小鼠CCL20 mRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的:建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20(CC chemokine ligand 20)mRNA的实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)的方法。方法:分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRT-PCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果:建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P<0.05)。结论:建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。     

滤泡调节性T细胞在肺癌移植瘤小鼠体内的变化及意义

［摘要］目的: 研究滤泡调节性T细胞（follicular regulatory T cells,Tfr）在肺癌移植瘤小鼠体内的变化,并探讨肿瘤微环境对Tfr细胞的影响。方法: 采用皮下注射Lewis肺癌细胞株的方式建立肺癌移植瘤小鼠模型,通过流式细胞术检测小鼠腹壁引流淋巴结和肿瘤组织中Tfr细胞以及CD4+CXCR5+T细胞的比例,分析Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值的变化。 结果： 肺癌移植瘤小鼠腹壁引流淋巴结中Tfr细胞的比例为（4.13±0.35）%,较正常对照组小鼠［（1.97±0.26）%］明显增加（t=4.985,P<0.01）,并且Tfr/CD4+CXCR5+T细胞比值为0.39±0.03,较正常对照组小鼠(0.21±0.02)明显增加（t=5.148,P<0.01）。在肿瘤发展的第14天,肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织中Tfr细胞比例增加尤为显著,与第7天相比差异具有统计学意义（t=5.617,P<0.01）。结论： 肺癌移植瘤小鼠体内Tfr细胞比例的增加以及Tfr/CD4+CXCR5+ T细胞比值的失衡,预示着Tfr细胞可能参与小鼠肺癌移植瘤的发展进程。     

皮肌炎和多发性肌炎的临床研究

目的探讨皮肌炎(DM)和多发性肌炎(PM)的临床表现及辅助检查的特点。方法回顾性分析2007年8月至2011年10月住院的25例DM/PM患者的临床表现以及实验室检查、胸部CT、肌电图等检查。结果 DM/PM临床表现多样,以特征性皮疹和肌肉症状、肺部病变为主。抗核抗体滴度与肌酸激酶水平呈正相关。重叠其他结缔组织疾病DM发生肾损害的可能性高。结论对DM/PM患者需要进行完整的临床、实验室及仪器检查,以深入了解病情,从而为诊断及治疗提供依据。     

NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnⅠ的性能评价

目的对NRM411-S7化学发光分析仪检测氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的分析性能进行验证和评价,确定该检测系统是否准确、稳定、可靠。方法参照美国CLIA′88性能验证文件及相关参考资料,从精密度、正确度、携带污染率、最低检出限、线性范围及参考区间对NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnI的方法学进行验证和评价。结果高、低值样本(H、L)NT-proBNP和cTnI的批内不精密度分别为3.03%、6.36%和3.37%、3.92%;中间不精密度分别为6.52%、7.70%和7.20%、6.88%;正确度分别为1.38%、1.72%和-5.29%、4.32%;携带污染率均小于10%;NT-proBNP和cTnI最低检出限分别为8.30pg/mL和0.02ng/mL;各检测项目呈线性相关,决定系数r~2均大于0.95(P0.05);高值样本(H)进行稀释检测的最大稀释倍数为2倍;按年龄分别验证各项目的参考区间,结果显示95%以上检测值在厂家提供的生物参考区间内。结论 NRM411-S7化学发光分析仪检测NT-proBNP和cTnI的分析性能达到厂家所示的性能参数和实验室质量要求,能够满足临床检测的需要。     

KLF4的生物学功能及其研究进展

Krüppel 样因子（Krüppel-like factors,KLFs）家族为锌指蛋白类转录因子,是生物体内一类具有重要功能的蛋白质,参与调控细胞的增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程,在细胞分化和细胞周期阻滞中起重要作用。KLF4又称为胃肠富集 KLF（gut-en-riched Krüppel-like factor,GKLF）,是目前研究较多的 KLFs 家族成员之一。KLF4与不同的靶基因结合发挥的生物学作用也不同,表现为转录激活或抑制,故对肿瘤的发生发展起抑制和促进双重作用,并与肿瘤的预后密切相关,可作为肿瘤靶向治疗的一个位点。鉴于 KLF4在细胞增殖和肿瘤、炎症等病理过程中发挥的重要作用,深入研究 KLF4基因将有助于进一步了解疾病的本质。     

实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠体内Th17细胞检测的意义

目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-17在实验性自身免疫性甲状腺炎(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)小鼠体内的变化.方法:利用小鼠甲状腺球蛋白(Tg)建立小鼠EAT模型.应用流式细胞术(FCM)分析小鼠脾脏细胞中Th17细胞的比例.采用qRT-PCR检测小鼠脾脏细胞...     

小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定

目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。     

IL-17+ γδT细胞

IL-17是一种重要的炎症介质,最近研究显示,除了Th17细胞,γδT细胞也能够产生IL-17,并且比αβT细胞产生得更为迅速.与Th17细胞一样,γδT细胞产生IL-17的能力受多种因素影响,并和某些与IL-17相关的疾病有着密切联系,这对相关疾病的致病机制有了新认识,也为这些疾病的治疗提供了新思路.现就近年来对γδTT细胞产生IL-17能力的研究,以及这群细胞和疾病的关系进行简要综述.