简套式荧光RT-PCR检测患者血清样本中SARS冠状病毒

目的　建立一种快速、特异、灵敏的SARS冠状病毒(SARS CoV)核酸检测方法。方法　根据GenBank中SARS CoV基因序列,自行设计引物、荧光探针,在PE 770 0扩增仪上探讨工作参数,形成试剂盒,并用研制的试剂检测76份临床SARS样本。结果　简套式荧光RT PCR方法对血清样本、漱口液样本、正常人样本检出率分别为33.3% (12 36 )、6 7.5 % (2 7 4 0 )、0 (0 / 16 0 ) ,与经典套式检测结果一致。而传统一步法荧光RT PCR对样本的检出率分别为13 9% (5 36 )、5 2 5 % (2 1 4 0 )、0 (0 / 80 )。结论　简套式荧光RT PCR核酸检测法是SARS临床早期诊断快速、特异、灵敏的方法。     

含SARS CoV RNA病毒样颗粒的构建和表达

目的:构建并表达含有SARS冠状病毒RNA片断的抗核糖核酸酶的病毒样颗粒.方法:通过克隆大肠杆菌噬菌体MS2的装配蛋白和壳蛋白基因以及SARS冠状病毒RNA聚合酶基因片段,将这些基因连接到载体 pTrc99a上表达,并进行纯化、定量分析、RT-PCR检测和稳定性试验. 结果: 获得病毒样核蛋白颗粒,在37℃稳定性可达到30 d,能抵抗核糖核酸酶降解. 结论: 该病毒样核蛋白颗粒稳定、安全、可靠,可作为SARS冠状病毒RT-PCR检测、定量分析的有效阳性参考品.     

6种食品致病菌的多重PCR检测

目的寻求食物中毒诊断及食品检测的有效方法。方法建立多重PCR体系一次检测多种食品致病菌方法。结果可以一次检测出肠毒性大肠埃希菌(E.coli-ETEC),蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus),沙门菌属(Salmonellaspp),大肠埃希菌O157:H7(E.coli-O157:H7),志贺菌属(Shigellaspp),霍乱弧菌(Vibriocholerae)等菌属或菌。结论多重PCR体系检测6种菌DNA的灵敏度最低为10.30fg,与单独的PCR检测的灵敏度相同。将它做成体外基因诊断试剂盒,将成为细菌性食物中毒诊断及食品检测的有效工具。     

实时荧光RT-PCR对SARS患者血清中病毒含量的定量检测

目的:阐述SARS患者病程与血清中SARS病毒含量间的关系.方法:采用高灵敏度荧光实时定量RT-PCR方法,对156份SARS患者进行检测,同时,以9.4×109copies/L(Robert Koch Institute)灭活的SARS冠状病毒为定量标准品,病毒样颗粒为阳性对照,分析SARS-CoV阳性血清样本中的病毒含量.结果:检测试剂的灵敏度达1×105copise/L,与相关病原体没有交叉.81份血清样本中病毒含量分布在1×105～1×107copies/L之间,患者血清样本中病毒含量较低,经统计学分析,病毒含量与病程长短无明显数量关系.结论:SARS患者血清中病毒含量低,与病程没有明显的相关性.     

怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定

目的利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增出110条带。基于这些条带，用SPSS10.0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71.82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。     

简套式酶免RT-PCR检测患者样本中SARS冠状病毒

为建立一种快速敏感的SARS冠状病毒核酸酶免PCR检测方法,根据SARS冠状病毒基因序列,自行设计引物、杂交探针,优化反应体系和探针共价交联,采用简套式PCR扩增SARS-CoV的cDNA.其产物通过包被特异性探针的微孔板捕获杂交、比色检测,以构建的假病毒颗粒作为内对照,监控操作的全过程,同时,与现有的可靠SARS检测方法进行比较.通过对几种方法的临床检测比较,说明简套式PCR检测方法是SARS临床早期诊断快速、敏感、重复性好的有效方法.     

怀区地黄遗传多样性的ISSR鉴定

目的利用ISSR标记技术对怀区地黄的8个品种和2个茎尖培养脱毒系进行了遗传多样性分析。方法用44条ISSR引物进行初选，然后用其中适合的10个ISSR引物进行ISSR分析。结果10条ISSR引物共扩增出110条带。基于这些条带，用SPSS10.0软件分析，建立了遗传Jaccard相关系数矩阵，构建了分子树状图，将怀区地黄的8个品种和2个组培系分为2类：其中一类群含有6个材料，包括组培85．5、大田85．5、组培9302、大田9302、金状元和金白地黄；另一类群含有4个材料，包括北京1号、大红袍、地黄9104和野生地黄。而且主成分分析结果支持上述的聚类分析结果；用POPGENE32软件分析知，多态性指数为0．3775，有效等位基因数为1．4037，多态性比率为71.82％；用一个ISSR6引物建立了10个供试地黄样品的DNA指纹图谱并且能将其彼此区分出来。结论ISSR标记适合于构建怀区地黄的DNA指纹图谱、品种鉴定和遗传多样性分析。