Whole CanA Gene Amplification of Helicobacter pylori and Its Fingerprinting by Restriction Fragment Length Polymorphism

To set up a method of amplification for the whole CagA gene of Helicobacter pylori and its fingerprinting by restriction fragment length polymorphism(RFLP),nested PCR was employed in combination with TD-PCR to amplify the gene and EcoRI and Hind Ⅲ were used to generate the RFLP fingerprinting.Target DNA fragments from 13 of 20 samples were successfully amplified and the relevant RFLP fingerprintings were obtained.It is concluded that the method can be used to amplify the whole CagA gene and CagA gene has apparent diversity of RFLP profile.     

血吸虫重组卡介苗--Sj26GST疫苗的有关毒性研究

由于BCG免疫效果不够理想 ,以及结核分枝杆菌耐药性的产生 ,促使人们开始研制新的结核病疫苗。利用BCG独特的安全性和免疫佐剂作用和日本血吸虫中相对分子量为 2 6× 10 3 的谷光甘肽S转移酶 (Sj2 6GST)的良好免疫原性 ,已经构建出了一种重组卡介苗———Sj2 6GST(rBG Sj2 6GST)。我们就这种疫苗对小鼠的毒性进行了研究 ,从而为疫苗的安全性提供实验依据。将rBG Sj2 6GST疫苗及BCG、含质作者单位 :华中科技大学同济医学院病原生物学系 (蔡昌学 ,叶嗣颖 ,常燕子 ) ;湖北药检专科学校检验系微生物学及免疫学教研室 (胡佳杰 )通讯…     

幽门螺杆菌分离培养技术的改进

探讨自制的改良布氏活性炭巧克力培养基,置厌氧罐蜡烛培养环境分离临床粘膜标本幽门螺杆菌(Hp)的检出率.结果表明66例粘膜标本中分离出Hp54株(81.8%),44株Hp滤液有24株(54.5%)具有细胞毒活性,其中26例消化性溃疡患者有18例(69.2%),18例慢性胃炎患者有6例(33.3%)为Hp(Toxin+)感染.结果提示通过对Hp生物学性状和毒素的检测结果证实,该法可用于临床粘膜标本Hp的常规分离培养.     

肺炎克雷伯菌质粒β-内酰胺酶的筛选及其耐药性

目的了解头孢类耐药肺炎克雷伯菌(KPN)质粒β-内酰胺酶的分布及耐药性,寻求最佳的检测方法. 方法双纸片协同试验和三维试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),表型筛选法和三维试验检测质粒AmpC酶. 结果 182株KPN中,ESBLs检出率双纸片协同试验为42.85%、三维试验为45.05%,两法总符合率为95.12%;表型筛选法显示9株(4.9%)产AmpC酶,三维试验则为7株(3.8%);4株(2.2%)同时产两种酶;产酶株对三代头孢高度耐药,对喹诺酮类、复方新诺明交叉耐药率也很高,对氨基糖苷类有一定敏感性,尚未发现亚胺培南耐药株. 结论 KPN质粒β-内酰胺酶以ESBLs为主;双纸片协同试验操作简便,为检测ESBLs最常用方法;AmpC酶表型筛选法只能作为初筛,确证还需用三维试验证实.     

延龄草 续断上调抗氧化酶表达作用的比较研究

目的:观察和探讨延龄草、续断对氟哌啶醇致痴呆大鼠抗氧化酶表达作用的影响。方法:雄性W istar大鼠40只,随机分为对照组、模型组、实验1组和实验2组。除对照组外,其余大鼠均用氟哌啶醇建立痴呆症(A lzhe im er D is-ease,AD)动物模型,实验组分别腹腔注射延龄草注射液、续断注射液。测定各组大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量。结果:与对照组比较,延龄草注射液、续断注射液均能使模型大鼠多种组织SOD、GSH-PX显著升高,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:延龄草和续断都能增强抗氧化酶表达作用,但对多数组织SOD和GSH-PX表达值的影响,延龄草显著强于续断。     

幽门螺杆菌对6种抗生素的耐药性及其机制的研究

目的了解幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）对6种常用抗生素的耐药状况，探讨耐甲硝唑rdxA基因突变与耐药性的关系。方法分离培养76株Hp，以琼脂稀释法检测Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉（红）霉素、阿莫西林、利福平的最小抑菌浓度（Mininum Inhibitory Concentration，MIC），再用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因rdxA,DNA测序分析敏感株和耐药株耐药基因的序列与耐药性的关系。免疫印记（westem Blotting）分析耐药基因的表达与耐药性的关系。结果武汉地区人群Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉（红）霉素、阿莫西林、利福平的耐药率分别为67．1％、43．4％、3．9％、11．8％、17．1％和10．5％；甲硝唑耐药基因序列分析表明rdxA基因有插入或点突变；Western Blot显示耐药株和敏感株的rdxA基因的表达有差异。结论幽门螺杆菌对6种抗生素有较高的耐药率，rdxA基因突变导致基因表达水平改变，导致Hp对甲硝唑耐药。     

恶性疟原虫环子孢子蛋白在无细胞表达系统的表达及纯化研究

目的:应用麦胚无细胞表达系统(Wheat Germ Cell-Free System),表达及纯化恶性疟原虫环子孢子蛋白(Circumsporozo-ite protein,CSP),以便用于免疫学评价。方法:根据从PlasmoDB检索获得的恶性疟原虫CSP基因序列,设计一对特异引物,以从ATCC获得的恶性疟原虫3D7基因组质粒(P.f.3D7 genomic DNA)为模板,经PCR反应扩增目的片段。PCR产物经NcoI与Sma I双酶切后,与经过同样酶切的pIVEX 1.3WG载体连接,随后转化大肠杆菌DH5а,经筛选获得pIVEX WG1.3-CSP重组质粒。将该重组质粒加入到麦胚表达试剂盒并按照说明书进行表达,表达产物经亲和层析柱纯化,最终获得CSP蛋白。结果:PCR反应成功扩增CSP基因序列,并成功构建pIVEX WG1.3-CSP重组质粒;经WB试验证明,麦胚无细胞表达系统可成功表达并纯化CSP蛋白。结论:麦胚无细胞表达系统可高效表达恶性疟原虫CSP,为CSP用于后续的诊断试剂和疫苗评价方面的研究打下了坚实的基础。     

克隆的丙型J肝炎病毒NS2基因中发现数个N端终止突变序列

探讨丙型肝炎病毒(HCV)准种在NS2区的基因结构特征.利用逆转录-巢式PCR从一份HCV慢性携带者的阳性血清及一份急性丙肝患者的血清中获得HCV NS2全长cDNA,将其克隆于T载体,各随机挑取5个阳性克隆进行序列测定.结果显示在克隆到的HCV NS2全长基因中,慢性携带者该区序列有一个于HCV多聚蛋白第835位氨基酸的位置出现终止信号,丙肝患者该区序列有三个于第835位氨基酸的位置出现终止信号,一个小于第887位氨基酸的位置出现终止信号.在克隆到的HCV NS2基因中存在多个N端终止突变序列,提示NS2 N端跨膜区可能与包膜蛋白区有着密切的联系.     

The Effect of Sheng Bai Solution on Irradiated Mice Bone Marrow Cell Division Index and DNA Content

Before and after general irradiation with ~(60)Co-γ, mice were orally given Sheng Bai Solution (SBS) for one week. SBS alleviated the irradiation-induced reduction of bone marrow cell chromosome division index. The irradiationinduced decrease of marrow DNA amount, thymic and splenic fractions, and total leukocyte number were restored to some extent. SBS also helped to ameliorate general condition of patients.     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药性及多重相关基因DNA和氨基酸序列分析

目的 了解幽门螺杆菌(Hrlicobacter pylori，Hp)对甲硝唑的耐药状况，研究相关的多重基因突变，为深入揭示Hp耐药的分子机制提供相关资料。方法 分离培养54株Hp，以琼脂稀释法检测Hp的甲硝唑最低抑菌浓度(deterimination of minimal inhibitory concentration，MIC)，用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因(rdxA、frxA、fdxB)，经分子克隆后DNA测序，分析敏感株和耐药株耐药基因的序列及其与耐药性的关系。结果 武汉地区人群Hp对甲硝唑的耐药率为67％；甲硝唑耐药基因序列分析表明，耐药临床株的rdxA和(或)frxA基因存在插入、缺失和点突变。结论 Hp对甲硝唑耐药不仅与rdxA有关，同时存在frxA、fdxB基因突变。frxA、fdxB基因的突变可能与rdxA在Hp耐甲硝唑中有协同作用。