不同处理方法的牛心包生物力学特性测试分析

目的　探索一种理想的牛心包处理方法。方法　观察戊二醛及 2 ,3 -丁二醇改性戊二醛处理后的牛心包热挛缩温度、生物力学特性及超微结构变化。结果　鞣制后心包厚度和僵硬度增加 ,柔韧性降低。丁二醇组的弹性模量 (8.75± 1 .71 )较戊二醛组 (6.5 9± 1 .3 7) (P <0 .0 5 )更近似于正常瓣膜组织 ;且其极限拉伸强度优于戊二醛组。超微结构显示丁二醇组胶原纤维与弹性纤维结构完整 ;戊二醛组胶原纤维和弹性纤维均明显变性 ,结构模糊。结论　 2 ,3 -丁二醇改性处理后的牛心包具有更好的生物力学特性 ,该方法是一种较为理想的牛心包处理方法     

CS无支架心包二尖瓣应用研究

目的比较传统有支架心包瓣与CS无支架心包二尖瓣的性能。方法测试瓣膜分为两组:A组,有支架心包瓣(与Ionescu-Shiley瓣相似);B组,无支架心包二尖瓣(与Quattro相似,由中南大学研制,简称CS瓣)。检测内容包括:①钙化倾向(SD鼠皮下埋藏模型);②组织学;③热皱缩温度;④断裂强度;⑤生物相容性;⑥血流动力学;⑦疲劳试验;⑧有限元分析。结果①B组钙化明显低于A组(P<0.01)。②组织学示A组心包片有大块钙化及胶元纤维裂解;B组仅见稍许钙化灶,胶原纤维保存完好。③热皱缩温度A组与B组无统计学意义。④断裂强度B组明显强于A组(P<0.005)。⑤内皮细胞种植后第1天,A组细胞明显少于B组(P<0.001);第3天A组已无细胞生长,B组内皮细胞增殖活跃;多数细胞Ⅷ因子检测呈阳性。⑥在模拟心输出量为2、4、6L,A组跨瓣压差明显高于B组(P<0.05),返流量和回流百分比A组显著高于B组(P<0.01),有效瓣口面积两组无统计学意义,仅在流量为4L时A组优于B组。⑦B组寿命比A组(n=2)长2.5倍。⑧B组瓣叶应力分布较为合理。结论CS无支架心包二尖瓣避免了应力集中区,其抗钙化、胶原纤维保存、断裂强度、生物相容性、血流动力学、疲劳寿命等均明显优于传统有支架心包瓣。     

不同方法处理牛心包的体外力学和抗钙化性能评价

比较传统GA法（A组）、三氯化铝与乙醇联合处理法（B组）、多聚环氧化物处理法（C组）和光氧化法（D组）四种不同方法处理牛心包后力学与抗钙化性能。对新鲜牛心包随机分为四组,用四种方法处理后,测定组织的极限抗拉强度、断裂伸长率、热皱缩温度,比较其力学性能;建立大鼠皮下植入模型,包埋2月后取出标本测定组织钙含量,并做HE染色及von Kossa染色。极限抗拉强度：B组〉A组=C组〉D组;断裂伸长率：C组=D组〉B组〉A组;热皱缩温度：A组=B组〉C组〉D组;钙含量测定：A组〉〉C组〉B组〉D组（P〈0.05）;HE染色和von Kossa染色结果符合以上测定值。三氯化铝与乙醇联合处理组的组织交联程度与力学强度最佳,光氧化处理组与多聚环氧化物（简称PC）处理组的组织柔韧性更好。在抗钙化性能方面,光氧化处理组最好,三氯化铝与乙醇联合处理组与多聚环氧化物处理组次之,GA处理组最差。     

去细胞处理对牛颈静脉带瓣管道细胞外基质骨架的影响

目的:探讨去细胞处理对牛颈静脉带瓣管道细胞外基质骨架成分及组织稳定性的影响,为确立构建组织工程化的人工血管技术提供依据.方法:采集新鲜牛颈静脉,筛选瓣膜功能良好的血管,采用曲那通X-100、胰蛋白酶/EDTA和DNase-I/RNase-A三步法去细胞处理,组织化学染色和透射电镜观察细胞外基质骨架成分(胶原和弹力蛋白)的变化.对新鲜和去细胞处理的牛颈静脉血管壁(n=10)分别进行弹力蛋白(Fastin弹性蛋白法)和羟脯氨酸(碱水解、分光光度法)含量测定;并测定处理前后的热皱缩温度和抗张强度以比较组织稳定性.结果:去细胞处理牛颈静脉血管壁光镜和透射电镜检测提示细胞及其成分完全去除,组织间隙增宽,但胶原成分较好保留,弹力蛋白部分减少及断裂.与新鲜组织比较,去细胞组羟脯氨酸含量相对增加[(25.73±2.97)mg/g vs.(29.25±2.99)mg/g,P＜0.05],弹力蛋白含量相对减少[(159.71±21.06)ng/g vs.(134.91±35.40)mg/g,P＜0.05],热皱缩温度降低[(72.50±0.53)℃ vs.(69.75±0.54)℃,P＜0.05],抗张强度也下降明显[(5.19±0.65)MPa vs.(3.13±0.94)MPa,P＜0.05].结论:去细胞处理对牛颈静脉细胞外基质骨架有一定损害,牛颈静脉的组织稳定性有所下降,得到的细胞外基质基本成分需经进一步交联处理才可以作为组织工程支架材料.     

去细胞光氧化牛颈静脉血管片内膜光化学接枝CD34抗体的制备及初步评价*☆

目的：用光交联剂SANPAH将不同浓度鼠抗人CD34抗体接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉表面，明确接枝鼠抗人CD34抗体的最佳反应摩尔比和最佳浓度。 方法：实验于2006-06/08在中南大学湘雅二医院生物材料实验室完成。按4个不同摩尔比(1∶0，1∶10，1∶20，1∶50)，SANPAH和4个不同浓度[0.665 μmol/L(100 mg/L)，1.33 μmol/L (200 mg/L)，6.65 μmol/L (1 g/L)，13.3 μmol/L (2 g/L)]鼠抗人CD34抗体进行反应后，经紫外线照射光化学接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉上，各组进行快速冰冻切片，滴加FITC标记的羊抗鼠IgG，然后在荧光显微镜下观察不同摩尔比和浓度反应结合的荧光效果，从而初步推断出最佳的反应和结合的摩尔比和浓度。 结果：随着鼠抗人CD34抗体的浓度的升高，荧光整体上是越来越强，但是当浓度高于6.65 μmol/L时，荧光差别不是很明显；当二者的反应摩尔比为1∶20时，荧光最强。 结论：最佳的鼠抗人CD34抗体和SANPAH反映接枝的浓度是6.65 μmol/L，最佳的摩尔比是1∶20。     

孵育温度对丁二醇改性处理戊二醛鞣制的牛心包生物瓣膜防钙化性能及热皱缩温度的影响

目的：探讨2，3-丁二醇不同孵育温度改性处理戊二醛鞣制的牛心包对其防钙化性能及热皱缩温度的影响。方法：实验于2003—06／12在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成。收集1～3岁新鲜黄牛心包8个，将每个牛心包均分成5份，共分成5组，分别置入4℃，20℃，30℃，40℃的纯2，3-丁二醇溶液孵育改性60d，对照组置入4℃的3g／L戊二醛Hepe缓冲液中，每组8份试片。选择刚离乳SD雄性大鼠8只，SD大鼠背部作两个纵形切口，将经过处理的同一牛心包来源的5份心包试片植入切口，第1个纵形切口两侧各1片，第2个纵形切口两侧及下部各1片，相距≥2cm，植入牛心包试片60d后，取出各组试片，用原子吸收火焰法检测组织钙含量，并观察牛心包试片热皱缩温度。结果：8只SD大鼠所获全部标本进入结果分析。①组织钙含量检测结果：20℃，30℃和40℃丁二醇组组织钙含量相似，但明显低于对照组和4℃丁二醇组[(8．18&;#177;7．22)，(21．56&;#177;26．53)，(3．24&;#177;2．57)，(138．36&;#177;69．23)，(192．83&;#177;2．86)mg／g，(P=0．002～0．016)]。②热皱缩温度检测结果：20℃，30℃及40℃丁二醇组明显低于对照组及4℃丁二醇组[(83．31&;#177;0．46)℃，(82．96&;#177;0．33)℃，(82．44&;#177;0．42)℃，(83．75&;#177;0．46)℃．(83．67&;#177;0．41)℃，(P&;lt;0．05)]；40℃丁二醇组明显低于20℃丁二醇组(P&;lt;0．001)。结论：2，3-丁二醇的不同孵育温度改性处理戊二醛鞣制的牛心包，其中4℃组防钙效果最差，20℃，30℃，40℃组均具有明显的防钙化效果，三者之间无明显差异。热皱缩温度随着孵育温度的升高而降低。但改变幅度不是很大。均高于80℃，改性后的牛心包在生理温度下不会发生组织热皱缩。     

辛醇/乙醇混合液处理的牛颈静脉的遗传毒理学评价

【目的】对辛醇／乙醇混合液处理的牛颈静脉的遗传毒性进行评价。【方法】采用微核试验、染色体畸变试验及AMES试验进行遗传毒性评价。【结果】试验组股骨骨髓细胞微核率及染色体畸变率与阴性对照组之间X^2检验差异无显著性（P〉0．05）；与阳性对照环磷酰胺组差异有显著性（P〈0．05）；AMES试验中试验组菌落数均未超过阴性对照组菌落数的2倍．试验结果为阴性。【结论】辛醇／乙醇混合液处理的牛颈静脉无明显遗传毒性作用。     

光氧化反应增加去细胞牛颈静脉的组织稳定性

目的：观察去细胞及去细胞后光氧化反应对牛颈静脉的组织稳定性的影响。方法：实验于2005—06／09在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成。①将新鲜牛颈静脉纵形剪开成血管片，横行切取牛颈静脉血管片成6根血管条，随机分为6组，新鲜组，去细胞组，及根据不同的光氧化处理时间将去细胞结合光氧化处理组分为去细胞后光氧化反应12，24，36和48h组。②通过测定处理前后的组织厚度、热皱缩温度、抗张强度及组织蛋白提取分析来比较组织稳定性。 结果：①各组在处理前后的厚度：去细胞处理后血管片比处理前变薄[（0．36&;#177;0．85），（0．43&;#177;0．94）mm，P〈0．05]，而去细胞再光氧化处理后的血管片厚度无明显改变（P〉0．05）。②各组血管片组织稳定性评价：去细胞组热皱缩温度及抗张强度比新鲜组、去细胞后光氧化反应12h组、24h组、36h组、48h组明显降低[热皱缩温度：（69．75&;#177;0．54），（72．50&;#177;0．53），（73．80&;#177;0．59），（74．40&;#177;0．46），（75．10&;#177;0．21），（75．20&;#177;0．26）℃，P〈0．05；抗张强度：（3．13&;#177;0．94），（5．19&;#177;0．65），（4．54&;#177;0．88），（4．67&;#177;0．60），（5．55&;#177;0．43），（5．80&;#177;0．82）MPa,P〈0．05]；经光氧化处理后热皱缩温度上升且高于新鲜组（P〈0．05）；而最大应力与新鲜组比较无明显变化（P〉0．05）；去细胞后光氧化反应组的组织蛋白提取量明显少于新鲜组及去细胞组。且随光氧化反应时间延长，组织蛋白提取量逐步减少。结论：去细胞处理降低了牛颈静脉的组织稳定性，而经光氧化进一步处理后组织稳定性增强，且随光氧化时间延长组织稳定性增强。     

孵育温度对丁二醇改性处理戊二醛鞣制的牛心包生物瓣膜防钙化性能及热皱缩温度的影响

目的:探讨2,3-丁二醇不同孵育温度改性处理戊二醛鞣制的牛心包对其防钙化性能及热皱缩温度的影响。方法:实验于2003-06/12在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成。收集1～3岁新鲜黄牛心包8个,将每个牛心包均分成5份,共分成5组,分别置入4℃,20℃,30℃,40℃的纯2,3-丁二醇溶液孵育改性60d,对照组置入4℃的3g/L戊二醛Hepe缓冲液中,每组8份试片。选择刚离乳SD雄性大鼠8只,SD大鼠背部作两个纵形切口,将经过处理的同一牛心包来源的5份心包试片植入切口,第1个纵形切口两侧各1片,第2个纵形切口两侧及下部各1片,相距≥2cm,植入牛心包试片60d后,取出各组试片,用原子吸收火焰法检测组织钙含量,并观察牛心包试片热皱缩温度。结果:8只SD大鼠所获全部标本进入结果分析。①组织钙含量检测结果:20℃,30℃和40℃丁二醇组组织钙含量相似,但明显低于对照组和4℃丁二醇组犤(8.18±7.22),(21.56±26.53),(3.24±2.57),(138.36±69.23),(192.83±2.86)mg/g,(P=0.002～0.016)犦。②热皱缩温度检测结果:20℃,30℃及40℃丁二醇组明显低于对照组及4℃丁二醇组犤(83.31±0.46)℃,(82.96±0.33)℃,(82.44±0.42)℃,(83.75±0.46)℃,(83.67±0.41)℃,(P<0.05)犦;40℃丁二醇组明显低于20℃丁二醇组(P<0.001)。结论:2,3-丁二醇的不同孵育温度改性处理戊二醛鞣制的牛心包,其中4℃组防钙效果最差,20℃,30℃,40℃组均具有明显的防钙化效果,三者之间无明显差异。热皱缩温度随着孵育温度的升高而降低。但改变幅度不是很大。均高于80℃,改性后的牛心包在生理温度下不会发生组织热皱缩。     

血管重建在原发性纵隔肿瘤中的临床应用

目的总结血管重建在原发性纵隔肿瘤中的应用经验和疗效。方法经外科手术治疗并血管重建的原发性纵隔肿瘤76例,22例（28.9%）单纯侵及上腔静脉;16例（21.1%）侵及单纯左或右无名静脉;34例（44.7%）侵及上腔静脉和左或右无名静脉;有4例（5.3%）单纯侵及主动脉外膜。行完整切除70例,部分切除6例;行血管置换46例,血管成形30例。结果全组病人无一例围术期死亡。上腔静脉阻断时间为（10-30）min,平均（18.0±5.3）min。左或右无名静脉单侧阻断时间为（11-25）min,平均（16.5±4.2）min。全组病人均获随访,时间为12-26个月,术后生活质量满意。结论纵隔肿瘤侵及上腔静脉及其属支大血管的病人,如全身无系统功能严重受损应积极手术治疗,可选用血管置换或血管成形术。