血管紧张素Ⅱ对肝癌细胞系 HEPG2发生上皮间质转化的影响

目的：通过血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激肝癌细胞系HEPG2,探讨其是否可以促进HEPG2发生上皮间质转化（ EMT）。方法使用AngⅡ刺激HEPG2,进而采用蛋白印记法对HEPG2中Vimentin 和 E－cadherin 蛋白表达水平进行检测;探讨其发生EMT的合适时间;并使用AngⅡ的抑制剂Ang1－7和Ang1－7的抑制剂A779进行干预,明确AngⅡ诱导HEPG2发生EMT的作用。结果 AngⅡ刺激下,HEPG2中E－cadherin 转录水平下降,Vimentin转录水平升高;最适宜刺激时间是48 h。 AngⅡ诱导HEPG2发生EMT的作用可部分被抑制剂Ang1－7抑制。结论 AngⅡ刺激下,HEPG2可以发生EMT。     

硒与维生素E的协同影响对心肌损伤保护的研究

通过在低硒富锰饲料中联合补充硒及ＶＥ喂养大鼠，并以亚硝酸钠作为诱发因素建立大鼠心肌损伤模型，观察硒与ＶＥ的协同作用对心肌损伤的保护效果。结果表明，在低硒环境下，富锰能显著提高心肌坏死检出率及降低机体抗氧化能力。单纯补充硒及ＶＥ均可对抗富锰的影响，但硒与ＶＥ的联合补充效果更佳。     

成人睾丸组织在裸鼠体内的存活情况研究

目的以成人睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体,研究成人睾丸组织中生精细胞异种移植后的存活及变化情况。方法将成人正常睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后110d取出移植物,进行组织形态学观察。结果在一例移植前显示非正常生精上皮结构标本的移植物中,大多数生精小管中只含有Sertoli细胞,而另一例移植前显示出正常生精上皮结构的标本,在移植到裸鼠背部110d后,仍然观察到圆形和长形精子细胞存在。结论将成人睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内,110d后仍观察到有生精细胞的存活。     

Conversion of mononuclear cells from human umbilical cord blood into hepatocyte-like cells

Objective: To evaluate the differentiation of human umbilical cord blood cells into hepatocyte-like cells. Methods: Mononuclear cells (MNCs) derived from human umbilical cord blood were isolated using Ficoll. The experiment was derived into 3 categories:(1) MNCs co-cultured with 50 mg minced liver tissue separated by a trans-well membrane and then collected at 0 h,24 h,48 h and 72 h; (2) MNCs cultured along supplemented with 100 ml/L FBS. 100μ/ml penicillin, 100μg/ml streptomycin. 4. 7μg/ml linoleic acid, 1×ITS, 10-4 mol/L L-Ascorbic acid 2-P and a combination of FGF4 (100 ng/ml) and HGF (20 ng/mL). Cells were then collected at 0 d and 16 d to examine the expression profile of hepatocyte correlating markers;(3) 0. 2-0. 3 ml of MNCs with a cell density of 2×107/ml were transplanted into prepared recipient mice [n = 12, injected with 0. 4 ml/kg (20%) CCl4 and 150 ng/kg 5-fluorouracil (5-Fu) prior the transplant 24 h and 48 h, respectively] via injection through tail vein. Mice were sacrificed 4 weeks after transplantation. The hepatocyte correlating mRNAs and proteins were determined by RT-PCR, immunohistochemical analysis and immunoflurence technique. Results: (1) After 72 h. a number of glycogen positive stained cells were observed with MNCs co-cultured with damaged mouse liver tissues. The expression of hepatocyte markers, human albumin (ALB),α-fetal protein (AFP) and human GATA4 mRNA and proteins were detected by RT-PCR and immunohistochemistry as well. For the confirmation, the DNA sequencing of PCR products was performed. In control groups, MNCs co-cultured with normal mouse hepatocytes or MNCs cultured alone, all markers remained negative. (2) In growth factor supplemented culture system, MNCs developed into larger volume with richer cytoplasm and binucleation after 16 d. Positive expression of ALB, AFP, CK18 and CK19 mRNA were detected with RT-PCR, and ALB positive staining was observed by immunocytochemistry as well. In contrast. MNCs cultured without exogenous growth factors scarcely attached to the culture dish and ALB mRNA was not detected. (3) In transplantation experiment, both of ALB and AFP mRNA were detected by RT-PCR and HSA, PCNA and ALB positive staining were observed in the livers of recipient mice by immunocytochemistry. Conclusion: MNCs from human umbilical cord blood could convert into hepatocyte-like cells in 3 different ways, indicating their potential use in the clinic applications for the treatment of human liver diseases.     

小鼠睾丸组织移植物二次移植后的生长发育研究

目的 通过将第一次移植后的移植物进行再移植,探讨二次移植的睾丸组织生长发育情况,为今后采用睾丸组织裸鼠移植模型探讨性成熟期较长动物(包括人类)睾丸组织的体外成熟提供实验依据.方法 将1～2 d龄昆明小鼠睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后2周取出移植物,并将其立即移植到另一只去势裸鼠背部,并在二次移植4周后取出移植物,制作HE染色切片,在光镜下观察二次移植后睾丸组织的生长发育情况;同时采用检测鱼精蛋白-2 mRNA的方法对二次移植物的生长发育程度进行鉴定.结果 移植2周后的小鼠睾丸组织再次移植后,仍可观察到移植物中的血管组织再生以及生精小管的继续发育;二次植入的44块组织经4周生长发育后收集到22个二次移植物,回收率为50%;在仅含有精原细胞和精母细胞的移植物二次移植后收集到的移植物中,观察到了圆形精子细胞甚至长形精子细胞,并在所有的二次移植物中检测到鱼精蛋白-2 mRNA的表达.结论 新生小鼠睾丸组织移植物转移到另一只受体中后可继续存活并生长发育.     

糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Fas蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的观察Fas蛋白在糖尿病脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元损伤中的表达。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导和线栓法制备糖尿病大脑中动脉闭塞模型(MCAO),应用免疫组化方法和流式细胞术观察糖尿病脑缺血再灌注组与缺血再灌注组海马CA1区Fas表达变化和细胞凋亡情况。结果缺血再灌注组及糖尿病脑缺血再灌注组大鼠海马CA1区Fas阳性染色阳性细胞分别为(21·3±3·1)个/100μm、(51·9±4·2)个/100μm,较正常对照组〔(1·1±1·7)个/100μm〕及假手术组〔(10·3±2·4)个/100μm〕增多(P<0·05);而糖尿病脑缺血再灌注组比缺血再灌注组增加得更明显(P<0·05);糖尿病脑缺血再灌注组海马CA1区Fas蛋白表达上调,细胞凋亡百分数〔(29·34±8·45)%〕明显高于缺血再灌注组〔(17·59±6·38)%〕(P<0·05)。结论糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马细胞发生凋亡,Fas介导的细胞凋亡机制可能是糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。     

胎儿睾丸组织异种移植后生精细胞发育初探

目的 :以人胎儿睾丸组织为供体 ,免疫缺陷小鼠为受体 ,研究人类睾丸生精细胞异种移植后的继续发育情况。　方法 :将 2 6周胎儿的睾丸组织植入去势裸鼠背部 ,于移植后 1 35d取出移植物 ,进行组织形态学观察 ,分析原始生精细胞在异种异位的发育情况。　结果 :移植 1 35d后取出的移植物显示 ,其生长幅度已由移植前直径约 1mm和湿重约 5mg ,分别增加到移植后大于 3mm和 2 0mg。组织形态学观察发现 ,移植前的睾丸主要是由直径为(6 0± 1 5 ) μm的精曲小管索构成 ,其中包含的细胞主要是原始Sertoli细胞和少量原始生精细胞 ,细胞排列呈弥散无规则状态 ;而移植后 1 35d的精曲小管索已发育成具有管腔的精曲小管 ,出现由Sertoli细胞和生精细胞组成的完整生精上皮 ,直径增大到 (80± 2 5 ) μm。原本呈不规则分布的原始Sertoli细胞和生精细胞大部分已迁移到基膜处 ,其中有少数生精细胞发育成为精原细胞。　结论 :人胎儿睾丸组织移植到去势裸鼠背部后 ,可以继续存活并进一步生长发育。     

受体性别及完整性对睾丸组织移植物发育的影响

目的以免疫缺陷小鼠为受体,探讨受体的性别及完整性对未成熟睾丸组织移植物生长发育的影响。方法将作为受体的免疫缺陷小鼠分为4组:雄性正常组、雄性去势组、雌性正常组和雌性去势组。移植供体组织均为新生1～2d的昆明小鼠睾丸,移植部位为受体背部皮下。移植7周后取材,计算移植物的回收率并称重,对各组移植物中生精小管结构和生精细胞的组成情况以及生精细胞的染色体进行观察分析。结果移植7周后,从4组受体中获得的移植物体积和重量与移植前相比均有明显增加。染色体观察显示,所有4组移植物中生精细胞染色体数量均为正常2倍体(40条)和单倍体(20条);HE染色结果显示,所有4组受体取出的移植物中均发现带有长形精子的生精小管,其中雄性正常组、雄性去势组、雌性正常组和雌性去势组分别有1、5、1和3只受体中观察到含有长形精子的生精小管。结论新生昆明小鼠睾丸组织分别移植到去势的、未去势的雄性和雌性免疫缺陷小鼠背部7周后,未成熟的生精细胞均可发育成为长形精子。     

异体异位发育睾丸组织的蛋白质组图谱构建及差异蛋白分析*

[摘要] 目的 应用蛋白质组学实验方法对在异体异位生长发育的新生小鼠睾丸组织进行差异蛋白分析,从而对睾丸组织体外移植模型用于生精细胞发育研究的可行性提供进一步的理论依据。方法 以新生小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植,移植8周后收集移植物组织,采用双向凝胶电泳（2-DE）分离移植物组织总蛋白,同时分离8周正常小鼠睾丸组织总蛋白作对比分析,运用ImageMaster 2D Elite 5.0图象分析软件识别移植物组织与正常组织差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获取肽质量指纹图谱（PMF）,检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点。结果 正常睾丸组织和移植物组织双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为(1 326±15)个和(1 561±20)个,3次重复实验的蛋白质点位置重复性较好。通过比较两者的双向凝胶电泳图谱,得到表达差异量较大的蛋白质点21个。选取6个仅在正常睾丸组织中有表达的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定出的6种蛋白质,除血红蛋白α1链（Hba-a1）外,其他5种蛋白均为在小鼠睾丸中有较高表达的蛋白质,包括A激酶锚定蛋白结合的精子蛋白(ASP)、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、精子蛋白(Sp17)、天门冬酰胺酶样蛋白(ASRGL1)和过氧化物氧化还原因子4(Prdx4)。结论 在本实验中,从异体异位生长发育成熟的新生小鼠睾丸组织中检测到5种在睾丸中特异性高表达蛋白质的缺失,这些蛋白质主要在精子运动、精子顶体形成以及精子的受精等功能中发挥作用。