妊娠期低分子质量肝素干预对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 探讨妊娠期应用低分子质量肝素(LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病理改变和病毒DNA载量的影响.方法 取健康纯系清洁级Balb/c小鼠48只.随机选择配对,每对雌雄小鼠各1只.实验组20对,正常对照组4对.实验组每4对为1组,共5组,每只分别腹腔内注射6.0 log半数组织培养感染剂量(TCID50)HCMV-AD169.正常对照组4对,每只腹腔内注射相应细胞维持液高糖改良Eagles培养液(DMEM)1.0 mL.所有小鼠于接种后配对,隔离喂养,并观察受精情况,记录受精时间.发现妊娠后,分别予实验Ⅰ组皮下注射LMWH 1 000 U·kg-1,实验Ⅱ组皮下注射 LMWH 500 U·kg-1,实验Ⅲ组皮下注射LMWH 250 U·kg-1,实验Ⅳ组肌肉注射更昔洛韦(GCV)60 mg·kg-1,各10 d;实验Ⅴ组为阳性对照组,孕鼠不注射LMWH和GCV.每组随机取10只新生鼠,出生1 d处死,取出肝脏,进行病理学检查和荧光定量PCR检测.结果 实验Ⅰ组肝组织病理损害较阳性对照组明显减轻,HCMV DNA载量[(1.60±1.12)×103拷贝数/50 mg]较阳性对照组[(5.91±2.91)×107拷贝数/50 mg]显著降低(P＜0.01),与实验Ⅳ组[(1.75±1.05)×103拷贝数/50 mg]比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验Ⅱ组肝组织炎性反应较阳性对照组稍减轻.实验Ⅲ组肝组织炎性反应与阳性对照组比较无明显变化,实验Ⅲ组HCMV DNA载量为(5.49±2.76)×107拷贝数/50 mg,与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论在妊娠期给予LMWH 1 000 U·kg-1干预能显著降低HCMV AD169株先天性感染Balb/c新生鼠肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎性反应.     

低分子肝素对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 研究低分子肝素( LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)病毒学和病理学的影响.方法 取健康纯系清洁级BALB/c鼠60只,10周龄,雌雄各半,均分为5组,每组6对.LMWH干预组和阳性对照组腹腔接种6.0 lg半数组织培养感染剂量(TCID50)的HCMV AD169,空白对照组腹腔注射高糖改良Eagles培养液0.5 mL/只,然后交配.LMWH干预Ⅰ组的雌鼠在孕期给予皮下注射LMWH 1000 U/kg×10 d;LMWH干预Ⅱ组的雌鼠在孕期给予皮下注射LMWH 1000 U/kg×5d,待生产后再给新生鼠皮下注射LMWH 1000 U/kg×5 d;LMWH干预Ⅲ组在生产后予新生鼠皮下注射LMWH 1000 U/kg×10d.产后10 d处死新生鼠,取肝脏,进行病毒分离、干湿质量测定、病理学检查和荧光定量PCR检测.多组间比较采用方差分析.结果 阳性对照组新生鼠肝组织悬液中10d可分离到HCMV,而LMWH干预的3组新生鼠需24 d分离到HCMV.阳性对照组新生鼠肝组织有浊肿、空泡变性,核内有嗜碱性包涵体,部分肝细胞坏死,而LMWH干预组肝组织仅有轻度肝细胞浊肿变性,炎性反应轻微,类似空白对照组.LMWH干预组肝组织含水量较阳性对照组明显降低.LMWH干预的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组50 mg肝组织HCMV DNA载量对数值分别为(3.26±0.43)、(3.26±0.41)和(3.32±0.51) lg拷贝,较阳性对照组的(7.38±0.53) 1g拷贝显著降低(F=314.620,P＜0.01),但LMWH干预组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LMWH在宫内和出生后干预能显著减少肝细胞HCMV复制,减轻肝组织炎性反应.     

低分子质量肝素联合更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的作用

目的 研究低分子质量肝素(LMWH)联合更昔洛韦(GCV)体外抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定LMWH联合GCV对人胚肺成纤维细胞(HELF)的最大无毒质量浓度(TC0).应用体外细胞培养技术建立HCMV-AD169感染HELF模型.固定联合药物中LMWH的TC0(625.00 mg·L-1),设LWMH 625.00 mg·L-1、GCV 35.00 mg·L-1、GCV 17.50 mg·L-1、GCV 8.75 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 35.00 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 17.50 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 8.75 mg·L-1 7个不同用药组,分别干预HCMV感染细胞模型,使用MTT法检测各组细胞存活率,观察感染细胞特征性细胞病变(CPE),同时应用荧光定量PCR法检测用药后各组HCMV的载量.结果 联合药物的TC0中GCV的质量浓度为375.00 mg·L-1,LMWH的质量浓度为625.00 mg·L-1.当HCMV AD169浓度为100倍半数组织培养感染量(TCID50)感染HELF时,LMWH和GCV均可提高受染细胞存活率,降低受染细胞的HCMV DNA的拷贝数;当固定LMWH的TC0,与3种不同质量浓度GCV配伍时,均在HELF上有明显的抗HCMV的生物活性,并显示配伍后的抑制作用明显大于对应质量浓度单用GCV的抑制作用(P<0.01);当联合用药中GCV剂量减半时与全量应用GCV时的抗HCMV效果相同[即GCV 35.00 mg·L-1组与联合用药LMWH 625.00 mg·L-1+GCV 17.50 mg·L-1组的病毒抑制率和DNA拷贝数比较差异无统计学意义(P>0 05)];且联合用药对细胞的毒性试验结果及显微镜下观察细胞形态变化显示,随着联合用药中二者药物质量浓度的下降,细胞存活率升高,对细胞的毒性作用减弱.结论 LMWH联合GCV具有良好的体外抗HCMV作用,二者具有协同抗病毒作用.     

更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究

目的:探讨更昔洛韦体外抑制人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的作用方式.方法:根据病毒复制周期设计3种作用模式来观察更昔洛韦对HCMV的抑制作用:模式Ⅰ将病毒与细胞混合后,再加入药物;模式Ⅱ将药物与细胞混合后,再加入病毒;模式Ⅲ将药物与病毒混合后再加入细胞.通过观察细胞病变效应,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以确定该药物治疗指数.结果:更昔洛韦对人胚成纤维细胞半数中毒浓度(TC50)为1 685.23 mg/L.在模式Ⅰ中,更昔洛韦对HCMV半数抑制浓度(IC50)为35.255 mg/L,治疗指数为47.8;在模式Ⅱ和Ⅲ中,更昔洛韦对HCMV无明显抑制作用.结论:更昔洛韦对HCMV感染细胞后显示出显著的抑制作用,且随药物浓度的增加其作用逐渐增强,存在明显的量效关系.同时,体外实验显示,更昔洛韦对人胚成纤维细胞感染HCMV无预防作用.     

更昔洛韦治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的系统评价

目的: 评价更昔洛韦(ganciclovir ,GCV)治疗婴儿巨细胞病毒肝炎的疗效.方法: 制定原始文献的纳入标准、排除标准及检索策略,检索Medline、CNKI期刊全文数据库、万方数字化期刊及重庆维普信息数据库,同时辅以手工检索会议资料和学位论文.收集GCV治疗婴儿巨细胞病毒性肝炎的随机对照临床研究,对符合入选标准的研究用 RevMan 5.0 软件进行Meta分析.结果: 共纳入14项研究,包括624例患者.Meta分析结果表明,与对照组相比,GCV治疗组能够降低血清总胆红素(TBIL)、丙氨酸转氨酶(ALT),缩短TBIL、ALT复常时间;巨细胞病毒抗体(CMV-IgM)及巨细胞病毒脱氧核糖核酸(CMV-DNA)转阴率优于对照组;GCV治疗组较对照组的不良反应发生率增高,主要表现为白细胞和血小板下降、胃肠道反应、皮疹和肝功能异常,一般未造成严重后果.结论: 对婴儿巨细胞病毒肝炎,GCV在改善肝功能,感染指标转阴方面优于对照组,安全性可能较高.     

人胚肺成纤维细胞感染人巨细胞病毒不同时间病毒载量的分析

目的:检测人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HELF)后不同时间点HCMV DNA载量,以明确HCMV感染HELF的时效性.方法:将HCMV接种HELF细胞,收集感染后3,5,8,10,15,20,30,60,120 min时间点细胞,提取病毒DNA,以即刻早期1基因(IE-1)为靶基因进行荧光定量PCR检...     

先天性感染人巨细胞病毒小鼠肝脏损伤模型的建立

目的:建立人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)先天性感染肝脏损伤的小鼠模型,为研究 HCMV感染性疾病及抗HCMV药物的筛选提供实验基础.方法:取健康纯系清洁级10 周龄Balb/c鼠 24只,雌雄各半,随机分为3组,每组4对.A、B两组为感染组,将6.0 logTCID50 HCMV-...