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目的为探索利用分子生物学技术培育新型药用植物的新途径,将外源的白藜芦醇合酶(RS)基因导入到丹参中表达,以改善或增加丹参的效用。方法根据已公布的核苷酸序列,利用引物悬挂延伸法,经过3次扩增,最终从葡萄基因组DNA中获得完整的RScDNA基因序列;以质粒pBin438为基础,构建含有RS目的基因的组成型植物表达载体。在根癌农杆菌介导下,利用叶盘法转化丹参,进而通过PCR、PCR-Southern杂交对不同的转基因植株进行筛选与检测。结果总共得到了45棵卡那霉素抗性植株,经PCR和PCR-Southern杂交检测,确定葡萄RS基因已整合到部分转基因丹参苗的基因组中。结论成功建立了白藜芦醇合酶基因转化丹参的体系,并获得了转基因植株。 相似文献
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用亲和层析提取的肾综合征出血热病毒(HFRSV)结构蛋白(50kD和67kD)为抗原,在体外免疫正常人外周血淋巴细胞(PBL)。PBL经亮氨酸甲基酯处理后,在含有sPWM-T、IL-2及不同浓度抗原的培养基中培养6d,计数存活PBL数量。结果表明,在上述体外免疫条件下存活PBL的数量与抗原剂量呈正相关。将此体外免疫的PBL与人-鼠杂交瘤细胞(K6H6/B5)融合,获得了3株分泌抗HFRSV人单抗的杂交瘤细胞,表明在体外免疫条件下,正常人PBL能够对HFRSV结构蛋白发生特异性免疫应答。 相似文献
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病历摘要男患,60岁,农民。因右肢活动受限8小时后说话不清,右肢不能活动,门诊以脑血栓收入院。既住无高血压病史。查血压140/90mmHg,心肺肝脾无异常所见。神经系统检查见眼底有轻度动脉反光增强,伸舌向右偏,右侧鼻唇沟变浅,痛觉减退,肌力Ⅰ级,张力增高,腱反射亢进,霍夫曼、巴斯征均( ),腰穿脑脊液无色透明,脑压220mmH20,次日意识不清。头颅 CT 见左侧壳核有肾形高密度影,为脑出血改变,出血量27.8ml,同侧内囊及侧脑室前角受压,未破入脑室。用降颅压药、抗生素、细胞活化剂、补充电解质治疗49天,肌力恢复出院。 相似文献
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目的为探索利用分子生物学技术培育新型药用植物的新途径,将外源的白藜芦醇合酶(RS)基因导入到丹参中表达,以改善或增加丹参的效用。方法根据已公布的核苷酸序列,利用引物悬挂延伸法,经过3次扩增,最终从葡萄基因组DNA中获得完整的RScDNA基因序列;以质粒pBin438为基础,构建含有RS目的基因的组成型植物表达载体。在根癌农杆菌介导下,利用叶盘法转化丹参,进而通过PCR、PCR-Southern杂交对不同的转基因植株进行筛选与检测。结果总共得到了45棵卡那霉素抗性植株,经PCR和PCR-Southern杂交检测,确定葡萄RS基因已整合到部分转基因丹参苗的基因组中。结论成功建立了白藜芦醇合酶基因转化丹参的体系,并获得了转基因植株。 相似文献
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目的利用毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白并测定其抗菌活性。方法T4溶菌酶(T4lysozyme)基因以N端融合的方式被准确插入到质粒pPIC9K的EcoR I-Not I位点内,得到分泌型重组表达载体 pPIC9K-T4L。该载体首先经限制性内切酶Sal I酶切,进而采用电击方法将线性化的重组质粒DNA导入到毕赤酵母中。经过梯度筛选得到多个单拷贝和多拷贝转化重组子。随机挑取部分重组子PCR扩增阳性克隆,经菌体培养和甲醇诱导后获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清液中。结果表达蛋白经琼脂孔扩散抗菌实验显示抑菌圈明显;重组蛋白对金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌均具有显著抑制作用;多拷贝与单拷贝重组表达子没有抗菌活性差异与蛋白表达量的差异;加热煮沸对于T4溶菌酶蛋白的抗菌活性无明显影响。结论T4溶菌酶在毕赤酵母中得以成功诱导与表达;表达产物不受拷贝数影响并具热稳定性。 相似文献