含乙型肝炎表面抗原基因重组腺相关病毒的构建及其基因的表达和功能初步研究

目的构建含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的重组腺相关病毒(rAAV)并观察目的基因的表达和功能。方法采用PCR法从PTHBV-1质粒中扩增HBsAg基因(ayw 亚型);将PCR扩增产物插入腺相关病毒(AAV)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-HBsAg;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到转入重组质粒并能表达目的基因的细胞系BHK-HBsAg;用具有rAAV包装功能的HSV-1- HSV1-rc/△UL2感染BHK-HBsAg,纯化后得到rAAV-HBsAg;ELISA检测重组病毒表面抗原基因在BHK-21细胞和293细胞中的表达;用rAAV-HBsAg免疫BalB/C小鼠,RIA法检测血清中表面抗体的滴度。结果ELISA法检测到混合细胞系BHK-HBsAg中HBsAg的表达量为(28.6±6.7)ng/5×106细胞;rAAV-HBsAg感染BHK-21细胞和293细胞后均能检测到HBsAg的表达,表达量随感染复数的增加而升高;rAAV-HBsAg免疫的BalB/C小鼠能产生表面抗体(抗-HBs抗体)。结论rAAV-HBsAg在体外能表达,免疫动物能诱导体液免疫反应的产生。rAAV-HBsAg有希望成为乙型肝炎候选疫苗,也可以进一步用于探索慢性乙型肝炎的免疫治疗。     

人纤维母细胞干扰素信使核糖核酸在非洲鲫鱼(Tilapiamosaiabica Peters)卵母细胞内转译的研究

本文报道了从超诱导的人纤维母细胞中经酚—氯仿辛醇—Oligo(dT)纤维素系统提取干扰素mRNA,并在非洲鲫鱼卵母细胞中转译出具有抗病毒活性的人干扰素。其主要实验根据是:超诱导细胞mRNA含量明显高于正常细胞;干扰素mRNA在非洲鲫鱼卵母细胞内转译的产物具有明显的抗病毒活性;转译时~14C-苯丙氨酸的掺入明显高于正常细胞;种属特异性实验及酶的敏感性实验证明转译产物中存在的抗病毒物质是一种人的干扰素蛋白质。由于非洲鲫鱼卵母细胞来源容易,操作方便,这一转译系统对于研究干扰素基因调控有一定意义。     

肿瘤坏死因子与γ干扰素的协同作用

肿瘤坏死因子与γ干扰素都是具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节活性的细胞因子.对两者协同作用的研究,不仅对其作用机理的认识具有重要的理论意义,而且可增强临床治疗效果,减少副作用,因此具有很重要的实用价值.本文综述了肿瘤坏死因子与γ-干扰素在抗肿瘤、抗病毒及免疫调节诸方面的协同作用及其可能机理.     

梯络龙对大鼠实验性矽肺疗效的研究

<正> 矽肺是长期吸入游离二氧化硅粉尘所引起的,以肺脏弥漫性纤维化为主的一种全身性慢性疾患,为了寻找治疗矽肺的有效药物,我们在广筛药物中发现梯络龙对大鼠实验性矽肺具有明显的疗效。梯络龙系由Mayer氏于1970年首次发现的一种低分子口服干扰素诱生剂,具有抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节等多种生物活性。国外尚未报导该药有治疗矽肺的作用。本文旨在阐明梯络龙对实验性矽肺的疗效,并探讨其疗效与诱生干扰素能力之间有无平行关系。材料与方法(一)、药品:梯络龙(Tilorone Hydrochloride)由徐州制药厂合成提供。聚I:C(Polyinosinic:Polycytidilicacid)系P—L生化试验公司出品(批号547122)。(二)、病毒株:新城鸡瘟病毒(NDV)B_1株,由美国SLoam-kettering癌症研究所Krim惠赠。在10日龄鸡胚尿囊常规培养,其血凝滴度为1280单位/ml,鸡胚感染     

一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表…

以野生型２型人腺伴随病毒（ＡＡＶ－２）基因组载体ｐＳＳＶ９－ｉｎｔ＾－为基础，构建了一种携带和表达真核基因的基础ＡＡＶ载体ｐＳＳＶ９／ＭｕｌＶ－ｎｅｏｓｖ，表达了ｎｅｏ基因，并采用该载体组建了携带人白细胞介素－２ｃＤＮＡ的重组ＡＡＶ载体ｐＳＳＶ９／ＭｕｌＶ－ｎｅｏｓｖ－ＩＬ２，转染Ａ５４９细胞后表达了人白细胞介素－２基因。为应用腺伴随病毒作基国治疗研究提供了实验基础。     

长沙地区住院儿童人冠状病毒NL63的感染状况及临床特征

目的 了解HCOV-NL63在长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童中的流行状况以及临床特征.方法 采集长沙地区2008年9月至2010年10月因急性下呼吸道感染住院儿童NPA样本1185份,用RT-PCR方法检测HCOV-NL63N基因,阳性扩增产物经测序确认,统计分析临床资料.结果 1185份NPA样本中,HCOV-NL63检出阳性10份,检出率为0.8％,其中春季检出1例、夏季检出6例、秋季检出2例、冬季检出1例;阳性检出病例患儿年龄最大2岁半,最小2个月,平均月龄12.5个月;男童7例,女童3例;临床诊断为支气管肺炎6例、毛细支气管炎3例、急性喉气管支气管炎1例;10例中有4例病情危重;4例有基础疾病;7例合并其他病毒混合感染;阳性扩增产物经测序分析与HCOV-NL63参考株同源性为97％～100％.结论 本资料HCOV-NL63阳性检出患儿年龄均在3岁以下;夏季检出率高;男童感染为主;单一基因型在长沙地区流行;HCOV-NL63可能也是我国儿童急性下呼吸道感染中的一种病原.     

GM－CSF与IFN－r联合刺激人PBMC产生TNF－α

ＧＭ－ＣＳＰ本身并不能诱导人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＴＮＰ－α对ＬＰＳ的刺激作用也不具有协同性，但与ＩＦＮ－ｒ联合刺激ＰＢＭＣ可以产生ＴＮＦ－α，最大效应出现于刺激后１８～２４ｈ，且呈明显的时间和剂量依赖关系，消炎痛和多粘菌素Ｂ对此效应无影响，排除了ＰＧＥ２和ＬＢＳ存在影响的可能性。     

β－半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒（AAV－2）载体的构建及其在哺乳类细胞中的表达

以野生型２型人类腺伴随病毒（ＡＡＶ－２）全基因组载体（ｐＳＳＶ９和ｐＳＳＶ９－ｉｎｔ－）为基础，构建了重组ＡＡＶ载体ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋）和ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（－），制备ＡＡＶ重组病毒，感染宿主细胞后表达了β－半乳糖苷酶基因。此外，用脂质体转染法将载体导入２９３细胞和Ａ５４９细胞，进行了ＬａｃＺ基因瞬时表达研究。结果显示，重组ＡＡＶ载体（ＰＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋））ＬａｃＺ基因表达的动态变化特点是，转染后表达较早（１２～２４ｈ）出现，并迅速达到高峰值（经２４ｈ），随后较快下降（经４８～７２ｈ）并维持在较低水平。将启动子附近ｉｔｒ结构有差别的上述两载体转染宿主细胞７２ｈ后做表达水平比较，结果ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（－）在２９３细胞和Ａ５４９细胞中，ＬａｃＺ表达水平均高于ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋）（１．２倍～１．４倍），提示启动子附近ＡＡＶｉｔｒ结构的变异对表达有一定的影响。     

表达β-半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究

表达β－半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究张桐１王文亮１王伯云１颜子颖２杨新科２候云德２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室）关键词β－半乳糖苷酶腺伴随病毒载体...