透明质酸寡糖通过影响核因子E2相关因子2信号通路促进糖尿病皮肤溃疡创面愈合的机制研究

背景 氧化应激水平过高、长期的炎症状态严重影响糖尿病患者的创面愈合，目前治疗糖尿病皮肤溃疡（DCU）的药物有生物制剂、中药、干细胞疗法等，但由于其缺乏安全性、有效性的充足证据，在临床应用中受到限制，亟需发现新的药物。透明质酸寡糖（o-HA）具有抗氧化性和抗炎性，是治疗DCU的重要方法。 目的 观察o-HA对DCU创面愈合作用并探究其对氧化应激核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路的影响。 方法 实验时间为2021年4—12月，取6周龄SPF级雄性昆明小鼠90只，留取10只作为正常对照组（NC组），其余经腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病小鼠模型，建模成功的60只糖尿病小鼠按照随机数字表法分为6组，每组10只，即糖尿病模型组（DM组）、重组人表皮生长因子阳性对照组（rhEGF组）、空白基质阴性对照组（matrix组）、低剂量o-HA治疗组（0.5% o-HA组）、中剂量o-HA治疗组（1% o-HA组）、高剂量o-HA治疗组（2% o-HA组）。所有小鼠利用全层皮肤切除环形夹板法建立创面模型，NC组和DM组小鼠创面不做任何处理，其他各组每日创面及创周常规消毒后，均匀涂抹各组相应药物于创面及创周，rhEGF组给药1次/d，0.5%、1%、2% o-HA组给药2次/d，连续给药14 d。治疗后第1、7、14天拍照记录DCU小鼠创面愈合情况，利用HE染色、Masson染色、CD34免疫组化染色观察给药14 d后小鼠创面肉芽组织形态变化、胶原纤维生成和新生血管，试剂盒检测给药14 d后小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平，Western-blotting检测给药14 d后小鼠创面组织Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）、NAD（P）H醌氧化还原酶1（NQO1）的蛋白表达水平。 结果 给药第7天，rhEGF组、1% o-HA组创面愈合率高于DM组，0.5% o-HA组、2% o-HA组创面愈合率低于NC组、高于DM组；给药第14天，rhEGF组、0.5% o-HA组、1% o-HA组、2% o-HA组创面愈合率高于DM组（P<0.05）。组织形态学显示o-HA软膏干预后创面肉芽组织、胶原纤维、新生血管密度明显增多。rhEGF组、0.5% o-HA组、1% o-HA组、2% o-HA组MDA水平低于DM组，SOD水平高于DM组；0.5% o-HA组、2% o-HA组MDA水平高于NC组（P<0.05）。rhEGF组、1% o-HA组Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达水平均高于NC组和DM组；0.5% o-HA组Nrf2、NQO1蛋白表达水平高于DM组，HO-1蛋白表达水平高于NC组和DM组；2% o-HA组HO-1蛋白表达水平高于NC组和DM组，NQO1蛋白表达水平高于DM组（P<0.05）。 结论 o-HA对DCU小鼠创面有潜在促愈合作用，以1% o-HA软膏愈合效果最好，可加速创面闭合、再上皮化，促进血管新生，影响Nrf2途径，加速创面愈合，具有安全性高、稳定性好的优势，在临床DCU创面修复方面极具潜力。