法。但由于本身存在的不良反应,使其在临床应用中受到一定的影响。通过对近年国内外相关文献进行综述,认为短期吸入中小剂量糖皮质激素(GC)对哮喘儿童的身高无显著性影响。对长期吸入者身高的影响与ICS的种类、剂量、疗程、吸入器、吸入技术、不同年龄以及个体对激素的敏感程度等有关,可采取一定的措施预防ICS对身高的影响。     

浅谈加强儿童呼吸内科研究生人文素质教育在临床实习中的作用

医学是一门特殊的人道主义精神事业,希波克拉底说过医学是一切技术中最美和最高尚的。医学从诞生之日起,就与道德、良知紧紧融合在一起,医学生尤其应以人文精神作为自己职业的道德主题,加强人文素质教育,提高人文素质,更好地服务于患者。但目前国内关于医学人文素质教育的课程开展很少,医学生对人文素质、人文精神了解不多,以至于在临床工作中成为一个只知医学专业知识的医者。本中心从2009年以     

基于临床路径的教学方法在小儿呼吸内科临床带教中的体会

临床路径的推广和应用在国内大型教学医院已经逐步开展和实施,医疗工作以后将逐步以临床路径作为工作的指导,随着各种疾病临床路径的形成,在以后的工作中临床工作者将以临床路径作为诊治疾病的基础,因此,加强医学生对临床路径的熟悉和掌握,不但有利于临床路径的推广和应用,同时对学生掌握专业知识也有一定的帮助,还可以规范医学生的医疗     

PBL 和LBL 教学法在儿童呼吸内科教学中的比较

随着医学教育的不断改革和发展,问题式学习（problem based learning ,PBL ）的教学方法在医学教育中得到了广泛的认可。PBL教学方法在各医学院校得到了积极的推广和应用,对教师的相关培训和继续教育也在快速地进行中。重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心部分教师在经过PBL教学方法的系统培训和继续教育后,结合儿童呼吸系统疾病的特点,将PBL教学方法使用于儿童呼吸内科的教学中,将传统讲授式（lecture‐based learning ,LBL ）教学方法以教师为中心的“知识传授”式教学,逐步转变为以学生和问题为中心的 PBL 教学［1‐3］,通过对病史总结和归纳、特定病例分析成绩、临床实践能力考核、理论考核成绩等几个方面进行比较,发现PBL教学方法较传统LBL教学方法有一定的优势,尤其是学生学习主动性有明显提高。     

短发卡RNA表达质粒的构建及对△Np63基因的抑制作用

目的构建△Np63特异性短发卡RNA(shRNA)表达质粒,检测△Np63-shRNA对膀胱移行细胞癌(TCCB)细胞株5637中△Np63信使RNA(mRNA)表达的抑制作用。方法设计合成△Np63 shRNA短链寡核苷酸,克隆到Pgenesil-1质粒载体中,构建△Np63特异shRNA表达质粒,在转染试剂介导下转染5637细胞,6孔板每孔加入0.4μg质粒。半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测△Np63 mRNA表达水平。结果经PstI SalI双酶切及测序鉴定△Np63-shR- NA表达质粒构建成功。在受转染的5637细胞内△Np63-shRNA干预组△Np63 mRNA水平明显低于control组与PBS组(p<0.05),与control组和PBS组比较抑制率分别为57.3%和63.0%。结论△Np63特异性shRNA在5637细胞中对△Np63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。     

短发卡RNA表达质粒的构建及对ΔNp63基因的抑制作用

目的构建ΔNp63特异性短发卡RNA（shRNA）表达质粒，检测ΔNp63-shRNA对膀胱移行细胞癌（TCCB）细胞株5637中ΔNp63信使RNA（mRNA）表达的抑制作用。方法设计合成ΔNp63 shRNA短链寡核苷酸，克隆到Pgenesil-1质粒载体中，构建ΔNp63特异shRNA表达质粒，在转染试剂介导下转染5637细胞，6孔板每孔加入0．4μg质粒。半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测ΔNp63 mRNA表达水平。结果经PstI＋Sail双酶切及测序鉴定ANp63，shR．NA表达质粒构建成功。在受转染的5637细胞内ΔNp63-shRNA干预组ΔNp63 mRNA水平明显低于control组与PBs组（P〈0．05），与control组和PBS组比较抑制率分别为57．3％和63．0％。结论ΔNp63特异性shRNA在5637细胞中对ΔNp63 mRNA表达显示出很好的抑制作用。