长期培养的大鼠原代肝细胞功能和形态学观察

目的：研究大鼠原代肝细胞长期体外培养后功能和形态的变化。 方法： 采用两步胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞，并用Percoll分离液进行密度梯度离心进一步纯化肝细胞，采用0.4%台盼蓝染色观察细胞活力。然后将细胞接种于HepatoZYME-SFM培养基中培养，定期收集肝细胞培养液上清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白、尿素氮的水平。采用乙氧基试卤灵O-脱乙基酶活性（EROD）方法检测肝细胞P450的CYPⅠA1功能。 结果： 新鲜分离的大鼠肝细胞总数（2-3）×108cells/whole liver，Percoll分离液纯化后活力和纯度在90%以上。HepatoZYME-SFM培养下肝细胞生长良好并保持正常形态。AST、ALT水平在培养3 d后下降显著，6-9 d后趋于相对稳定的低水平。白蛋白的分泌功能、尿素合成能力在18 d内维持在较高水平。可在3-6 d检测到CYPⅠA1酶活性。 结论： Percoll液纯化新分离肝细胞可提高其活率和纯度，HepatoZYME-SFM培养条件下肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力，适合肝细胞的体外长期培养和功能研究。     

HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155真核重组载体构建

目的分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVX基因、MHBst78与MHBst155编码基因片段;用HindⅢ,KpnⅠ双酶切HBVⅩ基因;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切MHBst78与MHBst155编码基因片段后,分别定向插入到真核表达载体pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切重组体显示所切下的片段大小均与预计相符,测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBVX基因、羧基端截断的HBV中分子表面蛋白MHBst78、MHBst155编码基因的真核重组表达载体,为进一步研究HBV转录激活蛋白HBx、MHBst78MHBst155对宿主细胞信号转导通路的影响奠定基础。     

重组干扰素对慢性乙型肝炎抗HBV复制效应临床观察

作者应用重组干扰素治疗慢性乙型肝炎５６例，疗程２４周。对照组４６例，用传统护肝治疗。近期疗效观察治疗组病人ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｃＩｇＭ和ＨＢＶＤＮＡ阴转率分别为４１．０７％，３７．５％和３９．２８，明显高于对照组。     

复方甘草甜素（SNMC）对肝病理改变观察

目的：通过复方甘草甜素对预防肝硬化的肝病理改变研究将其用于临床胆汁淤积,慢性活动性肝炎引起的肝细胞变性,坏死。方法：采用敏感度高的序贯设计检验方法,对56例肝细胞变性,坏死患者进行了观察。结果：实验至21例时,实验线已穿过上边界线,结论为有效。经过8周一个疗程的治疗,肝组织的综合判断和肝功能较应用本药前改善75％,P＜0．01,结论：复方甘草甜素值得推荐应用于保护肝细胞,预防肝纤维化。     

恙虫病95例临床分析

恙虫病是由恙虫病立克次体引起的一种急性传染病,属于自然疫源性疾病。此病主要流行于亚洲太平洋地区,我国以东南沿海多见。其临床表现多样化,可出现多器官损害,易造成误诊。现对我院传染病科自１９９２年６月至２０００年吕月期间收住的９５例恙虫病进行回顾性分析,报告如下：ｌ临床资料１．ｌ一般资料 １９９２年６月－２０００年吕月我科收治的恙虫病患者９５例,全部病例均符合诊断标准。其中男６８例,女２７例。年龄４－７７岁,平均年龄３４．６】１８．３６岁。大部分病例来自广东珠三角地区,发病时间全年均有,ｌ－３月发病…     

妊娠中晚期重型肝炎对孕妇及胎儿预后影响的研究

目的研究妊娠中晚期重型病毒性肝炎（以下简称重肝）对孕妇及胎儿预后的影响。方法观察引起妊娠中晚期重肝的感染病原体，比较各型各期患者的病死率、存活组和死亡组之间各项指标、并发症发生的差异以及胎儿病死率与HBV感染的关系。结果HBV相关、HEV相关、重叠感染率分别为66．67％、25．93％、29．63％。总病死率为68．52％，急性、亚急性及慢性妊娠中晚期重肝在病死率方面比较差异无显著性（P〉0．05）；中期、晚期妊娠重肝患者病死率比较差异无显著性（P〉0．05）。存活组和死亡组在凝血酶原时间（PT）、血清总胆固醇（TC）及肝脏体积缩小等指标上差异有显著性（p〈0.05）。病死率随着并发症增加而升高。胎儿总病死率48．15％，其中HBV感染相关的病死率占55156％。结论引起妊娠中晚期重肝的病原体以HBV、HEV为主；该组病例的孕产妇及胎儿病死率高；其孕妇转归与PT、TC、肝脏体积大小及并发症相关；胎儿预后可能与HBV感染有关。     

改良原代大鼠肝细胞的体外分离培养和功能研究

目的建立经济有效且功能良好的原代肝细胞体外分离培养系统。方法采用0.02%胶原酶和Percoll分离液分离纯化大鼠肝细胞,光镜和电镜下观察HepatoZYME-SFM培养的肝细胞形态,自动生化仪定期检测培养肝细胞功能,RT-PCR半定量方法检测白蛋白mRNA,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析安定代谢能力。结果分离纯化的大鼠肝细胞总数(2～3)×108cells/整肝,活力和纯度大于95%,生长良好形态正常。培养3d后ALT、AST显著下降,加入NH4Cl后8d内BUN保持相对稳定高水平,白蛋白合成在第3～4天达到高峰,培养的2～5d内肝细胞可有效清除安定。结论通过使用低浓度胶原酶灌流、Percoll分离液纯化以及HepatoZYME-SFM无血清培养基培养,肝细胞可有效保持良好形态结构和一定的生物合成代谢能力。     

人工肝支持系统治疗重型肝炎并发症的防治

目的　探讨人工肝支持系统 (ALSS)治疗重型肝炎时并发症的主要因素并提出防治措施。方法　总结人工肝支持系统对重型肝炎 3 0例 10 2次治疗中出现的 2 3次并发症的有关资料 ,分析各种并发症发生的主要因素。结果　并发症以血浆过敏反应为多见 ,占 10 .8% ,器械因素次之 ,占 9.8% ,最严重的并发症是过敏性休克。结论　ALSS对重型肝炎治疗是较为安全有效的。积极防治并发症是提高治疗成功率的关键措施     

血浆置换患者TT病毒感染的观察

目的 研究血浆转换患者人群中经输血传播ＴＴ病毒的感染状况及临床意义。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测４５例血浆转换口才呼慢性肝炎患者的ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染情况，分析ＴＴＶ感染的致病力。结果 ＴＴＶ在４５例血浆转换患者中的感染率为１５．６％（７／４５），在８７例慢性肝炎患者中的感染率３．４％（３／８７），经统计学处理，两组感染率比较差异有显著性（Ｘ＾２＝４．６０，Ｐ〈０．０５）。７例ＴＴＶ阳