专家眼中的《中国脊柱脊髓杂志》

王岩（解放军总医院骨科100853北京市） 一种期刊品牌的形成。蕴含着编者、作者、读者的艰辛努力，不懈奋斗和不断积淀。《中国脊柱脊髓杂志》已经具有了这样的品牌效应．这是一代又一代脊柱外科学家精心培育的结果，这是广大读者的关心、支持和杂志工作人员心血的结晶，这是《中国脊柱脊髓杂志》向更高水平迈进的重要基础和有利条件。     

AAV-hVEGF165及AAV-TGFβ1转染兔椎间盘纤维环细胞的实验研究

目的探讨应用hVEGF165与TGFβ1基因逆转椎间盘退变的可行性。方法用分子克隆技术，从pcDNA3（＋）-AAV-hVEGF165获得AAV-hVEGF165cDNA，并克隆至AAV包装质粒pSNAV上，构建成pSNAV-hVEGF165的AAV重组质粒。经酶切及测序鉴定后，用脂质体介导pSNAV-hVEG165转染HEK293细胞和血管内皮细胞。荧光免疫组化方法检测hVEGF165蛋白，并用MTT法测定hVEGF165对血管内皮细胞增殖的影响。由本元正阳公司对pSNAV-hVEGF165进行AAV-hVEGF165包装。AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1联合转染退变的椎间盘纤维环细胞，Western blot检测hVEGF165与TGFβ1的表达以及纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量的变化。结果经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-hVEGF165构建完成，荧光免疫组化显示hVEGF165蛋白表达，MTT法显示hVEGF165蛋白对血管内皮细胞增殖有促进作用。本元正阳公司包装出具有生物学功能的AAV-hVEGF165与AAV-hVEGF165构建成功。Western blot显示hVEGF165与TGFβ1在纤维环细胞中表达，AAV-hVEGF165与AAV-TGFβ1双基因联合转染的纤维环细胞Ⅰ型胶原表达量较hVEGF165与TGFβ1基因各自单独转染的细胞Ⅰ型胶原表达量明显增多。结论hVEGF165在体外能够协同TGFβ1促进退变纤维环细胞Ⅰ型胶原表达增加。     

腰椎间盘内Ⅸ型胶原基因表达的观察

腰椎间盘内Ⅸ型胶原约占椎间盘胶原总量的 1 %～ 3 % [1 ] ,其确切的作用和分布还不清楚。我们以原位杂交的方法探讨胎儿、正常不同年龄的成人以及病理椎间盘中Ⅸ型胶原基因表达的规律。1 .资料与方法 :标本的制备 :(1 )胎儿组 :保胎失败胎龄 7个月的胎儿 ,在 4ｈ内无菌操作下取出椎间盘。 (2 )正常成人组 :取自意外死亡的成人 (2 2岁 )。(3)病变组 :取自椎间盘突出症患者的腰4 5和腰5 骶1 手术标本。将以上标本制备成厚度为 1 0 μｍ的原位杂交冰冻切片置于 - 70℃的低温冰箱中备用。含有Ⅸ型胶原ｃＤＮＡ探针序列的重组质粒ｐＭＣｏｌ1 0…     

白细胞介素-6对椎间盘细胞中蛋白多糖代谢影响的实验研究

目的:研究白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对椎间盘纤维环和髓核细胞中蛋白多糖代谢的影响。方法:自然流产的胎儿4例,4h内无菌取出椎间盘,分别进行纤维环和髓核细胞的体外培养。在纤维环细胞的培养液中分别加入IL-60(对照组)、400、800ng/ml,培养24h后,用Alcian法检测培养液中硫酸软骨素的含量。在培养中的髓核细胞中加入IL-60(对照组)、100、400、800ng/ml,培养24h,然后测量培养液中硫酸软骨素的含量。结果:在纤维环细胞中加入IL-6组较不加IL-6对照组培养液中硫酸软骨素的含量增加,在髓核细胞组中加入IL-6组和对照组的差别无显著性。结论:IL-6可以刺激椎间盘纤维环细胞中蛋白多糖的合成,但对髓核细胞中蛋白多糖的合成没有明显的作用。     

腺病毒介导hTGT—β1基因体内转染兔腰间盘髓核细胞对蛋白多糖含量的影响

目的观察构建腺病毒载体介导外源性人转化生长因子(humantransforminggrowthfac-tor,hTGF-β1)基因(Ad/CMV-hTGF-β1)转染到兔椎间盘髓核细胞后,髓核组织中蛋白多糖含量的变化。方法(1)纯种成年新西兰大白兔35只,其中25只对腰椎间盘髓核组织注射Ad/CMV-hTGF-β1,每只注射2个椎间盘作为实验组,注射量为每个腰椎间盘20μl(6×106pfu);同时每只取2个未做注射的腰椎间盘作为自身空白对照组。其余10只兔每只注射2个腰椎间盘各20μl磷酸盐缓冲液(PBS)作为实验对照组。全组共120个椎间盘。(2)手术后1～12周的不同时间段分别取出各组椎间盘组织,采用间苯三酚分光光度法测定髓核组织中蛋白多糖的含量,所得数据经SPSS10.0统计学软件进行统计学处理。结果(1)术后1周,实验组与自身空白对照组蛋白多糖测定值经配对t检验,t=3.968,P<0.05。(2)术后2周,三组结果经方差分析显示,F=17.871,P<0.01;各组间再行两两q检验,实验组与自身空白对照组间q=7.686,P<0.01;实验组与实验对照组间q=6.894,P<0.01;实验对照组与自身空白对照组间q=0.792, P>0.05。实验组与自身空白对照组间配对t检验,t=5.276,P<0.01。(3)术后4周,实验组与自身空白对照组经配对t检验,t=8.352,P<0.01。(4)术后8周,实验组与自身空白对照组经配对t检验,t=7.086,     

退变腰椎间盘髓核细胞立体培养与单层培养的生物活性比较

目的：比较体外单层培养和旋转微载体立体培养人退变腰椎间盘髓核细胞的生物学活性指标,探讨更加有效的椎间盘髓核细胞体外培养方法.方法：对获取的腰椎间盘突出症患者的24个椎间盘按年龄分为A组（20～25 岁）、B组（26～30 岁）、C组（36～45 岁）及D组（＞45岁）,分别利用酶消化法进行单层细胞培养和旋转微载体立体培养系统进行立体培养,观察细胞生长形态,检测细胞生长曲线及速度、细胞生长活性、细胞分裂指数及胶原含量.结果：单层培养的髓核细胞贴壁后为多角形或梭形,伸出伪足;立体培养的细胞在微载体上呈梭形或不规则形,呈立体状生长.立体培养的细胞生长速度较快,1周内两种培养方法各时间点及各组间比较均具有统计学意义（P＜0.05）.立体培养的髓核细胞活性提高,随年龄增加细胞活性下降;指数生长期细胞分裂指数与单层培养相比有统计学意义（P＜0.05）;Ⅰ、Ⅱ型胶原含量与单层培养相比有统计学意义（P＜0.05）,A组分别与B组、C组及D组比较均有统计学意义（P＜0.05）.结论：旋转立体培养人退变椎间盘髓核细胞的活性保持良好,较单层培养能够大量、优质收集种子细胞,可用于椎间盘组织工程中种子细胞的研究.     

褪黑素在鸡脊柱侧凸模型中的影响

目的　通过鸡松果体蒂部切断的方法 ,研究褪黑素在松果体切除鸡脊柱侧凸动物模型中的作用。方法　 10只刚孵育出的WhiteLeghorn鸡作为对照组 ,未行任何处理 ,控制白天 12h光照 (强度 5 0 0Lux)、夜间 12h完全黑暗 (强度 0 - 5lux)条件下饲养 ;2 0只WhiteLeghorn鸡在鸡龄 3d时行松果体切除 ,控制光照条件同对照组 ;2 0只WhiteLeghorn鸡 3d时行松果体蒂部切断术 ,控制光照同对照组。 5周时留取所有鸡白天 (mid -day)和夜间 (mid -night)的血清 ,用RIA试剂盒测定血清中褪黑素含量。所有的鸡处死后 ,取骨骼标本 ,行脊柱前后位平片检查。结果　 5周时 ,对照组褪黑素含量呈现明显白天低 (5 7.2 5± 7.4 3)pg/ml,夜间高 (2 5 7.92± 2 6 .0 9)pg/ml的周期性变化。松果体切除组褪黑素含量 ,白天为 (6 0 .0 5± 5 .4 8)pg/ml,夜间为 (5 5 .0 9± 8.35 )pg/ml,其分泌维持低水平。松果体蒂部切断组褪黑素含量 ,白天为 (5 8.77± 8.4 4 )pg/ml,夜间为 (2 4 8.4 7± 2 7.2 1)pg/ml,仍呈白天低 ,夜间高的周期性变化。X线检查 :对照组 10只鸡无脊柱侧凸发生 ;松果体切除组 2 0只鸡中 9只鸡发生了脊柱侧凸 ,发生率为 4 5 % ;松果体蒂部切断组 2 0只鸡中有 11只发生了侧弯 ,发生率为 5 5 %。结论　松果体切除和松果体蒂部     

AAV-hTGF-β1基因体内转染退变椎间盘的实验研究

目的建立一种腰椎间盘退变动物模型,并观察腺相关病毒(AAV)介导人转化生长因子-1β(hTGF-1β)基因体内转染羊退变椎间盘后其退行性的变化。方法16只山羊随机分成A、B、C、D四组(每组4只)。A组仅暴露椎间盘、未损伤,B、C、D三组分别采用不同直径的穿刺针(16 G、18 G、16 G)损伤左前外侧纤维环。3周后,D组椎间盘显微注射AAV-hTGF-1β。分别于术前及术后3、6、12、24周对羊腰椎间盘行放射学和组织学观察。结果A组无明显改变,B、C组有缓慢的椎间盘退行性变化,D组转染后退变发展减缓。结论AAV-hTGF-1β基因体内转染后能阻逆早期椎间盘退变。     

Survivin、TGFβ3和TIMP1基因重组慢病毒多表达载体构建及其表达活性检测

目的应用Gateway技术构建生存素(Survivin)、人转化生长因子β3(TGFβ3)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)慢病毒多表达质粒,并检测其表达活性。方法应用Gateway技术,以自剪切多肽2A串联Survivin、TGFβ3、TIMP1的3段外源基因,并克隆到慢病毒多表达质粒上,通过RT-PCR和Western-blot技术分别检测质粒转染293T细胞后目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR和Western-blot检测结果显示,慢病毒多表达质粒成功表达了3种目的基因,且其mRNA和蛋白质表达水平较空载体对照组、PBS对照组明显升高,差异有显著性(F=17.87~69.11,q=6.94~15.47,P<0.05)。结论成功构建了慢病毒多表达质粒pLenti6.3-Survivin-P2A-TGFβ3-T2A-TIMP1,为下一步病毒的制备以及体内实验提供了基础。     

骨质疏松症大鼠骨诱导能力改变的研究

目的　探讨骨质疏松性骨折愈合困难的原因 ,为临床治疗骨质疏松性骨折寻找可行性途径和方法。　方法　雌性SD大鼠 4 0只作为供体大鼠 ,随机分为卵巢切除组和对照组 ,每组 2 0只 ,卵巢切除组切除双侧卵巢以复制骨质疏松模型 ,对照组行假手术。 4个月后处死大鼠 ,取肢体长骨按Urist方法分别制备骨基质明胶。雌性SD大鼠 17只 ,双侧股部切开 ,左、右侧肌袋内分别植入卵巢切除大鼠及对照大鼠骨基质明胶。大鼠饲养 14d处死 ,分别取出肌袋植入物组织行组织学检查及骨碱性磷酸酶 (ALP)活性、Ca含量测定。　结果　卵巢切除组的和对照组的植入物组织ALP活性单位分别为 (7 2 2± 2 5 9)IU/ g和 (12 0 1± 6 18)IU/g ,两者差异有显著性 (P <0 0 1)。卵巢切除组的和对照组的植入物组织Ca含量分别为 (5 10± 0 84 ) μg/ g和 (5 73± 0 79) μg/ g ,两者差异有显著性 (P <0 0 5 )。　结论　雌激素缺失所致骨质疏松骨的骨诱导能力较正常骨明显降低 ,骨质疏松性骨折愈合困难与骨骼中骨诱导生长因子的缺乏有关。对于骨质疏松性骨折的治疗要改进骨折固定方法 ,外源补充或促进内源性骨诱导生长因子的表达 ,对于促进骨折愈合具有重要作用。