抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的:制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体,并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法:采用来自墨西哥株(Mexicanstrain)的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Mex)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性克隆,并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株(Burmastrain)和美国株(USAstrain)的重组蛋白(p166Bur、p166US)进行交叉反应测定。结果:最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株,即D8G10、E5E12、D4A3、B7E6。其中D8G10,E5E12和B7E6细胞株的培养上清液,还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论:利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体,初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白(p166Bur、p166US、p166Mex)含有一种共同的抗原表位。     

四甲基联苯胺在ELISA和免疫斑点试验中的应用

本文以间接法ELISA检测轮状病毒特异性IgG为模型,对新底物四甲基联苯胺(TMB)与邻苯二胺(OPD)进行了比较研究,结果发现,TMB具有下列优点:①稳定性好;②敏感性高;③酶结合物和H_2O_2用量少。而且TMB又无致癌性,故是辣根过氧化酶较理想的底物。此外,还首次将TMB应用于免疫斑点试验,获得成功。     

食用乙肝疫苗的研究进展

经口传递的食用乙肝疫苗与传统的注射疫苗相比具有安全、有效、易于推广等诸多优势，近年来受到广泛的重视。目前利用转基因植物生产食用乙肝疫苗的研究已取得显著的进展，并开始应用于人的临床实验。本文综述了近年来在该领域的研究成果，展望了食用乙肝疫苗的良好前景。     

一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段

目的：比较戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617（aa472～617）和pN477-C613（aa477～613）的免疫原性，找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法：表达和纯化pN472-C617和pN477-C613，分别免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价，并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果：pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达，纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV，阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制；而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论：重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力，是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段，可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。     

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的：制备戊型肝炎病毒(HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白(p166Bur和p166Mex)的单克隆抗体(McAbs)，用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法：将免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗-p166Bur和抗-p166Mex McAbs的杂交瘤细胞株，然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEV ORF2编码蛋白p166的免疫反应性。结果：获得4株杂交瘤细胞株，即分泌抗-p166Bur McAbs的2G2、2B1以及分泌抗-p166Mex McAbs的D8G10和E5E12，其中2B1分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合，而其余3株分泌的McAbs既能与Ⅰ、Ⅱ基因型HEV的p166重组蛋白发生反应，也能与Ⅲ、Ⅳ基因型的p166蛋白反应。结论：HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。     

重症急性呼吸综合征的诊断与治疗

重症急性呼吸综合征(SARS)是一种新出现的烈性传染病，其临床表现不典型，主要通过影像学和实验室检查进行诊断；目前SARS尚无特效疗法，治疗方法主要包括药物治疗如抗病毒药、抗生素、激素治疗，呼吸机的应用，血清治疗及中西医结合治疗等方法。     

实验感染HEV Ⅳ型后恒河猴HEVRNA及抗HEVIgM(IgG)动态变化研究

目的观察实验感染HEV(Hepatitis E Virus)Ⅳ型后恒河猴HEVRNA及抗HEV-IgM(IgG)的动态变化,探索HEV Ⅳ型感染的规律.方法用逆转录PCR检测实验动物接种前后血清及粪便HEVR-NA,用酶联免疫法(ELISA)检测血清抗HEV-IgM及抗HEV-IgG,并同步观察其血生化及肝脏组织学的变化.结果感染后的恒河猴均发生了典型的急性肝炎,血清HEVRNA首先呈现阳性,相继出现谷丙转氨酶(ALT)升高、抗HEV-IgM阳性及抗HEV-IgG阳性.结论中国恒河猴是HEVⅣ型感染的较好的动物模型,检验资料为阐明HEVⅣ型感染的规律提供了证据.     

基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定

目的：获得戊型肝炎病毒(HEV)中和表位p166的编码基因，构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法：应用RT-PCR方法从粪便标本中扩增获得HEV VOF2中G6461～G7035片段，通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型，PCR方法扩增该片段中HEV中和表位p166的编码基因，经酶切后克隆于真核表达载体pTR421质粒，并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果：成功克隆了p166的编码基因，其基因型别为Ⅳ型；经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR421质粒，且核酸序列、读码框架正确结论：成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒，为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。     

口服耐受治疗自身免疫病及转基因植物在该领域中的应用

口服耐受的机制已在动物实验中得到阐明。近年来通过口服抗原(耐受原)诱导免疫耐受，靶向性治疗自身免疫病的研究日益受到关注。口服耐受诱导治疗自身免疫病的方法在动物模型研究中获得显著效果，并开始应用于人自身免疫病的临床治疗。但口服免疫耐受性的诱导需要摄人大量的可溶性蛋白抗原，低成本获得充足的口服耐受原是将口服诱导耐受治疗自身免疫病的方法推向临床应用的瓶颈。转基因植物为解决这一关键问题提供了新的途径，其表达系统合成的耐受原已在自身免疫病模式动物中获得成功应用。随着研究的深入，该表达系统有望在诱导口服耐受治疗自身免疫病领域中发挥重要的作用。