自体LAK高效扩增法的建立及活性诱导实验

目的 建立体外高效扩增自体ＬＡＫ细胞方法，并测定诱导扩增的ＬＡＫ细胞是否具有杀瘤细胞作用及表型变化。方法 取２８例不同类型的肿瘤病人中静脉血液，经密度梯度离心获取ＬＡＫ细胞前体，以白细胞介素２（ＩＬ－２）作为诱导剂，应用独特的液相三步扩增方法扩增自体ＬＡＫ细胞。分别用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法，测定细胞表型和对肿瘤细胞的杀伤活性，并与对照组细胞进行比较。结果 以该法诱导扩增     

pBV-IL-6重组质粒构建及其在E.coli中的高效表达

目的构建人ＩＬ－６重组质粒（ｒｈＩＬ－６），并使其在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。②方法经计算机分析设计，人工合成３条寡核苷酸引物，通过定点诱变并优化起始区，应用ＰＣＲ扩增及重组ＤＮＡ技术，构建重组质粒ｐＢＶ－ＩＬ－６，并转化至Ｅ．ｃｏｌｉ宿主菌ＤＨ５α中诱导表达，对产物进行纯化和复性，ＭＴＴ法检测生物活性。③结果获得２种ｒｈＩＬ－６高效表达的Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α／ｐＢＶ－ＩＬ－６工程菌，一种表达２０．８ｋｕＩＬ－６全蛋白；另一种表达１６．８ｋｕ，Ｎ端缺失２５个氨基酸ＩＬ－６蛋白。薄层密度扫描分析表达产率，前者为２８．３％，后者为３３．４％，且均具有生物学活性。④结论ｒｈＩＬ－６构建成功，并获高效表达     

EB病毒在子宫颈癌中的表达

目的：分析子宫颈EB病毒感染与宫颈癌的关系。方法：采用PCR方法,分别检测28例宫颈癌、39例宫颈上皮内瘤变和13例正常宫颈中的EBV表达。结果：EBV阳性表达率在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变、正常宫颈细胞中分别为68%、51%和15%,在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变中的表达高于正常宫颈组织,三组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：EBV感染与宫颈癌发病密切相关。     

CD_3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。②方法取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。③结果ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８和ＣＤ１６的特殊异源淋巴细胞群。其中ＣＤ４亚群表型数量随培养时间延长明显升高（χ２＝７．６６，Ｐ＜０．０１），而ＣＤ１６则明显下降（χ２＝５．２３，Ｐ＜０．０５），该亚群表型变化可能与培养时间有关。④结论ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的杀肿瘤细胞作用，同时也可作为基因治疗的理想载体细胞。     

pBV—IL—6重组质粒构建及其在E.coli中的高效表达

目的 构建人ＩＬ－６重组质粒（ｒｈＩＬ－６），并使其在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。方法 经计算机分析设计，人工合成３条寡核苷酸引物，通过定点诱变并优化起始区，应用ＰＣＲ扩增及重组ＤＮＡ技术，构建重组质粒ｐＢＶ－ＩＬ－６，并转化至Ｅ．ｃｏｌｉ宿主菌ＤＨ５α中诱导表达，对产物进行纯化和复性，ＭＴＴ法检测生物活性。结果 获得２种ｒｈＩＬ－６高效表达的Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α／ｐＢＶ－ＩＬ－６工程菌，一种表达２０     

自体LAK高效扩增法的建立及活性诱导实验

目的建立体外高效扩增自体ＬＡＫ细胞方法，并测定诱导扩增的ＬＡＫ细胞是否具有杀瘤细胞作用及表型变化。②方法取２８例不同类型的肿瘤病人外周静脉血液，经密度梯度离心获取ＬＡＫ细胞前体，以白细胞介素２（ＩＬ－２）作为诱导剂，应用独特的液相三步扩增方法扩增自体ＬＡＫ细胞。分别用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法，测定细胞表型和对肿瘤细胞的杀伤活性，并与对照组细胞进行比较。③结果以该法诱导扩增４～１２ｄ，细胞数量增加１２０倍，对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ细胞杀伤活性最高达６１．７％和４０．１％（效∶靶＝５０∶１），与对照组细胞比较，差异有极显著性（ｔ＝４．５～４．７，Ｐ＜０．０１）。自体ＬＡＫ细胞具有成熟Ｔ细胞表型特点（ＣＤ３和ＣＤ８）。④结论此法可扩增出高数量和高效杀肿瘤细胞活性的自体ＬＡＫ细胞，并可推广临床应用     

常见皮肤癣菌的基因分型

目的建立快速、简便鉴别4种常见皮肤癣菌（红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌）的分子生物学基因分型方法。方法将我室分离培养得到的18株红色毛癣菌、12株须癣毛癣菌、8株絮状表皮癣菌和6株石膏样小孢子菌接种于PDA培养基上培养2周后,分别收集菌丝体并用氯化苄法提取DNA,运用随机扩增多态性DNA分析的方法,以单个引物（GACA）4进行随机扩增。检测聚合酶链反应产物,并根据电泳后指纹图谱的差异进行种属间鉴别。结果同种不同株的皮肤癣菌电泳后指纹图谱相同,不同种皮肤癣菌电泳后指纹图谱有显著差异。结论运用随机扩增多态性DNA分析的方法,可对红色毛癣菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌和石膏样小孢子菌的基因型进行快速鉴别,能够协助临床早期诊断。     

土拉菌套式PCR检测技术的研究

[目的]为快速诊断土拉菌病拟建立套式PCR技术。[方法]设计出2对特异引物,取1986年1月收集的13名土拉菌病患者的抗凝血及对照组细菌,提取DNA并进行套式PCR扩增。[结果]套式PCR检测到患者血液中土拉菌阳性率为84.6%,对照组细菌均为阴性。用直接PCR能观察到10条位于900 bp的暗带。而行套式PCR后能观察到11条亮度较高为于550 bp处的条带。[结论]套式PCR方法检测土拉菌具有特异性强、敏感性高,简便快速的特点。     

综合过继免疫治疗恶性肿瘤临床疗效观察

１９９４～１９９７年，我们应用自体免疫细胞（ＬＡＫ，ＣＤ３ＡＫ，ＴＡＬ和ＴＩＬ）加ＩＬ－２和单用ＩＬ－２，对１２０余例肿瘤病人进行了治疗。本文对疗程较为完整，资料较齐全的３９例治疗结果总结如下。１资料和方法１．１一般资料３９例肿瘤病人来自青岛医学院第...     

土拉弗氏菌病的研究进展

土拉弗氏菌病(Tularaemia,或称野兔热、鹿蝇热)是一种急性、感染性人兽共患疾病,发生在北半球的多数国家,流行于北纬30°~71°地区。其致病菌是土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,简称土拉弗氏菌)。1912年McCoy从美国土拉县的黄鼠中分离出一株新菌种,根据该地地名命名为土拉菌。1919年,美国首都华盛顿的一名公共卫生官员E·Francis被派到犹他州调查鹿蝇热病,做了大量研究工作,鉴于E·Francis的贡献,该菌重命名为土拉弗朗西斯菌[1]。1病原学土拉弗氏菌为需氧球杆状小杆菌(0·2μm×0·2~0·7μm),无芽孢,无动力;革兰氏染色阴性,染色…