华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段原核表达及其抗原性分析

目的 通过克隆和表达获得华支睾吸虫3个半胱氨酸蛋白酶N端短片段重组蛋白并分析其抗原性。方法 以pET-28a-CsCP1-3重组质粒为模板进行目的片段CsCP1a-3a PCR扩增,构建pET28a-CsCP1a-3a表达载体,并转化至BL21(DE3)大肠埃希菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析;表达产物经变性、纯化及复性,与华支睾吸虫感染大鼠血清行Western blot分析。结果 成功构建pET28a-CsCP1a-3a重组质粒;SDS-PAGE分析显示,重组蛋白CsCP1a-3a以包涵体形式表达;重组蛋白CsCP1a-3a可被华支睾吸虫感染后第4、5周大鼠血清识别。结论 重组蛋白CsCP1a-3a具有较好抗原性,可作为华支睾吸虫感染诊断候选分子。     

人芽囊原虫感染致大鼠肠道紧密连接破坏的机制研究

目的　探讨大鼠感染人芽囊原虫后引起肠道屏障损伤的机制。方法　将30只SD大鼠随机分为对照组及感染1、3、6、9周组（感染组）,每组6只。各感染组大鼠经口感染人芽囊原虫2 × 108个/鼠,对照组大鼠经口灌胃等体积磷酸盐缓冲液。分别于感染后1、3、6、9周收集7 h大鼠尿液检测肠道通透性,随后采用颈椎脱臼法处死大鼠,取盲肠组织检测肠道细胞通透性。采用实时荧光定量PCR技术检测大鼠盲肠细胞紧密连接跨膜蛋白基因Occludin、Claudin?1及凋亡相关基因Bcl?2和Bax表达水平;以原位末端标记法（TdT?mediated dUTP nick?end labeling, TUNEL法）检测盲肠细胞凋亡。 结果　对照组及感染1、3、6、9周组大鼠尿液中乳果糖与甘露醇排出率比值中位数分别为0.29、0.72、0.44、0.46和0.38,差异有统计学意义（H = 12.09,P < 0.05）。感染组大鼠肠上皮细胞可见虫体入侵并出现上皮损伤,透射电镜下可见细胞间紧密连接破坏。对照组及感染1、3、6、9周组大鼠盲肠组织中Occludin基因相对表达量分别为1.04、0.62、0.71、0.68和0.96,Claudin?1基因相对表达量分别为1.03、0.61、0.63、0.76和0.86,Bcl?2基因相对表达量分别为1.08、0.70、0.75、0.74和1.03,Bax基因相对表达量分别为1.00、1.57、1.33、1.35和1.10,差异均有统计学意义（F = 2.86、2.85、3.37和4.45,P均< 0.05）;盲肠组织凋亡染色阳性细胞数中位数分别为1.00、13.00、9.00、3.50个和1.00个,差异有统计学意义（H = 22.95,P < 0.01）。结论　人芽囊原虫感染可能通过引发大鼠肠道上皮细胞凋亡而破坏细胞间紧密连接,导致肠道通透性增高,进而破坏肠道屏障功能。     

粪类圆线虫iPGM蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的采用生物信息学软件分析粪类圆线虫iPGM蛋白(SsiPGM)的结构和功能。方法从NCBI蛋白质数据库中获取SsiPGM的氨基酸序列,利用ProtParam、ProtScale、ProtComp、SignalP、TMHMM、NetPhos、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI等生物信息学在线软件分析预测SsiPGM蛋白的理化性质、亲疏水性、亚细胞定位、信号肽序列、二级和三级结构、磷酸化位点和B细胞抗原表位等结构;通过Pairwise Sequence Alignment Tools在线分析SsiPGM与其他物种来源iPGM间的序列一致性;使用MEGA X程序对不同物种来源的iPGM进行多序列比对并构建邻接树,进行系统进化分析。结果SsiPGM蛋白由517个氨基酸组成,分子式为C;H;N;O;S;等电点5.9,不稳定系数31.28,脂肪族氨基酸指数78.43,平均疏水性-0.234。所以该蛋白是一种亲水性且稳定位于细胞质中不含信号肽的非分泌蛋白,共含有28个磷酸化位点;二级结构主要为无规则卷曲(Cc)和α-螺旋(Hh),分别占38.1%和33.08%,其次是β-折叠(Ee)19.73%和β-转角(Tt)9.09%;该蛋白含有7个T细胞表位和21个B细胞抗原表位;预测SsiPGM蛋白与秀丽隐杆线虫、旋盘尾丝虫和犬恶丝虫的iPGM亲缘关系较近,序列一致性分别为81.7%、81.5%和80.7%。结论SsiPGM蛋白含有多个T细胞和B细胞优势抗原表位,可作为研发粪类圆线虫病新型靶向药物的候选蛋白。     

关于几起高压电缆中间接头的故障分析与应对措施

针对近期发生的几起超高压电缆线路中间接头在交接试验时发生击穿的案例,通过故障解剖,分析了造 成电缆中间接头击穿的原因,提出了预防措施。     

高压单芯电缆内置光纤安装技术问题探讨

近两年,佛山地区的高压单芯电缆分布式光纤在线测温系统应用较多,本文结合工程实际,对测温光纤的敷设形式、测温光纤的结构、含光纤电缆的生产、光纤的接续施工、故障案例分析、光纤金属铠装与电缆金属层形成闭合回路等问题进行了探讨,提出了自己的观点,有一定的参考价值。     

220kV长城II回电缆线路护层接地系统故障原因分析

通过对220kV城东变220kV长城II回电缆线路护层接地系统故障进行分析,找出了可能的故障原因,提出了预防及改进措施。     

PD-1/PD-L1在弓形虫感染小鼠妊娠中晚期的表达及与IFN-γ的相互调节作用

目的　探讨程序性死亡蛋白（programmed death protein?1, PD?1）及其配体PD?L1在小鼠妊娠早期弓形虫感染后母胎界面的动态表达,及其与γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）的相互调节作用。方法　将20只孕0 d母鼠随机平均分为4组,即孕12 d对照组（12 dpn组）、孕12 d感染组（12 dpi组）和孕18 d对照组（18 dpn组）、感染组（18 dpi组）。在妊娠第6天时对12 dpi组、18 dpi组孕鼠给予150个弓形虫PRU株速殖子腹腔注射,12 dpn组、18 dpn组孕鼠则注射等量PBS。于小鼠妊娠第12天和第18天分别处死4组小鼠,计数胎盘、胎儿数量并称重。取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测胎盘、子宫组织中PD?1与PD?L1、弓形虫表面抗原SAG?1及细胞因子IFN?γ mRNA表达水平,并分析PD?1与IFN?γ表达的相关性。设置12 dpn、12 dpi、18 dpn、18 dpi组以及12 dpi PBS阴性对照组、18 dpi PBS阴性对照组,采用免疫组织化学染色检测孕鼠子宫、胎盘组织中PD?1表达水平。结果　 12 dpi组和18 dpi组孕鼠均出现胎盘和胎儿发育不良等不良妊娠结局,且胎盘重量和胎儿体质量均低于12 dpn组、18 dpn组 (t = 5.52、11.44、12.63、11.67,P 均< 0.01)。组织病理观察结果显示,12 dpi组和18 dpi组孕鼠胎盘组织蜕膜及连接区连接疏松,胎盘及子宫组织中均见大量炎性细胞浸润和淤血。经qPCR检测发现,12 dpn、12 dpi、18 dpn组和18 dpi组小鼠胎盘和子宫组织中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达均存在差异（F = 22.48、51.23、9.61、47.49、16.08、21.52、28.66、238.90,P 均< 0.05）,其中12 dpi组小鼠胎盘（P均 < 0.05）及子宫组织中（P均 < 0.05）中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达水平均较12 dpn组升高。与18 dpn组相比,18 dpi组小鼠胎盘组织中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P 均< 0.05）,胎盘和子宫组织中IFN?γ和SAG?1表达水平均升高（P均< 0.05）。与12 dpi组相比,18 dpi组孕鼠胎盘和子宫中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P均< 0.05）。免疫组化染色结果显示,PD?1在12 dpi组孕鼠胎盘组织中浸润的炎性细胞上有表达,在18 dpi组中表达不明显;PD?1在12dpi组孕鼠子宫上皮呈强阳性表达,而在18 dpi组呈弱阳性表达。相关分析结果显示,12 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.99,P ＜0.01）、子宫（rs = 0.97,P ＜0.01）,18 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.82,P ＜ 0.05）、子宫（rs = 0.81,P ＜0.05）中 IFN?γ与PD?1 mRNA表达水平均呈正相关。结论　小鼠妊娠早期感染弓形虫后,胎盘和子宫中PD?1/PD?L1表达呈孕中期显著上升、孕晚期下降的动态变化,且与同期 IFN?γ表达趋势一致,其中PD?1与IFN?γ表达呈正相关;故推测在孕鼠妊娠中、晚期,母胎界面PD?1/PD?L1通路与弓形虫感染所诱导的IFN?γ有相互调节关系。