利用酵母双杂交技术筛选鉴定STCH与RanBP9的相互作用

以人应激和分子伴侣蛋白(STCH)为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术在高严格条件下筛选人脑cDNA文库。在SD/-4培养基上共获得156个阳性克隆,将酵母菌扩增后抽提质粒,转化大肠杆菌,进行序列分析,并经过回复杂交验证,潜在的与STCH相互作用的蛋白有:VDAC、MBP2、ZNF251、RanBP9、Phosophate glycolase、β-tubulin、up1、up2和WW adaptor蛋白。基于各候选蛋白与神经系统疾病的关系,选择RanBP9作进一步验证实验。经体外GST-Pulldown和体内免疫共沉淀实验证实RanBP9和STCH能够相互作用,明确RanBP9的羧基端为相互作用的最小功能域。此结果为我们进一步揭示STCH作用的分子机制提供了线索。     

成年起病脊肌萎缩症SMN基因外显子7缺失的初探

目的探讨成年起病的脊肌萎缩症(SMA)患者的运动神经元存活基因SMN的缺失情况。方法用聚合酶链反应-酶切技术对15例SMA病人及33例正常对照的外显子7进行检测,明确有无缺失。结果3例SMA的SMN基因外显子7纯合缺失,其余12例和对照组均阴性。结论SMN基因外显子7缺失可作为成年起病SMA的辅助诊断,以提示SMA遗传的异质性。     

PCR介导化学合成广谱细胞生长因子基因半分子

目的建立一种通过PCR介导的单链法人工合成基因的新方法.方法采用固相亚磷酰胺法,化学合成广谱细胞生长因子基因5′端半分子各寡核苷酸片段,其间按搭桥方式相接,通过重叠PCR扩增的方法以获得全长半分子基因,再通过带酶切位点的两端引物扩增,以获得大量特异的半分子基因,而后克隆,测序,筛选阳性重组子.结果随机检测4个阳性重组子,有3个序列完全正确,一个有一位点突变.结论 PCR介导的单链化学合成法是一种简单、有效的人工合成基因的新方法.     

人工合成广谱细胞生长因子全基因

目的利用PCR介导的半酶促半化学法人工合成经改造的广谱细胞生长因子基因.方法将基因依据其限制性内切酶切点分为左中右三个区段.化学合成若干寡核苷酸小片段,利用PCR的方法介导寡核苷酸小片段之间的连接.最后将三条基因区段组合为完整的基因.结果各区段及全基因的序列经测定与设计方案完全相符.结论广谱细胞生长因子基因的成功合成为将来的表达与应用研究创造了条件,同时证明PCR介导的人工基因合成法是一种简便快速并且行之有效的人工基因合成的新方法.     

美国的卫生系统科学教育及其思考

卫生系统科学(health system science,HSS)是研究卫生系统如何为患者提供卫生保健、患者如何接受和获得卫生保健以及卫生系统如何促进健康的科学。作为美国医学会的核心创新成果之一,HSS教育于2013年开始在美国医学院校试行。HSS与基础医学和临床医学相协同、互补,在患者保健和群体保健中发挥着重要的作用。本文介绍了美国的卫生系统科学的产生、其所包含的知识模块以及在美国医学院校中的实施情况;同时,结合我国医学教育的现状,对我国医学院校开展卫生系统科学教育进行了思考。     

上海大学生非酒精性脂肪肝与载脂蛋白E基因多态性的关系

目的 探讨上海大学生非酒精性脂肪肝(NAFLD)的患病率及与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的相关性.方法 对上海同济大学4 148名在校学生进行问卷调查;采用肝脏超声以及血肝功能、脂蛋白等生化指标检测,将确诊的NAFLD患者与正常者200例,进行外周血PCR-RFLP检测ApoE基因多态性.结果 (1)4 148名大学生中NAFLD检出398例(9.6%),NAFLD患者的体重指数、腰臀比、甘油三酯、总胆固醇、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转移酶均高于对照组(P＜0.01),且随NAFLD程度加重,有递增趋势.(2)NAFLD组和对照组ApoE基因型分布比较差异显著(,P＜0.01).NAFLD E4/4基因型分布频率(5.5%)明显升高,E3/3分布频率(61.8%)明显减低(均P＜0.01).(3)非条件logistic回归分析显示总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、腰臀比、AST、ALT、GGT与E4/4基因型密切相关.结论 ApoE基因112位和158位的氨基酸残基发生相应的变化可引起不同程度的脂质代谢障碍,E4/4可能是导致NAFLD发生的遗传因素之一.     

甲状腺素对仔鼠脑NAPOR基因表达的影响

目的研究甲状腺素对仔鼠脑成纤维母细胞瘤凋亡相关的RNA结合蛋白(neuroblastoma apoptosis-related RNA-binding protein,NAPOR)基因表达的影响。方法以丙基硫氧嘧啶灌胃复制孕鼠甲状腺功能低下模型,采用逆转录-聚合酶链反应检测仔鼠出生后第1、5、10天仔鼠皮层NAPOR的表达,年龄匹配的正常仔鼠为对照组。结果NAPOR在甲状腺功能低下孕鼠所产仔鼠表达均高于正常对照组;在出生后一段时期内,随着鼠龄增长表达降低。结论转录后水平的调节机制可能参与甲状腺素对脑基因表达的影响。     

动脉型肺动脉高压分子标志基因的筛选与鉴定

目的：本研究旨在筛选和鉴定参与动脉型肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）发病的关键基因及相关信号通路,为进一步的转化医学研究提供新靶点。方法：从美国国立生物技术信息中心的GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中获取人GSE113439、GSE117261、GSE48149和GSE53408基因芯片数据集,经过数据筛选后确定PAH组103例和对照组56例进行比较分析。采用NetworkAnalyst软件筛选差异基因（differentially expressed genes,DEGs）,Enrichr和Metascape进行基因本体论（gene ontology,GO）和京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）分析,STRING和Cytoscape建立蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络确定潜在的枢纽基因。采用野百合碱构建PAH大鼠模型,通过测量血液动力学参数与组织形态学观察造模是否成功...     

新生大鼠小脑内发育相关基因的筛选

为筛选脑发育相关的基因,应用新发展的抑制消减杂交技术,以新生大鼠小脑mRNA逆转录cDNA作为测试者(tester),成年大鼠小脑mRNA逆转录cDNA作为驱动者(driver),进行消减杂交,克隆制备成新生大鼠小脑高表达的cDNA文库.挑选出50个重组质粒,测序得到37个不同基因片段序列.再次用反Northern杂交确认有意义的差异表达基因.同时将测序结果与GenBank注册序列进行同源性比较,20个大鼠中首次测得的基因表达序列标签(EST)已被GenBank收录(BG695726-BG695745).     

鸟类发育缺陷增强因子基因的克隆及同源性比较

目的　克隆家鸽、鹌鹑与人类发育缺陷增强因子 (enhancerofrudimentary ,e(r) )基因。方法　依据来源于家鸽的e(r)基因同源EST片段设计引物。提取家鸽与鹌鹑脑组织RNA ,逆转录为cDNA。通过RACE方法克隆家鸽e(r)基因全长序列。依据家鸽序列设计引物 ,通过PCR方法扩增鹌鹑e(r)同源基因的编码区。依据人类e(r)基因序列设计引物 ,利用人类脑组织RNA扩增人类e(r)基因编码区。测定 3种基因的DNA序列 ,并进行同源性比较。结果　自家鸽克隆得到 776bp的e(r)基因全长cDNA序列、自鹌鹑与人类克隆得到 312bp的e(r)基因编码区序列。经同源性比较证实 ,三者序列高度同源 ,其氨基酸序列同源性分别为 99% ,99%和 10 0 %。结论　根据e(r)基因的引物已成功克隆出家鸽、鹌鹑和人类的e(r)基因 ,且同源性很高。