人谷胱甘肽硫转移酶A1原核表达系统的构建及高效表达

目的　对人谷胱甘肽硫转移酶A1(GSTA1)原核表达系统的构建及高效表达。方法　采用RT -PCR方法将肝组织中提取总RNA扩增人GSTA1基因的cDNA序列 ,将其插入到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,构建重组表达质粒 ,并用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定 ,并进行了高效表达。结果　人GSTA1克隆到原核表达载体pET30a多克隆位点中 ,测序结果同GenbankGSTA1(GI:2 2 0 914 5 3)cDNA序列相比较 ,在 5 12位点T→C ,氨基酸由Met→Thr,同源性为 99% ,基因登陆号为AY5 32 92 8。通过IPTG诱导表达 ,在 34.4KDa处 1、2、3、4小时的表达量分别为 4 1.8%、6 8%、6 8.3%、83%。结论　经Westernblot分析 ,证实GSTA1基因在原核表达系统中有蛋白质表达     

连续消毒中大肠埃希菌O_(157)∶H_7对洗必泰抵抗力的变化和与质粒pO_(157)的关系

目的　研究连续消毒中大肠埃希菌O157∶H7对洗必泰抵抗力的变化及其与质粒 pO157关系。方法　用洗必泰连续消毒 6株大肠埃希菌O157∶H710代 ,消除连续消毒前后试验菌的质粒 ;对比消毒前后试验菌对该消毒剂的抵抗力、质粒图谱以及质粒酶切谱。结果　连续消毒 10代后 ,试验菌对洗必泰的抵抗力不变 ;试验菌的质粒图谱以及质粒pO157的ClaⅠ酶切图谱均无明显变化 ;消除连续消毒前后试验菌的质粒后 ,试验菌对洗必泰的抵抗力不变。结论　连续消毒不会使试验菌对洗必泰的抵抗力增加 ,且试验菌对洗必泰的抵抗力与质粒 pO157无直接关系。     

淋球菌外膜蛋白NspA基因重组子的构建与表达

目的构建淋球菌标准株外膜蛋白NspA基因重组子，在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达外膜蛋白NspA。方法提取淋球菌标准株基因组DNA，PCR扩增其NspA基因，插入表达质粒载体pET-30c（＋）中，构建pET-NspA重组子，转化表达宿主大肠杆菌BL21（DE3），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达，SDS-PAGE和Western Blot检测表达蛋白。结果成功构建了淋球菌标准株的pET-NspA大肠杆菌表达重组子，经IPTG诱导表达后，该蛋白在大肠杆菌中高效表达。结论淋球菌外膜蛋白NspA在大肠杆菌中的成功表达，为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防淋病的疫苗奠定了基础。     

-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌对乳糖细胞毒性的缓解作用

目的体外评价Β-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌缓解乳糖对细胞毒性作用的效果。方法建立乳糖细胞毒性作用CACO-2细胞模型,采用形态学观察及细胞增殖活性等指标检测该菌对乳糖细胞毒性的作用效果。结果成功建立乳糖细胞毒性作用CACO-2体外模型,所构建的Β-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌能够保护细胞耐受乳糖毒性而呈现正常形态,并能提高乳糖作用下的细胞活性(P<0.01)。结论Β-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌在体外可显著的降低乳糖的细胞毒性作用,为进行其食品级改造奠定了基础。     

T4、φχ174D和 f2三种噬菌体对戊二醛消毒剂抵抗力的比较研究

目的筛选出消毒实验中评价消毒因子对病毒灭活效果的指示噬菌体.方法比较研究噬菌体T4、φχ174D和f2对戊二醛消毒剂的抵抗力.消毒剂对噬菌体的灭活效果采用悬液定量灭活试验、中和剂鉴定试验、噬菌体的检测采用双层琼脂法.结果①3000 mg/L的戊二醛对噬菌体T4作用20 min,或6000 mg/L的戊二醛对噬菌体T4作用5 min即可达到消毒水平(对噬菌体T4的灭活对数值(LIV)或噬菌体T4的对数减少值[LRV)(log10No-log10Nt)≥4.00 log10];②2500 mg/L的戊二醛对噬菌体φχ174D作用20 min,或5000 mg/L的戊二醛对噬菌体φχ174D作用5 min达到消毒水平;③4000 mg/L的戊二醛对噬菌体f2作用40 min,或8000 mg/L的戊二醛对噬菌体f2作用10 min达到消毒水平.结论上述三种噬菌体对戊二醛的抵抗力由强到弱为:噬菌体f2>噬菌体T4>噬菌体φχ174D.     

碘伏对蜡状杆菌芽胞杀灭机理的研究

试验表明,碘伏对蜡状杆菌芽胞具有较强的渗透力和氧化力,可破坏通透性屏障,使酶活性消失,并导致核心物质漏出,以至死亡。     

表达型质粒载体pMG36e在宿主菌中的遗传稳定性研究

目的　研究表达型质粒载体pMG36e在大肠杆菌JM10 9和乳酸乳球菌MG136 3两种宿主菌中的遗传稳定性并观察红霉素对其稳定性的影响。方法　按经典质粒遗传稳定性测定方法 ,在有选择压力 (加红霉素 )和无选择压力的条件下 ,测定pMG36e质粒在大肠杆菌JM10 9和乳酸乳球菌MG136 3中的遗传稳定率。结果　pMG36e质粒在大肠杆菌JM10 9中连续传至 12 0代时 ,在有选择压力的条件下 ,质粒稳定率保持在10 0 % ;无选择压力的条件下为 96 % ;pMG36e质粒在乳酸乳球菌MG136 3中连续传至 10 0代时 ,在有选择压力和无选择压力的条件下 ,质粒稳定率均为 98%。结论　pMG36e质粒在两种宿主菌中均具有较好的遗传稳定性。红霉素对pMG36e质粒的遗传稳定性无显著影响。     

四川省大肠杆菌O157:H7分子流行病学、耐药性及对消毒剂抗性研究

目的研究从四川省分离的大肠杆菌O157：H7菌株流行病学特征。方法用多重PCR测定67株大肠杆菌O157：H7的sit、eaeA、hly毒力基因；对不同来源的大肠杆菌O157：H7进行质粒和PFGE分型；测定67株大肠杆菌O157：H7的耐药性和对消毒剂的抗力。结果62．7％的株菌（42／67）携带有毒力基因，毒力图谱类型主要为slt1＋slt2＋eaeA＋hly。67株菌共有6种质粒谱型和7种PFGE谱型。64．2％（43／67）的菌株分别对7种不同的抗生素耐药，其中有23、35、34株菌分别对氨苄青霉素、四环素和SMZ耐药。不同来源的大肠杆菌O157：H7抗性谱不同，80．6％（54／67）的菌株对酒精和季铵盐产生了抗性，所有菌株对洗必泰敏感。结论四川省不同来源的大肠杆菌O157：H7带毒率相似，但毒力基因谱型不完全相同。细菌有较高的耐药性。菌株对常用消毒剂有很高的抗性，在消毒灭菌时需要用较大剂量的消毒剂才能将其杀灭。不同来源的大肠杆菌O157：H7耐药性、质粒和PFGE谱型有一定的相似性，提示菌株可能在人、动物、食品以及外环境之间相互传播并存在流行的可能。     

细菌微菌落及其初步应用

作者用醋酸纤维素薄膜作载体,建立了一种新颖的、快速的、简单实用的微菌落技术,即将细菌接种于膜,培养3～6小时后,透明、固定、染色,观察微菌落形态或进行微菌落计数。使用该技术,对139株细菌的微菌落进行观察,积累了大量微菌落资料;借助微菌落特征,对72株葡萄球菌中的金黄色葡萄球菌进行鉴定,与常规法的符合率为90.28％;并首次将计数微菌落的方法用于临床尿液标本细菌的快速定量测定,与常规法比较,具有明显的优越性。     

乙型肝炎感染过程中的HBeAg及其预后意义的前瞻性研究

我们在71名易感的肿瘤病人中前瞻性地研究了乙型肝炎过程及结局中 HBeAg 的意义。这些病人暴露于因疏忽而被含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的血浆所污染的肿瘤细胞疫苗。45名病人(63%)受到感染。这45名病人表现为三种急性血清反应型:有HBsAg 和 HBeAg 的28人(62%);仅有 HBsAg 的8人(18%);最初有抗 HBs 的9人