人MxA基因启动子-88/-123位多态性荧光PCR检测方法的建立及临床应用

目的 建立一套快速、灵敏和特异的人抗黏液蛋白A(MxA)基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性检测体系,为合理应用IFN-α治疗慢性乙型肝炎提供分子生物学检测手段.方法 对经IFN-α治疗的患者进行HBV DNA、HBV基因分型及MxA基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性位点检测,确定基因多态性与IFN-α治疗效果之间的关系.通过各种条件优化实验,建立MxA基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性荧光PCR检测体系,并通过与DNA序列分析法检测结果的对比,验证荧光PCR检测体系的灵敏性及特异性,从而对该体系的临床适用性进行初步评估.采用卡方检验计算P值、回归分析法计算对比率和95%可信区间.结果 MxA基因启动子干扰素刺激应答元件中-88位为G/T杂合型和-123位为C/A杂合型者皆为IFN-α敏感型,-88位为G/G纯合型和-123位为C/C纯合型者为IFN-α不敏感型.与DNA序列分析的金标准相比,荧光PCR检测的符合率为99.65%.结论 荧光PCR检测体系,可灵敏、快捷地检测患者MxA基因多态性位点.     

胃癌浸润性淋巴细胞的细胞表型及杀伤活性

目的和方法：本实验用９例胃癌患者ＴＩＬ和ＩＬ２在体外共同孵育后，用流式细胞仪分析胃癌ＴＩＬ的细胞表型特征。结果：ＴＩＬ细胞表型特征是以ＣＤ３为主，ＣＤ４／ＣＤ８为０８３，ＮＫ细胞１６３±３６％。经白细胞介素２（ＩＬ２）激活２０天后，ＣＤ３减少，ＣＤ４／ＣＤ８为１８５，ＮＫ细胞数量增至４１３±１３７％，Ｐ＜００１。ＬＤＨ释放法测定激活后的ＴＩＬ对自体胃癌细胞杀伤率比培养初期高３７４倍，变比对同时培养的７９０１胃癌细胞杀伤率高１７５倍。对自体和异体胃癌细胞杀伤作用均显著高于ＬＡＫ细胞，且具有靶细胞特异性。结论：结果表明胃癌ＴＩＬ对胃癌细胞杀伤作用，可能与ＮＫ细胞数量增多，导致胃癌细胞凋亡有关     

小鼠睾丸组织移植物二次移植后的生长发育研究

目的 通过将第一次移植后的移植物进行再移植,探讨二次移植的睾丸组织生长发育情况,为今后采用睾丸组织裸鼠移植模型探讨性成熟期较长动物(包括人类)睾丸组织的体外成熟提供实验依据.方法 将1～2 d龄昆明小鼠睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后2周取出移植物,并将其立即移植到另一只去势裸鼠背部,并在二次移植4周后取出移植物,制作HE染色切片,在光镜下观察二次移植后睾丸组织的生长发育情况;同时采用检测鱼精蛋白-2 mRNA的方法对二次移植物的生长发育程度进行鉴定.结果 移植2周后的小鼠睾丸组织再次移植后,仍可观察到移植物中的血管组织再生以及生精小管的继续发育;二次植入的44块组织经4周生长发育后收集到22个二次移植物,回收率为50%;在仅含有精原细胞和精母细胞的移植物二次移植后收集到的移植物中,观察到了圆形精子细胞甚至长形精子细胞,并在所有的二次移植物中检测到鱼精蛋白-2 mRNA的表达.结论 新生小鼠睾丸组织移植物转移到另一只受体中后可继续存活并生长发育.     

同型半胱氨酸作用于正常个体血小板凝聚反应的体外研究

目的　研究人体血清或血浆同型半胱氨酸 (HCY)的升高与血小板高凝状态的关系。方法　全血或浓缩血小板与不同浓度的 HCY于 37℃ (用于血小板凝聚检测 )或 2 2～ 2 5℃ [用于血小板纤维原结合及 P-选择素 (P- selectin)表达的检测 ]作用 15 min,后应用血小板凝聚仪和流式细胞仪分别检测 HCY对血小板活性的作用。结果　 HCY在浓度 30 μm ol/ L 时能增加一磷酸腺苷 (ADP)和胶原诱导的全血和浓缩血小板凝聚反应 [(3.0± 0 .8) Ω/ min vs(5 .0± 2 .0 ) Ω/ m in,P<0 .0 5 ,n=9和 (8.5± 1.5 ) Ω/ min vs(11± 2 .5 ) Ω/ min,P<0 .0 5 ,n=6 ],但在浓度 10 0 0μm ol/ L时却抑制 ADP和胶原诱导的全血和浓缩血小板凝聚反应 [(7.0± 4 .0 )Ω vs (3.6± 2 .6 )Ω和 (6 .8± 2 .2 )Ω vs (4.1± 3.3)Ω ,P<0 .0 5 ,n=9],血小板凝聚性的改变并不伴随血小板纤维原结合及 P- selectin表达的变化。结论　体外实验表明 HCY能协同促进已激活的血小板凝聚反应 ,可能是 HCY与体内血栓形成有关的机理之一     

脑内五羟色胺与干扰素镇痛

由侧脑室或在中脑导水管周围灰质内微量注射入白细胞α-干扰素可以引起大鼠痛阈明显上升,但脑内5-HT和5-HIAA均无变化。看来干扰素的镇痛作用和脑内5-HT递质无关,它可能是不经过5-HT的释放也不和吗啡受体结合起作用的另一类型的镇痛物质。     

乙型肝炎病毒表面抗原基因在昆虫细胞中表达产物的鉴定

目的 :在昆虫细胞中表达乙型肝炎病毒 ( HBV)的表面抗原。方法 :利用已构建的含有 HBV S基因的重组杆状病毒 Bac- S,在昆虫细胞中进行表达 ,并用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果 :重组杆状病毒感染昆虫细胞后 ,可表达相应大小的 S蛋白 ,且该蛋白可被 HBs Ag特异性单抗 ( m Ab)所识别。结论 :利用杆状病毒表达系统 ,成功地表达了具有生物学活性的 HBV S蛋白。     

缰核对导水管周围灰质痛相关神经元放电的影响

缰核是前脑边缘系统向脑干下行投射的枢纽。它的活动水平明显影响针刺镇痛效应。电刺激缰核降低针刺作用,损毁缰核后针刺镇痛作用升高。缰核对中缝大核具有持续性的抑制作用;对蓝斑核的放电活动具有持续性的兴奋作用。中缝大核、蓝斑核均与针刺镇痛有密切关系;中脑导水管周围灰质(PAG)是与电刺激镇痛、针刺镇痛有密切关系的部位,一般认为中枢神经系统内下行性抑制活动在其中起到相当重要的作用。本     

成人睾丸组织在裸鼠体内的存活情况研究

目的以成人睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体,研究成人睾丸组织中生精细胞异种移植后的存活及变化情况。方法将成人正常睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后110d取出移植物,进行组织形态学观察。结果在一例移植前显示非正常生精上皮结构标本的移植物中,大多数生精小管中只含有Sertoli细胞,而另一例移植前显示出正常生精上皮结构的标本,在移植到裸鼠背部110d后,仍然观察到圆形和长形精子细胞存在。结论将成人睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内,110d后仍观察到有生精细胞的存活。     

Conversion of mononuclear cells from human umbilical cord blood into hepatocyte-like cells

Objective: To evaluate the differentiation of human umbilical cord blood cells into hepatocyte-like cells. Methods: Mononuclear cells (MNCs) derived from human umbilical cord blood were isolated using Ficoll. The experiment was derived into 3 categories:(1) MNCs co-cultured with 50 mg minced liver tissue separated by a trans-well membrane and then collected at 0 h,24 h,48 h and 72 h; (2) MNCs cultured along supplemented with 100 ml/L FBS. 100μ/ml penicillin, 100μg/ml streptomycin. 4. 7μg/ml linoleic acid, 1×ITS, 10-4 mol/L L-Ascorbic acid 2-P and a combination of FGF4 (100 ng/ml) and HGF (20 ng/mL). Cells were then collected at 0 d and 16 d to examine the expression profile of hepatocyte correlating markers;(3) 0. 2-0. 3 ml of MNCs with a cell density of 2×107/ml were transplanted into prepared recipient mice [n = 12, injected with 0. 4 ml/kg (20%) CCl4 and 150 ng/kg 5-fluorouracil (5-Fu) prior the transplant 24 h and 48 h, respectively] via injection through tail vein. Mice were sacrificed 4 weeks after transplantation. The hepatocyte correlating mRNAs and proteins were determined by RT-PCR, immunohistochemical analysis and immunoflurence technique. Results: (1) After 72 h. a number of glycogen positive stained cells were observed with MNCs co-cultured with damaged mouse liver tissues. The expression of hepatocyte markers, human albumin (ALB),α-fetal protein (AFP) and human GATA4 mRNA and proteins were detected by RT-PCR and immunohistochemistry as well. For the confirmation, the DNA sequencing of PCR products was performed. In control groups, MNCs co-cultured with normal mouse hepatocytes or MNCs cultured alone, all markers remained negative. (2) In growth factor supplemented culture system, MNCs developed into larger volume with richer cytoplasm and binucleation after 16 d. Positive expression of ALB, AFP, CK18 and CK19 mRNA were detected with RT-PCR, and ALB positive staining was observed by immunocytochemistry as well. In contrast. MNCs cultured without exogenous growth factors scarcely attached to the culture dish and ALB mRNA was not detected. (3) In transplantation experiment, both of ALB and AFP mRNA were detected by RT-PCR and HSA, PCNA and ALB positive staining were observed in the livers of recipient mice by immunocytochemistry. Conclusion: MNCs from human umbilical cord blood could convert into hepatocyte-like cells in 3 different ways, indicating their potential use in the clinic applications for the treatment of human liver diseases.