骨髓移植配型中HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术的应用

ＨＬＡⅡ类基因是位于人类第 6号染色体短臂远端的一组高度多态的基因 ,主要包括ＨＬＡ ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ3个亚区[1] 。ＨＬＡⅡ类基因配型对提高异基因骨髓移植存活率 ,减少ＧＶＨＤ ,具有重要意义[2 ] 。既往ＨＬＡⅡ类分型采用血清学微量淋巴细胞毒试验 ,近年国外实验室已转向基因分型 ,并已将其列为常规。我们采用序列特异性引物 (ＳＳＰ)ＰＣＲ技术对ＨＬＡ ＤＲＢ1,ＤＱＢ1进行基因分型 ,快速简便 ,报告如下。1　材料与方法1 1　样本　原山东医科大学附属医院提供 2 2名拟行骨髓移植的恶性血液病患者及相关供者样本。1.2　ＤＮＡ提取…     

反义核酸对癌基因C-myc和N-ras蛋白表达的影响

目的为了研制新型的抗肝癌药物,观察了反义寡核苷酸对整合乙型肝炎病毒(HBV)的肝癌细胞基因治疗的作用.方法设计合成针对HBVPreS2基因翻译起始位点的反义寡核苷酸(ASON),并设非互补序列作对照,选择2.2.15细胞为细胞模型,ASON以10μmol/L浓度用药,用ELISA法观察了细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的变化,MTT法检测ASON对细胞的毒性作用,放射免疫方法检测细胞培养上清液中血清铁蛋白浓度.免疫细胞化学染色检测ASON对癌基因C-myc和N-ras蛋白表达的影响.结果ASON能有效地抑制HBV抗原表达,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91%.而ASON以20μmol/L或40μmol/L浓度用药4天对宿主细胞无毒性作用,ASON以10μmol/L浓度用药后第二天用药组和对照组血清铁蛋白浓度分别为(28.26士0.02)μg/L和(28.14土0.02)μg/L,两者相比差异无显著性(P＞0.05).用药后第3天C-myc和N-ras蛋白表达降低,和对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论该段反义寡核苷酸不仅抑制HBV抗原表达,而且抑制肝癌细胞的恶性表型而对宿主细胞无毒性,有可能成为有前途的抗肝细胞肝癌新药.     

血液在磁场环境下保存对红细胞保护作用的研究

血液在 4℃保存期间 ,红细胞的三磷酸腺苷(ATP)含量及细胞膜结构与功能将发生一系列变化 [1 ,2 ] ,这些变化与血液贮存期间氧化物质对红细胞的氧化损伤有关[3] 。磁处理水具有一定的抗氧化作用 [4 ] ,笔者探索用磁场处理血液的方法来减少血液保存期间红细胞的损伤 ,以提高血液的质量和延长血液的保存期限。材料与方法1　仪器　 FG-3 0 0型发光光度计 (中科院上海植物生理研究所 ) :72 1型分光光度计 (上海分析仪器三厂 ) :H型强场磁化杯 (天津市天磁公司 )。2　试剂　ATP生物发光测定试剂盒 (中科院上海植物生理研究所 ,批号 990 80 2 )…     

山东省血站系统血液检验室室间质量评价

山东省血液质量管理委员会对本省内血站、血库等单位的血液检验室HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒、ALT五项检测指标进行室间质量评价(EQA),旨在了解各检验室检验结果的准确度,为各室之间提供评价资料,便于各室找出差距纠正不足.也为主管部门提供可靠数据,以便实施管理,为确保检验质量和输血安全提供保障.笔者统计了1999～2000年的室间质评情况,报告如下.     

获得性凝血因子Ⅷ缺乏10例

获得性凝血因子Ⅷ (ｆａｃｔｏｒⅧ ,ＦⅧ )缺乏导致患者止血、凝血及纤维蛋白溶解等机制的缺陷或异常而引起患者自发性出血或轻微损伤后出血不止 ,治疗需针对病因治疗并补充足够的凝血因子Ⅷ制剂。现将我中心 1989～ 2 0 0 0年收治的10例获得性ＦⅧ报告如下。1　临床资料　 10例获得性ＦⅧ缺乏 ,男 7例 ,女 3例 ,8～ 6 6岁。详细资料见表 1。表 1　 10例获得性凝血因子ＶⅢ缺乏临床资料例序年龄 (岁 )性别临床特征及过敏史ＦⅧ :Ｃ(% )ｖＷＦ(% )ＦⅧ抗体 (ＢＵ)16 1女左股部肿胀、大片淤斑 1月余 ,有青霉素过敏史 6 9.9191772 6 3男肺癌化…     

中国汉族群体RhD—（—）个体D基因和CED基因外显子多态性研究

Rh血型系统是继ABO血型之后临床意义最大的一个血型系统,也是最复杂的血型系统之一。最新的分子生物学研究表明,RhD阳性个体的Rh基因座位是由RHD和RHCE两个结构基因组成［1］,这两个基因均含有10个外显子,而RhD(－）个体仅有一个RHCE基因［2］。值得注意的是RhD基因结构存在种族差异,东方人、非洲黑人RhD(－)个体与高加索人种 RhD (－)个体的基因结构存在明显的差异［3,4］。笔者用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）方法特异性地扩增100名中国汉族RhD（－)个体的RHD基因,以探讨中国汉族RhD(－)个体的D基因结构,并与其他民族进行比较。     

HLA类基因PCR-SSP分型技术在骨髓移植配型中的应用

目的建立快速、准确的 HL A基因分型方法 ,满足临床移植配型的需要。方法通过序列特异性引物聚合酶链反应 (PCR- SSP) ,对拟行骨髓移植的 10例血液病患者及 12名相关供者的 HL A- 类基因 DRB1,DQB1位点扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析 PCR产物并确定其基因型。结果发现 2例患者与其相关供者 HL A- DRB1,DQB1基因全相同 ,其中 1例成功进行了骨髓移植。结论该方法具有快速准确、特异性高、简便省时的特点。     

微板动力学ALT快速检测

ALT虽不是肝炎诊断的特异性指标,但ALT升高往往是肝细胞受侵害的早期指标,其异常值的供血者较正常值的供血者更有可能引起输血后相关性肝炎[1],所以ALT检测在献血员检测指标中具有重要意义.而血站系统实验室的工作具有其特殊性,样品量大时间紧,选择快捷方便灵敏度高的ALT检测方法,在ALT检测中是十分必要的,作者在工作中应用AnthosHT3酶标仪,参考IFCC推荐方法进行ALT检测,经过优化实验参数,使实验效果达到了上述要求,建立了应用酶标仪微板动力学ALT检测方法,取得了一定的成绩,现总结如下.