人激肽释放酶基因对肾性高血压大鼠主动脉胶原含量的影响及其机制探讨

目的 观察重组腺相关病毒介导人激肽释放酶基因对肾性高血压大鼠主动脉胶原含量的影响及其可能的机制. 方法 将人组织型激肽释放酶基因(HK)克隆入重组腺相关病毒载体(rAAV)中,经三质粒共转染方法在HEK293细胞中包装成rAAV-HK病毒.雄性Wistar大鼠24只,随机分为假手术和模型组,采用5/6肾切除的方法构建肾性高血压大鼠模型.模型组大鼠再随机分成单纯手术(n=6)、对照组(n=6)和实验组(n=6).实验组大鼠单次尾静脉注射1×1011pfU的rAAV-HK病毒.分别于模型构建前、后(基因转染前)及基因转染后1～3月测大鼠尾动脉血压.基因转染3月后处死动物,取其心脏、主动脉和肾脏等脏器提取总RNA及蛋白质.主动脉组织切片行天狼星红染色,Western Blot检测主动脉组织缓激肽B2和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)蛋白表达水平. 结果 HK基因转染后3月,实验组大鼠与单纯手术和对照组相比血压明显下降[(163±13)vs(217±16)vs(220±13)mmHg,n=6,P＜0.01];主动脉中膜内胶原纤维明显减少;主动脉组织缓激肽B2受体蛋白表达水平明显上调;AT1R蛋白表达水平则明显下调. 结论 重组腺相关病毒介导人激肽释放酶基因能够明显降低肾性高血压大鼠血压,同时减少主动脉中膜胶原纤维含量,其机制可能与它上调缓激肽B2受体和下调AT1R蛋白在主动脉组织的表达水平有关.     

银杏叶提取物抗肿瘤坏死因子-α诱导的人肾小管上皮细胞凋亡及机制

目的 研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)抵抗肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人肾小管上皮细胞凋亡及其作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞分成4组:对照组,TNF-α组,EGB TNF-α组,EGB组,各组细胞培养至80%～90%汇合时加入相应药物干预. 采用MTT法检测TNF-α对细胞的毒性作用, 通过细胞形态学检测(AO/EB染色)和流式细胞仪计数测定细胞凋亡发生情况,Western blot法测定细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 TNF-α对人肾小管上皮细胞的毒性作用呈剂量和时间依赖性;TNF-α(10 μg/ml)可显著诱导人肾小管上皮细胞凋亡,而EGB(50 mg/ml)可明显抑制它的作用, 同时Western blot测定显示EGB可显著上调Bcl-2的表达而下调Bax的表达.结论 EGB可以显著抑制TNF-α诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,此作用可能与其上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和下调促凋亡蛋白Bax的表达有关.     

Effects and mechanism of irbesartan on tubulointerstitial fibrosis in 5/6 nephrectomized rats

Tubulointerstitial fibrosis(TIF)is a common pathological feature of end-stage kidney disease.Previous studies showed that upregulation of TGFβ1 notably contributed to the chronic renal injury and irbesartan halted the development of TIF in rats with 5/6 renal mass reduction.This study was to investigate the effects of irbesartan on chronic TIF and the mechanism involved TGFβ1 in the rodent model of chronic renal failure involving 5/6 nephrectomy.The results showed that irbesartan significantly attenuated th...     

雷诺嗪对高脂高糖诱导的胰岛β细胞NIT-1功能损伤的保护作用

目的 观察雷诺嗪对高糖高脂诱导的胰岛β细胞NIT-1三酰甘油(TG)含量及脂肪酸转位酶(FAT/CD36)表达的增加和胰岛素分泌功能损伤的保护作用. 方法 用放免法检测高糖高脂及5 μmol.L^-1雷诺嗪共同作用后细胞基础胰岛素分泌(BIS)和葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)水平的变化,酶法检测胞内TG含量,Western blot检测细胞FAT/CD36蛋白的表达. 结果正常组、高糖高脂组和雷诺嗪组的胞内TG含量分别为(2.31±0.05),(5.17±0.03)和(3.63±0.01) mmol.L^-1;BIS分别为(0.67±0.03),(0.32±0.07),(0.51±0.03)ng.mL^-1,GSIS分别为(1.68±0.17),(1.35±0.08),(1.47±0.11)ng.mL-1;FAT/CD36的相对表达量比值A1分别为(0.53±0.08),(1.78±0.05)和(1.07±0.06). 与正常组比较,高糖高脂组GSIS降低,细胞内TG含量增多. FAT/CD36蛋白表达显著增加(P<0.05). 而雷诺嗪与高糖高脂的共同作用24 h后可以显著升高GSIS,同时降低胞内TG含量,减少FAT/CD36蛋白. 结论 雷诺嗪对高糖高脂导致的胰岛细胞NIT-1分泌功能损伤有保护作用,同时可以减少胞内脂质沉积,其分子机制可能是通过脂肪酸转位酶FAT/CD36蛋白表达的改变.     

银杏叶提取物对TNF-α诱导的牛主动脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响及其机制

目的:研究银杏叶提取物(EGB)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的牛主动脉内皮细胞(BAECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响及其机制。方法:分离培养BAECs,应用TNF-α诱导BAECs表达LOX-1,给予EGB刺激,采用RT-PCR以及W estern b lotting的方法检测BAECs LOX-1表达的改变,同时用W estern b lotting检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达的变化,检测细胞培养液中亚硝酸盐(NO2-/NO3-)的含量。结果:TNF-α显著上调LOX-1的表达(P0.05),EGB显著抑制TNF-α诱导的LOX-1的表达(P0.05),而一氧化氮合酶抑制剂可显著抑制EGB的效应(P0.05);TNF-α显著下调eNOS的表达(P0.05),EGB显著促进eNOS蛋白的表达(P0.05);TNF-α明显降低亚硝酸盐(NO2-/NO3-)的含量(P0.05),EGB显著抑制TNF-α诱导的亚硝酸盐(NO2-/NO3-)含量的降低(P0.05)。结论:EGB显著抑制TNF-α诱导的LOX-1的表达,其作用由EGB上调的NO介导。     

液体闪烁计数器检测血浆肾素活性及醛固酮

目的建立使用液体闪烁计数器检测血浆肾素活性(PRA)及醛固酮(ALD)的方法及临床应用。方法应用竞争机制原理,血浆(或标准品溶液)中的醛固酮(ALD)或血管紧张素I(AI)以及加入的放射性免疫试剂125I-ALD或125I-AI,竞争性地与一定量的特异性抗体产生免疫反应。血浆(或标准品溶液)中ALD或AI则优先与特异性抗体结合,剩余的抗体再与放射性免疫试剂125I-ALD或125I-AI结合。用驴抗兔免疫分离试剂沉淀被抗体结合的125I-ALD或125I-AI。离心,取上清液,使用β-液体闪烁计数器,检测未被抗体结合的游离的125I-ALD或125I-AI的放射性强度。建立相应的标准曲线方程,求得血浆中ALD或AI的含量,计算肾素活性(PRA)及ALD/PRA比值。结果变异系数RSD(%)为6.18%～10.79%,AI、ALD的回收率分别为87.61%～116.89%、82.98%～119.22%。结论本方法操作简便、准确度高、重复性好,可用于科研及临床。     

非心脏手术患者围手术期合并频发室性早搏的临床分析

目的 探讨外科非心脏手术患者围手术期合并频发室性早搏的临床特点;方法 回顾性的分析107例于外科非心脏手术围手术期发生频发室性早搏（术前/术后动态心电图>5000次/24h或术中心电监护示频发室性早搏）的病例,将其按年龄、病种、病因、起源部位、处理方法等项分为若干组进行对比;结果 107例病例中,术前动态心电图示频发室性早搏的有100例,术中心电监护示频发室性早搏的有6例,因术中出现频发室性早搏或患者有心悸症状于术后行动态心电图示频发室性早搏的有4例,在术后示频发室性早搏的4例病例中,1例为新发室性早搏,其余3例为术中频发室性早搏。在合并频发室性早搏的不同病种中, 107例通过缓解紧张、纠正电解质紊乱、使用抗心律失常药物、射频消融等处理,患者均安全度过围手术期,其中通过缓解紧张、纠正电解质紊乱等一般处理的患者有59例,使用抗心律失常药物的患者有44例,射频消融的患者有4例。 结论 围手术期频发室性早搏的发生与多种因素有关,临床医生应及时正确识别频发室性早搏,并根据其不同临床特点采取不同处理方式,协助患者安全度过围手术期。普通外科围手术期新发的心律失常部分是自限性的,约15％的心律失常仅需缓解紧张情绪即可自动恢复正常心律,大部分患者通过纠正电解质紊乱或应用抗心律失常药物也可安全通过手术,只有极少数引起血流动力学异常,须采取紧急电复律术。围手术期频发室早的处理方式的选择应根据手术类型及患者病情综合考虑。     

Simvastatin increases the activity of endothelial nitric oxide synthase via enhancing phosphorylation

3-hydroxy-3-methylgulutaryl-coenzyme A （HMG-CoA） reductase inhibitors or statins are a kind of lipid-lowering agents and have been used for the prevention and treatment of Cardiovascular diseases. Recent studies suggested that statins, besides lowering cholesterol, may protect vessels by enhancing the activity of endothelial nitric oxide synthase （eNOS）. In the present study, we investigated if simvastatin increases eNOS activity through its phosphorylation in 293 cells （293-eNOS） with stable expression of eNOS. The results showed that incubation of 293-eNOS cells with simvastatin （10 μm/L） for 2 h significantly increased in the activity of eNOS as shown by the conversion of L-arginine to L-citrulline （2889.70±201.51 versus 5630.18＋218.75 pmol/min . mg proteins） （P〈0.01）. Western blotting revealed that simvastatin increased phosphorylation of eNOS at 1177 （ser） and also 495 （thr） but did not affect the overall expression of eNOS or inducible NOS. Further study found that simvastatin raised phosphorylation levels of Akt and AMPK, and such effect could be antagonized by Akt inhibitor or AMPK inhibitor. These results suggest that simvastatin could stimulate,the activity of eNOS via its phosphorylation by Akt and AMPK, which provides a new mechanism, other than lipid-lowering effect, for the cardiovascular protection of statins.     

人激肽释放酶基因对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的干预效应

目的 探讨人组织型激肽释放酶（HK）基因对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的干预效应及有关机制。 方法 将HK基因克隆入重组腺相关病毒载体(rAAV)中,经三质粒共转染方法在293细胞（HEK293）中包装成rAAV-HK病毒。雄性Wistar大鼠（n＝24）按随机数字表法分为假手术组和5/6肾切除组,1个月后5/6肾切除组再按随机数字表法分为单纯手术组（n＝6,不给予病毒注射)、实验组[n＝6,单次尾静脉注射1×1011 蚀斑形成单位(pfu)的rAAV-HK病毒]和对照组（n＝6,单次尾静脉注射1×1011 pfu的rAAV-GFP病毒）。于术前、术后1个月（基因转染前）及转染后1~3个月测大鼠尾动脉血压。转染3个月后处死动物,取其心、肾等脏器,提取总RNA及蛋白质,经RT-PCR、Western印迹及ELISA方法检测HK基因在大鼠体内表达。肾组织切片行Masson染色观察大鼠肾间质病理变化,并行免疫组化染色检测缓激肽B2受体（BKB2R）和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)在肾脏的分布。Western印迹检测肾组织BKB2R、AT1R及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（p-MAPK）蛋白的表达水平。 结果 HK基因转染3个月后,与对照组相比,实验组大鼠血压显著下降[（163±13） mm Hg比（217±16） mm Hg,P < 0.01）]（1 mm Hg＝0.133 kPa）。与假手术组相比,单纯手术组和对照组肾间质有较多胶原沉积,呈现明显纤维化,而实验组胶原沉积较少,纤维化程度较轻,肾小管间质损伤指数显著小于对照组（1.33±0.73比3.01±0.62,P < 0.01）。免疫组化检测发现,BKB2R 和AT1R主要分布于肾小管上皮细胞。基因转染后,肾组织BKB2R蛋白表达水平显著上调（P < 0.05）,而 AT1R蛋白表达水平显著下调（P < 0.05）;信号传导分子p-MAPK蛋白表达水平显著下调（P < 0.05）。 结论 HK基因导入明显减轻5/6肾切除大鼠肾间质纤维化程度, 其机制可能与其调节BKB2R和AT1R蛋白在肾组织中的表达水平有关。上述作用可能与MAPK信号传导途径有关。