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氨甲酰胆碱对多巴胺诱导的小脑颗粒细胞凋亡的保护机制 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】研究多巴胺诱导小脑颗粒神经元凋亡的分子机制,以及胆碱受体激动剂氨甲酰胆碱对多巴胺诱导凋亡的作用。【方法】在培养的小脑颗粒神经元建立多巴胺凋亡模型。用相差显微镜观察形态学,DNA凝胶电泳和Hoechst33258核染色分析神经元凋亡,细胞的存活率用二乙酸荧光素(FDA)染色法检测。采用Westernblot分析细胞外信号调控的蛋白激酶(ERK)激活情况。【结果】多巴胺可诱导小脑颗粒神经元凋亡,并可持续激活ERK,二者均可被氨甲酰胆碱和PD98059抑制。氨甲酰胆碱对神经元的保护作用及对ERK激活的抑制作用可被阿托品阻断。【结论】多巴胺在小脑颗粒神经元诱导凋亡可能是通过持续激活ERK介导的。氨甲酰胆碱通过激活M胆碱受体,继而抑制了ERK的激活,从而起到对神经元的保护作用。 相似文献
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目的 克隆并分析神经元凋亡差异表达5号EST全长cDNA。方法 以大鼠大脑Marathon Ready cDNA为模板,采用SMART RACE技术克隆神经元凋亡差异表达5号EST全长cDNA,产物亚克隆刘pGEM-T easy质粒载体后进行序列测定以及同源性分析。结果 经过3次5’RACE扩增,得到的5号EST cDNA长度为5663bp,其中包含1个2136bp的完整的开放读码框序列,与已知大鼠基因芳香烃受体核转位因子2(Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator2,Arnt2)完全同源:该cDNA 3’瑞非编码区长达3323bp,包含3个AATAAA加尾信号和1个由12个腺嘌呤核苷酸组成的polyA序列。结论 5号EST目标基因为大鼠基因Arnt2,该基因3’端完整的非编码区cDNA序列为首次报道。神经元凋亡差异表达基因Arnt2的克隆鉴定为深入研究小脑颗粒神经元低钾性凋亡机制奠定了基础。 相似文献
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目的观察普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的保护作用。方法建立大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡模型,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记,Hoechst 33258核染色,琼脂糖凝胶电泳以及醋酸荧光素染色等方法,根据细胞凋亡的形态学及生物化学等特征,分析普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的影响。结果大鼠小脑颗粒神经元与普卡霉素预孵育1 h及持续作用下,普卡霉素浓度依赖性地抑制低钾诱导24 h所致的大鼠小脑颗粒神经元凋亡,其有效浓度在50~200 nmol.L-1之间,普卡霉素浓度为200nmol.L-1时达到的最大凋亡抑制率约为80%。结论普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡具有较强的抑制作用。 相似文献
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咖啡因对谷氨酸诱导神经元凋亡的保护作用 总被引:6,自引:2,他引:4
目的 研究咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡是否具有保护作用,并对其机制进行探讨。方法 采用DNA凝胶电泳分析及Hoechst33258核染色方法进行凋亡分析;使用荧光指示试剂Fura 2检测单细胞内游离钙浓度变化。结果 谷氨酸可诱导小脑颗粒神经元凋亡,咖啡因能拮抗谷氨酸的这一效应,其IC50为5-0mmol·L-1。咖啡因的这一保护作用不能被forskolin模拟,也不能被Rp cAMP阻断。此外,内质网Ryanodine受体阻断剂dantrolene也不能取消咖啡因的保护作用,咖啡因不影响谷氨酸诱导的钙超载。结论 咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡具有保护作用,这一保护作用与咖啡因升高细胞内cAMP和Ca2+水平的药理作用无关。 相似文献
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目的:克隆75AEST全长cDNA序列。方法:抽提在25mmol/LKCl条件下培养7d的大鼠小脑颗粒神经元的总RNA后,用DNA连接酶介导的5'RACE法克隆75A表达序列标签(EST)cDNA5'端未知序列,其产物亚克隆到pGEM-Teasy后进行序列测定以及同源性分性。结果:首轮5'RACE扩增出2.5kb序列后,75AEST鉴定为神经来源孤儿受体1(Nor1)基因的部分序列;再经过二次轮5'RACE,我们首次克隆Nor-1的全长cDNA序列。结论:T4DNA连接酶介导的5'RACE是一种效率较高的克隆mRNA5'端未知序列的好方法,为进一步研究Nor1在小脑颗粒神经元存活或分化过程中的作用奠定基础。 相似文献
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目的 :研究特异性p3 8分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)抑制剂SB2 0 3 580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用及机制。方法 :体外神经元培养、凝胶电泳和SAPK/JNK分析盒测定JNK(c Jun氨基末端激酶 )活性。结果 :低钾 (KCl 5mmol/L)培养基诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。但是 ,特异性的p3 8MAPK抑制剂SB2 0 3 580通过抑制凋亡 ,而促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活。此保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的神经元 ,其c Jun的表达和磷酸化水平升高 ,且激活了JNK的活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB2 0 3 580 2 5μmol/L的低钾培养基中 ,c Jun的表达、磷酸化水平和JNK的活性都明显的降低。结论 :SB2 0 3 580可能通过抑制JNK的活性 ,降低c Jun的磷酸化水平而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。 相似文献
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