重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒的免疫原性分析

目的　研究重组人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV 6 )病毒样颗粒(virus likeparticle ,VLP)的免疫原性。方法　重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的HPV 6L1VLP(L1 VLP)和HPV 6L1+L2VLP(L1+2 VLP)经鉴定后 ,用于免疫BALB/c小鼠 ,对诱导的体液免疫和细胞免疫反应进行了检测。结果　电镜观察显示L1 VLP和L1+2 VLP二者形态上无明显差异 ,为圆形颗粒 ,直径约 5 0nm ,SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,L1+2 VLP中L1和L2蛋白摩尔比例为 4∶1。用ELISA法测定免疫小鼠血清抗体滴度 ,加佐剂L1 VLP免疫组和加佐剂L1+2 VLP免疫组血清针对HPV 6L1VLP的滴度在 1∶10 0 0 0以上 ,高于未加佐剂组免疫血清滴度 (1∶2 0 0 0 ) ,L1+2 VLP免疫诱导出了特异于L2抗原的抗体。血清抗体主要识别HPV 6构象依赖性抗原表位 ,与HPV 11抗原显示出一定的交叉反应 ,而与HPV 16无明显交叉反应。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经HPV 6L1VLP再激活后出现了特异性增殖反应 ,3H TdR掺入值与未免疫组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,L1 VLP和L1+2 VLP两组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,L1 VLP和L1+2 VLP免疫组刺激指数 (SI)分别为 6 .4和 6 .2 ,阴性对照组SI为 1.1。HPV 6L1VLP再刺激特异地诱导免疫组脾淋巴细胞IL 2和IL 10分     

人乳头瘤病毒16型修饰后E6E7基因免疫原性增强

利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPVl6)E6E7融合基因(fmE6E7)，研制治疗HPVl6相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后，插人真核表达质粒获得pVRl012-fmE6E7，瞬时转染Cos-7细胞，免疫荧光法检测证实其表达后，在C57BL／6小鼠后腿肌肉进行裸DNA免疫，5lCr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性Cytotoxic T lymphocyte，CTL)，间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。研究表明修饰后的中国地方株E6E7融合基因可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应，与单独野生型E7基因免疫相比，E6E7融和基因可更好的活化CTT反应。表明修饰后消除转化活性的中国地方株E6E7融合基因可作为HPVl6治疗性DNA疫苗的靶基因。     

人乳头瘤病毒的诊断与检测

人乳头瘤病毒(HPVs)是一类无包膜的双链小的DNA病毒.研究表明,HPVs是首要的性传播病毒,目前全世界范围妇女的平均HPV感染率为10.5%(95%Cl:9.9%～11.0%),其中在尼日利亚,妇女中HPV的感染率达到25.6%(95%Cl:22.4%～28.8%).     

人白细胞介素18cDNA编码区存在基因变异

目的：为了获得中国人白细胞介素１８ｃＤＮＡ。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ方法从中国人７种组织标本中获取ＩＬ－１８ｃＤＮＡ。结果：７种组织中有６种组织标本ＩＬ－１８ｃＤＮＡ序列与报道序列存在有意义突变。结论：ＩＬ－１８基因在人体多种组织表达，且存在多态性。     

人乳头瘤病毒16型E6基因表达产物单克隆抗体的制备研究

将含有人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ_（１６））Ｅ_６基因的重组质粒ＰＡＳ１－ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６转染大肠杆菌ＡＲ１２０，在萘啶酮酸诱导下进行表达，表达产物经分离、纯化和鉴定获得一种分子量为１９０００的Ｅ_６表达蛋白。用纯化后的Ｅ６蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０－Ａｇ１４在ＰＥＧ_（４０００）作用下进行融合，经ＨＡＴ培养基筛选杂交瘤细胞株，甲基纤维素半固体培养基克隆，克隆筛选，ＥＬＩＳＡ检测和再克隆，得到一株持续稳定分泌抗ＨＰＶ_（１６）Ｅ_６蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤株ＲＡＣ_６。     

抗人子宫颈癌单克隆抗体的制备及其特征的初步研究

应用单克隆抗体技术制备具有未经纯化的肿瘤细胞抗原中某种特异或相对特异抗原的单克隆抗体,这对肿瘤免疫的理论研究和实际应用均有重要意义。关于人宫颈癌单克隆抗体国外已有报道并已有人—人细胞融合产生的抗宫颈癌单克隆抗体,但国内尚无报道.本研究以人子宫颈癌细胞株CC-801为抗原免疫小鼠,制备出抗人子宫颈癌杂交瘤细胞株CEB9,并对其分泌的单克隆抗体进行了初步的鉴定.     

不同微生物佐剂S-180瘤苗的免疫效应和抑瘤作用

 目的　比较肿瘤主动特异性免疫治疗中具有佐剂作用的白色念珠菌、李斯特菌及卡介苗的免疫调节效应和抑瘤作用。方法　选择白色念珠菌、李斯特菌、卡介苗各自联合小鼠S-180肿瘤疫苗,皮下免疫接种荷瘤小鼠,检测小鼠脾细胞IL-2、IFN-产生水平,腹腔MTNF-α产生水平,观察荷瘤小鼠瘤体重量和存活期。结果　三种微生物佐剂均能协同瘤苗增强免疫小鼠IL-2、IFN-和TNF-α的产生能力(P<0.01,0.05),有效抑制足垫部移植瘤的生长,抑制率在62.8%～75.8%之间,显著高于单独注射瘤苗组(P<0.01),延长腹腔植瘤小鼠平均存活期7～14天,白色念珠菌、李斯特菌协同提高腹腔植瘤小鼠存活率20%。结论　白色念珠菌和李斯特菌与卡介苗具有同样的佐剂效应,能够协同瘤苗有效抑制肿瘤生长。     

鲍温氏病组织人乳头瘤病毒16型结构基因L1的克隆及其序列分析

本研究采用ＰＣＲ法从中国妇女鲍温氏病组织标本扩增获得了宫颈癌密切相关的人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）的晚期基因Ｌ１,并装入测序载体测序分析了其ＤＮＡ的序列,与标准型进行了比较,发现有若干变异,此研究对序列及变异意义进行了分析和讨论,为今后Ｌ１基因分子流行病学调查,Ｌ１蛋白的结构与功能研究、疫苗研制以及ＨＰＶ相关的基础性研究提供了有用的资料,同时在国内外首次报道了鲍温氏病组织中ＨＰＶ１６Ｌ１的序列     

北京地区人乳头瘤病毒16E6E7基因变异和序列分析

目的 了解北京地区人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7结构特点，为研制HPV16疫苗奠定基础。方法 从HPV感染组织中提取DNA，PCR鉴别其型别，从单独HPV16感染的标本中分离HPV16 E6E7基因，克隆入载体pGEM-3ZF，进行双向测序，与德同标准株进行比较。结果 构建了北京地区HPV16E6E7的重组质粒。测序结果表明该基因全长为776bp，与已发表的德同标准株长度相等，3处核苷酸发生变异，同源性99．7％。分别位于第60、96和565nt(相当于HPV16全长序列中第142、178和647nt)，2处位于F6区，1处位于E7，其对应氨基酸分别为第20、32和188个氨基酸，分别由Pro(CCA)、Asp(GAT)和Asn(AAT）变异为Pro(CCG)、Glu(GAG)和Ser(AGT)。结论 北京地区HPV16E6E7基因结构与德国标准株存在差异。     

人乳头瘤病毒和人子宫颈鳞状上皮细胞癌关系的超微结构与基因分子

以人乳头瘤病毒(HPV)DNA为探针,通过核酸杂交方法,检测宫颈癌病人活体细胞DNA中的病毒相关序列,用透射电镜观察癌细胞的形态特点。32例宫颈癌组织中23例与HPV16型探针杂交呈阳性反应,阳性率为72％。杂交阳性的癌细胞核内小体的出现率增加。