用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱

κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的啤酒酵母细胞，经冻融处理后用于合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱（CDP－胆碱）。结果表明：250mL摇瓶中加入50mL反应液（葡萄糖400mol/L，CMP10mmol/L，磷酸碍碱50mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液100mmol/L，MgSO410mmol/L,pH=8.0），固定化细胞1200g/L,34℃、150r/min下，反应4h后补加400mmol/L葡萄糖，反应8h可使60％以上的CMP转化为CDP－胆碱。反应液经灭菌和添加辅酶I（NAD^ ）后，固定化细胞可连续使用4次，CDP－胆碱转化率维持在40％以上。     

D-核糖发酵过程中的pH控制及对产D-核糖关键酶的影响

在枯草芽孢杆菌突变株D-756发酵生产D-核糖过程中，采用葡萄糖和葡萄糖酸钙混合发酵，葡萄糖酸作为pH调节剂，能促进菌体的生长，显著地提高D-核糖的产量。经酶活测定，发现流加葡萄糖酸能提高单位发酵液中葡萄糖酸激酶的酶活。在5L发酵罐中，利用葡萄糖酸维持发酵pH值在7．2，培养72h后产核糖76．8g／L。     

核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究

以鸟苷和5－氟尿嘧啶为底物,乙酰短杆菌菌体为酶源酶法合成5－氟尿苷,采用酵线浸膏培养基（酵母浸膏4．0％,葡萄糖0．4％,NaCl0.3%,pH7.0),较高的溶氧量,同时添加0．6％的豆油,培养12h,产酶量可提高30％。     

利用κ—卡拉胶—魔芋多糖复配交固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷（ＡＲ）生产三磷酸腺苷（ＡＴＰ）。采用ＨＰＬＣ法分析固定化细胞反应过程核苷（酸）的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化。固定化细胞反应１ｈ,ＡＴＰ转化率接受１００％。底物溶液灭菌和添加ＮＡＤ＾＋后,该固定化酵母细胞可反复使用１２次,ＡＴＰ的转化率稳定维持在９５％以上。     

胞苷生产菌的选育及发酵

目的选育胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌,提高胞苷发酵单位,并对间歇补料分批发酵方式进行了初步研究。方法（1）以胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌CDS36为突发菌株,对其进行紫外诱变,经6-杂氮尿嘧啶（6AU）、5-氟胞苷（5FCR）等进行定向抗性筛选;（2）采用间歇补料分批发酵,葡萄糖初始浓度10．0％,48h后补加10．0％,72h补加5．0％的补料方式培养,并测定发酵单位。结果（1）通过紫外诱变和抗性筛选得到了6-杂氮尿嘧啶、5-氟胞苷抗性的突变株CDS36—800—17,抗6-杂氮尿嘧啶和5-氟胞苷的临界浓度分别为1000mg／L和800mg／L;（2）通过间歇补料分批发酵方式发现培养96h,胞苷发酵单位可达4．86g／L,培养120h可达5．58g/l,比未经补料分批发酵时提高了20．0％。结论（1）筛选获得胞苷发酵单位较高的突变株CDS36—800—17,并具有较好的遗传稳定性,可稳定发酵;（2）间歇补料分批发酵方式可提高胞苷产量。     

酶法合成核苷类抗病毒药物

综述了近几年酶法合成核苷类抗病毒药物的研究进展,主要包括苷磷酸化酶、Ｎ－脱氧核糖转移酶的应用,以及应用一麦进行糖或碱基的修饰等方面。     

利用κ-卡拉胶-魔芋多糖复配胶固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ-卡拉胶-魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷(AR)生产三磷酸腺苷(ATP).采用HPLC法分析固定化细胞反应过程核苷(酸)的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化.固定化细胞反应1 h,ATP转化率接近100%.底物溶液灭菌和添加NAD+后,该固定化酵母细胞可反复使用12次,ATP的转化率稳定维持在95%以上.     

大肠杆菌核苷磷酸化酶的重组表达和活性

将大肠杆菌K-12菌株来源的嘌呤核苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和胸苷磷酸化酶基因分别克隆到pET-11a载体并转化大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌表达,通过SDS-PAGE分析和酶的活性测定,重组菌诱导表达后目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的37%以上,与产核苷磷酸化酶的野生菌比较,酶的活性也有显著提高。在特异反应条件下,构建的工程菌可以用来高效催化核苷的转糖基反应。     

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取5′－磷酸二酯酶，酶活可达474U／mL。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸，得到5′－CMP、UMP、GMP、AMP4种单核苷酸。最佳反应条件为：底物RNA浓度为0.01g/mL，每毫升底物的酶用量为30U，酶解温度70℃，pH7.0，时间2h,5′－核苷酸转化率达80％。     

酶法合成5-杂氮-2’-脱氧胞苷

将瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）中的N-脱氧核糖转移酶II的基因(ntd)克隆到大肠杆菌BL21(DE3)中,构建原核表达系统,成功地得到一株大量表达N-脱氧核糖转移酶II的菌株PND。以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂,该重组菌可大量表达N-脱氧核糖转移酶II。在此酶作用下,以5-杂氮胞嘧啶和脱氧胸苷为底物,生成胸腺嘧啶和目标产物5-杂氮-2’-脱氧胞苷。最佳反应条件为：底物浓度均为2 mmol/L, 20 mmol/LTris-HCl缓冲液(pH为7.1),