腰椎间盘MRI局限性高信号区的影像学分析

目的分析腰椎间盘局限性高信号区（HIZ）的影像学特征,为临床诊断和相关研究提供参考。方法回顾分析138例伴有HIZ的腰椎MRI资料。对11例16个伴有HIZ的腰椎间盘行CT椎间盘造影（CTD）。立体定位HIZ并对照分析CTD与MR图像。结果腰椎间盘HIZ在MR矢状位图像呈点状（14.36%）,圆形（58.01%）,长椭圆形（17.13%）或逗点状（10.50%）,其中圆形最常见。轴位像为线样或梭形,与CTD显示的环状破裂一致。本组HIZ均位于腰椎纤维环外缘。73个椎间盘的HIZ与椎间盘内破裂征象同时出现,1个椎间盘HIZ位于突出物下方。51个腰椎间盘矢状位图像的2个或3个相邻层面同一位置出现HIZ。CTD Dallas Ⅲ级者疼痛诱发试验多为阴性（6/7）,IV级者多为阳性（8/9）。结论腰椎间盘HIZ代表椎间盘纤维环中与放射状破裂相连的环状裂隙,临床多见于椎间盘突出前的椎间盘内破裂。矢状位连续多层面HIZ提示裂隙较长,复制性疼痛发生几率高。     

Survivin、TGFβ3和TIMP1基因重组慢病毒多表达载体构建及其表达活性检测

目的应用Gateway技术构建生存素(Survivin)、人转化生长因子β3(TGFβ3)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)慢病毒多表达质粒,并检测其表达活性。方法应用Gateway技术,以自剪切多肽2A串联Survivin、TGFβ3、TIMP1的3段外源基因,并克隆到慢病毒多表达质粒上,通过RT-PCR和Western-blot技术分别检测质粒转染293T细胞后目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR和Western-blot检测结果显示,慢病毒多表达质粒成功表达了3种目的基因,且其mRNA和蛋白质表达水平较空载体对照组、PBS对照组明显升高,差异有显著性(F=17.87~69.11,q=6.94~15.47,P<0.05)。结论成功构建了慢病毒多表达质粒pLenti6.3-Survivin-P2A-TGFβ3-T2A-TIMP1,为下一步病毒的制备以及体内实验提供了基础。     

应用液态及凝胶态生物载体材料负载同种异体软骨细胞修复全厚关节软骨缺损

背景：应用固态载体作为细胞支架，修复关节软骨缺损，已有成功经验。尝试将液态载体或凝胶态载体材料复合细胞后注入动物体内，观察该方法的可行性。目的：探讨液态载体或凝胶态载体材料氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载同种异体软骨细胞修复全厚关节软骨的可行性。设计：对照实验。单位：威海市立医院骨科，山东省创伤骨科研究所。材料：实验于2001-11／2003—09在山东省创伤骨科研究所实验室进行。健康成年新西兰大白兔36只，体质量2．5～4．5kg,雌雄不限。编号后根据缺损处注入物质的成分随机数字法分成4组，即氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2软骨细胞组、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2组、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞组、空白对照组，每组9只。方法：36只大白兔分组后造关节软骨缺损模型，取同种新西兰大白兔关节软骨细胞，体外培养扩增后与20％氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2混合，移植到缺损处进行修复。各移植组缺损处分别注入氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载软骨细胞、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞组。空白对照组：缺损处不做任何处理。移植后4，8，12周对缺损的修复情况进行大体、光镜组织学评估和电镜观察。据Wakitani评分标准，采用盲法对修复质量作出评价。主要观察指标：①软骨缺损修复程度。②软骨细胞的性质形态，基质中胶原性质、数量及排列方式。结果：①移植的氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载软骨细胞中的软骨细胞能很好地生长，4周时，缺损区完全填充。8，12周再生组织与周围正常软骨组织外观相似，界限模糊。组织学检查：形成透明软骨，缺损处被修复。②电镜下：8，12周，修复组织中可见多数成熟的透明软骨细胞及其周围排列不规则的、纤细的、均匀的和无周期性的Ⅱ型胶原。空白对照组仅见纤维修复，再生组织缺乏弹性，表面粗糙，不规则。③修复质量评分：氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载软骨细胞组和各组相比在各个时期差异均存在显著性，氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2组和氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞组与对照组相比在各个时期差异均存在显著性[4周：（3．93&;#177;1．91），（4．56&;#177;1．07），（4．78&;#177;1．09），（8．44&;#177;1．13）分；8周：（2．80&;#177;1．45），（3．24&;#177;1．00），（3．33&;#177;1．00），（8．44&;#177;1．13）分；12周：（2．22&;#177;1．10），（3．01&;#177;0．69），（3．00&;#177;0．71），（9．00&;#177;0．87）分，P〈0．0011，但两组之间在各个时期无显著的差异（P〉0．05）。结论：氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载同种异体软骨细胞移植能以透明软骨的方式成功修复兔膝股骨髁软骨缺损，并优于单纯的氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物负载重组人骨形态蛋白2或单纯的氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞的移植。     

微载体旋转立体培养成人退变髓核细胞增殖及生长动力学研究

[目的]通过单层培养和微载体旋转立体培养成人退变髓核细胞对比,研究两种培养方式对其生长活性及增殖能力的影响.[方法]本实验通过Trypan blue法计数细胞并绘制生长曲线,应用3H- TdR放射免疫法检测退变髓核细胞增殖活性,流式细胞仪检测退变髓核细胞周期,比较两种培养方式对细胞增殖的影响.[结果]微载体旋转立体旋转培养较单层培养细胞从贴壁到对数生长期开始时间( 16～20 d)较长,但是严格意义的稳定生长期(3～5 d)很短;对数生长期长,一般14 ～ 17 d,期间细胞增殖活跃.两种培养方式的细胞处于稳定生长期时,细胞增殖能力没有明显区别,而处于对数生长期时,微载体培养的细胞的增殖能力明显高于单层培养组的细胞(P＜0.05).细胞周期测定显示两种细胞停滞在G0/G1期的占71％左右,培养方式对其影响不明显.而微载体培养的细胞的S期明显较单层培养的细胞为长(P＜0.05).[结论]成人退变髓核应用微载体培养后增殖能力及生长活性提高,可解决组织工程学椎间盘种子细胞难以收集的难题,为将来开展椎间盘组织工程学的研究奠定良好的基础.     

胸椎椎管狭窄症术后急性硬脊膜外血肿

目的探讨胸椎椎管狭窄症术后急性硬脊膜外血肿的成因、诊断、治疗及预防措施。方法回顾性分析2003年6月～2011年12月因胸椎椎管狭窄症给予后路全椎板减压手术的患者101例,其中术后经再次手术证实术区急性硬脊膜外血肿9例,对其临床表现与再次手术情况进行分析。结果 9例患者全部获得随访,随访时间为3～45个月,平均34个月。血肿清除前神经功能评分为0.89±0.78,血肿清除后的神经功能评分为2.33±1.22,与术前相比差异有统计学意义（t=4.91,P〈0.01）。硬膜外血肿压迫时间为（7.72±7.06）min,血肿清除后神经功能恢复率与血肿压迫时间呈负相关（r=-0.789 6,P〈0.01）。结论胸椎椎管狭窄症手术后急性硬膜外血肿应尽快手术减压,血肿清除越早,术后神经功能恢复越好。     

骨质疏松症大鼠骨诱导能力改变的研究

目的　探讨骨质疏松性骨折愈合困难的原因 ,为临床治疗骨质疏松性骨折寻找可行性途径和方法。　方法　雌性SD大鼠 4 0只作为供体大鼠 ,随机分为卵巢切除组和对照组 ,每组 2 0只 ,卵巢切除组切除双侧卵巢以复制骨质疏松模型 ,对照组行假手术。 4个月后处死大鼠 ,取肢体长骨按Urist方法分别制备骨基质明胶。雌性SD大鼠 17只 ,双侧股部切开 ,左、右侧肌袋内分别植入卵巢切除大鼠及对照大鼠骨基质明胶。大鼠饲养 14d处死 ,分别取出肌袋植入物组织行组织学检查及骨碱性磷酸酶 (ALP)活性、Ca含量测定。　结果　卵巢切除组的和对照组的植入物组织ALP活性单位分别为 (7 2 2± 2 5 9)IU/ g和 (12 0 1± 6 18)IU/g ,两者差异有显著性 (P <0 0 1)。卵巢切除组的和对照组的植入物组织Ca含量分别为 (5 10± 0 84 ) μg/ g和 (5 73± 0 79) μg/ g ,两者差异有显著性 (P <0 0 5 )。　结论　雌激素缺失所致骨质疏松骨的骨诱导能力较正常骨明显降低 ,骨质疏松性骨折愈合困难与骨骼中骨诱导生长因子的缺乏有关。对于骨质疏松性骨折的治疗要改进骨折固定方法 ,外源补充或促进内源性骨诱导生长因子的表达 ,对于促进骨折愈合具有重要作用。     

AAV-TGFβ1的构建及其与AV-TGFβ1对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较

目的探讨转化生长因子β1腺相关病毒表达系统(AAV-TGFβ1)的构建及其与转化生长因子β1腺病毒表达系统(AV-TGFβ1)对髓核细胞蛋白多糖合成影响的比较。方法采用PCR技术扩增转化生长因子β1(TGFβ1)基因,并于其两端分别连接EcoRI和SalI酶切位点。将TGFβ1基因亚克隆于腺相关病毒(AAV)载体中,并经酶切和测序分析进行鉴定。AAV-TGFβ1病毒被包装并转染H293细胞,通过免疫荧光检测AAV介导的目的基因表达。利用AAV-EGFP病毒检测AAV对髓核细胞的转染效率。AAV-TGFβ1和AV-TGFβ1分别转染髓核细胞后,通过Antonopulos法检测蛋白多糖的合成。结果测序分析证明TGFβ1序列与NCBI Gene Bank所报道的一致。经酶切鉴定证实AAV-TGFβ1重组质粒被成功构建。AAV可介导TGFβ1高效表达并高效转染髓核细胞。AV-TGFβ1可快速一过性地促进髓核细胞蛋白多糖合成,而AAV-TGFβ1可稳定促进蛋白多糖合成。结论AAV-TGFβ1病毒被成功构建并可稳定地促进髓核细胞蛋白多糖的合成。