基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定

目的：获得戊型肝炎病毒(HEV)中和表位p166的编码基因，构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法：应用RT-PCR方法从粪便标本中扩增获得HEV VOF2中G6461～G7035片段，通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型，PCR方法扩增该片段中HEV中和表位p166的编码基因，经酶切后克隆于真核表达载体pTR421质粒，并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果：成功克隆了p166的编码基因，其基因型别为Ⅳ型；经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR421质粒，且核酸序列、读码框架正确结论：成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒，为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。     

戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同

目的：制备戊型肝炎病毒(HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白(p166Bur和p166Mex)的单克隆抗体(McAbs)，用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法：将免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗-p166Bur和抗-p166Mex McAbs的杂交瘤细胞株，然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEV ORF2编码蛋白p166的免疫反应性。结果：获得4株杂交瘤细胞株，即分泌抗-p166Bur McAbs的2G2、2B1以及分泌抗-p166Mex McAbs的D8G10和E5E12，其中2B1分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合，而其余3株分泌的McAbs既能与Ⅰ、Ⅱ基因型HEV的p166重组蛋白发生反应，也能与Ⅲ、Ⅳ基因型的p166蛋白反应。结论：HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。     

人性化护理在妇科的实施与体会

探索妇科患者实施人性化护理的措施及效果评价,将传统护理学、现代护理学的理论与技术融为一体,加强护理人员培训工作;建立和谐的人文环境;规范职业形象及护理用语;加强语言沟通、融洽护患关系;采取优质全方位服务。经实施人性化护理问卷调查后,满意度上升。从而改善护患关系,提高服务质量,减少纠纷,并体现护士的工作价值。     

卡托普利治疗高血压病并慢性肾衰的疗效及安全性研究

目的探讨卡托普利用于高血压并慢性肾衰治疗的有效性及安全性。方法选取88例高血压病并慢性肾衰患者资料进行分组,对照组给予常规治疗,治疗组加用卡托普利治疗,对比两组患者的治疗效果。结果经治疗,治疗组患者BUN、Scr等指标显著下降,降血压效果及肾功改善程度均优于对照组(P<0.01)。结论卡托普利治疗高血压并慢性肾衰疗效显著,且安全性较高。     

兔戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白的抗原表位分析

目的:研究新发现的兔戊型肝炎病毒(HEV)与所有已知基因型HEV抗原表位的异同,为阐明动物HEV的人畜共患特征及戊型肝炎的诊断提供依据。方法:制备兔HEV ORF2重组蛋白R166(aa452-617),并免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(McAb);采用间接ELISA法及免疫印迹法,检测McAbs与已知基因型HEV ORF2重组蛋白p166Bur(1型)、p166Mex(2型)、p166US(3型)和p166Chn(4型)的交叉反应性。用获得的杂交瘤细胞制备腹水,利用基于PCR的HEV体外中和试验,检测它们对基因1、4型人HEV和兔HEV的中和活性。结果:获得3株稳定分泌抗-R166的McAbs的杂交瘤细胞株,即1C1、6F9和10D2。其中1C1和6F9分泌的McAbs与已知1、2、3、4基因型p166均结合;10D2分泌的McAb只与R166特异结合,而不与1、2、3、4基因型p166结合。3株McAbs腹水均不能中和基因1、4型人HEV和兔HEV,提示3株McAbs针对非中和性抗原表位。结论:兔HEV与已知1、2、3、4基因型HEV既含有共同的抗原表位,也含有不同的抗原表位,具有不同的抗原特征。     

老年肺心病的护理和健康教育

慢性肺原性心脏病是我国北方的常见病,在老年人群中发病率较高。笔者在临床护理中体会到,对于本病要密切观察病情变化,保持呼吸道通畅,改善缺氧症状,做好健康教育,对促进患者的康复有着重要的意义。     

GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定

目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响.方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV 4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELISA检测,鉴定mAb所识别的抗原表位. 结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb 1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应.其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面天然存在的抗原表位,而是GST与HEV ORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位.结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位.     

唾液抗戊型肝炎病毒IgM用于戊型肝炎诊断的探讨

目的应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测唾液中抗戊型肝炎病毒（HEV）-IgM,评价其用于戊型肝炎早期诊断的可行性.方法应用东南大学基因工程疫苗研究所建立的HEV-IgM抗体ELISA检测方法,检测77例急性戊型肝炎患者、63例非戊型肝炎患者及64例正常人的唾液和血清样本中抗HEV-IgM,将唾液和血清两者的检测结果加以比较,并观察标本采集时间对检测结果的影响.结果77份急性戊型肝炎患者血清与唾液抗HEV-IgM阳性符合率为87%;在64份正常对照组及63份其他患者对照组中,血清与唾液抗HEV-IgM均阴性,阴性符合率为100%.标本采集时间对唾液和血清检测结果的相关性无显著影响.结论唾液标本用于抗HEV-IgM检测,特异性好,敏感性较高,具有无创伤、容易采集、操作简便等优点,在特殊情况下可代替血清用于戊型肝炎的诊断,尤其适用于戊型肝炎流行时HEV近期感染的血清流行病学调查.     

不同基因型戊型肝炎病毒的抗原表位分析

目的 研究不同基因型戊型肝炎病毒(HEV)的抗原表位特点。方法 以HEV基因工程重组蛋白p166Bur、p166Mex为免疫原，制备单克隆抗体(McAbs)。采用间接ELISA法及免疫印迹法(Western blot)，检测所制备的McAbs与7种不同基因型和亚型p166(p166Bur、p166Pak、p166Mor、p166Mex、p166Us、p166Nz和p166Chn)的交叉反应性。结果 获得4株稳定分泌基因型相关MeAb的杂交瘤细胞株，即1B5、1D10,1G10和D4A3。经检测，1B5、1D10,1G10分泌的McAbs只与p166Bur及p166Mor特异结合，D4A3分泌的McAb只与p166Mex特异结合。结论 不同基因型HEV存在不同的抗原表位。     

人、猪、禽戊型肝炎病毒血清学关系的研究

目的研究人、猪、禽戊型肝炎病毒（HEV）的血清学关系。方法应用ELISA分别以人、猪、禽HEVORF2重组蛋白p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清及其他标本中抗．HEVIs,G，用SAS软件进行统计学分析，同时进行序列同源性比较。结果p166human和p166swine对HEV实验感染动物血清、HEVORF2重组蛋白免疫血清和单克隆抗体均呈阳性反应，而p268avian均呈阴性反应。以p166human、p166swine、p268avian检测人、猪、鸡血清抗．HEVIgG，戊型肝炎患者血清检出率分别为98．5％、97．7％和1．5％，正常人血清为10．0％、10．0％和4．0％，猪血清为26．9％、25．6％和1．3％，鸡血清为4．3％、2．2％和33．3％。p268avian与p166human或p166swine的检出率差异有统计学意义（P〈0．001）。相关性分析表明，p166human和p166swine对不同样本的检测均呈直线正相关，而p268avitm与p166human或p166swine无直线相关性。人和猪HEVpORt2的序列同源性在88．2％。99．2％，而禽HEV与人、猪HEVpORt2的同源性仅为45．5％～46．1％，其中含有多个插入和缺失突变。结论人和猪HEV血清学关系密切，而禽HEV与人、猪HEV抗原性差异有统计学意义，无血清学相关性。因此禽HEV与人、猪HEV的关系应予进一步考证。