复方魔芋葡甘聚糖对大鼠高脂血症的影响

目的:研究复方魔芋葡甘聚糖对大鼠高脂血症的影响.方法:建立高脂血症大鼠模型,将魔芋葡甘聚糖复配黄酮化合物,并喂饲大鼠,分别检测复方魔芋葡甘聚糖以及魔芋葡甘聚糖对大鼠血脂水平和肝脏组织形态的影响.结果:复方魔芋葡甘聚糖能显著降低大鼠血清总胆固醇的低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)和载脂蛋白B(ApoB)浓度,显著增加高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和载脂蛋白A1(ApoAl)浓度,显著改善TG代谢,调节脂质代谢紊乱,降低血糖水平.肝组织形态学观察显示,复方魔芋葡甘聚糖对实验大鼠肝脏组织有保护作用.结论:复方魔芋葡甘聚糖能改善对实验大鼠高脂血症脂质代谢紊乱的调节作用.     

遮荫对半夏光合特性的影响

目的：以盆栽半夏为材料，研究遮荫条件下半夏生长、叶绿素含量、净光合速率(Pn)以及叶绿素荧光参数的变化。方法：待半夏苗高15 cm左右时，进行遮荫70%，90%和全光照(CK)处理，30 d后以三叶半夏中间叶片为材料测定半夏生长、叶绿素含量、净光合速率(Pn)以及叶绿素荧光参数的变化。结果：与全光照相比，遮荫后半夏块茎鲜重、株高、叶长、叶宽、叶面积、比叶面积(SLA)和叶绿素含量增加，其中叶绿素a/b减小；与全光照相比，遮荫后叶片Pn、光补偿点(LCP)、光饱和点(LSP)下降，而表观量子效率(AQY)上升；光系统Ⅱ的实际量子产量(ΦPSⅡ)，初始荧光(Fo)和最大荧光(Fm)，PSⅡ最大量子产量(Fv/Fm)和光化学猝灭系数(qP)增加，但非光化学猝灭系数(NPQ)降低。结论：与对照相比，70%，90%遮荫条件下半夏株高、SLA，Chl，Pn，叶绿素荧光特征表现差异显著，其中，遮荫70%半夏块茎鲜重增加显著，为半夏生长发育提供较好的环境条件。     

红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK的克隆及原核表达

目的:探讨红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK在大肠杆菌中的最佳表达条件.方法:将eryK基因克隆到表达质粒pET-22b( ),使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并对装液量、接种量、诱导时间、IPTG浓度和FeCl3浓度等表达条件进行优化.结果与结论:SDS-PAGE电泳显示,在相对分子质量44×103处有EryK蛋白条带,其含量占菌体总蛋白的58%以上.证明高GC含量的红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因EryK可以在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达,为体外研究EryK酶学相关性质以及大规模发酵奠定了基础.     

红色糖多孢菌M合成3-脱氧-3-羰基-赤酮酸内酯B的限速因子研究

目的探讨红色糖多孢菌KR6基因突变体生物合成3-脱氧-3羰基-赤酮酸内酯B（DOEB）产量显著降低的原因。方法以KR6基因突变体M菌株为研究对象,采用相对实时荧光定量RT-PCR技术、抗原-抗体检测技术和高分辨LC-MS分析技术等,分别从基因的转录水平、翻译水平以及聚酮化合物水平等层面研究了DOEB的生物合成量。结果红色糖多孢菌M菌株与出发菌株A226相比,两者聚酮合酶（PKS）基因簇在转录水平和翻译水平上的表达差异均非造成DOEB产量降低的限速因子;而DOEB的前体转化能力却大幅度降低,因此,DOEB合酶的活力降低是造成生物合成DOEB产量降低的关键因素。结论 DOEB合酶的活力是生物合成DOEB的限速因子,本研究为进一步探讨利用基因工程途径提高新酮内酯类化合物产量奠定了基础。     

红色糖多孢菌A226-SP突变体构建及代谢产物分析

目的：构建红色糖多孢菌突变菌株,生物合成酮内酯类抗生素。方法：利用反向PCR技术,扩增红色糖多孢菌KR6酮还原酶基因突变DNA片段SP（KR6酶中Gly^1141Ala^1142替换成SerPro）,克隆于pWHM3上构建染色体同源重组质粒pWHM3-SP。通过PEG介导原生质体转化,将pWHM3-SP导入红色糖多孢菌中。经染色体二次重组后,筛选出1株红色糖多孢菌KR6酶突变菌株A226-SP。结果：DNA序列分析表明,A226-SP染色体上编码KR6酶中Gly^1141Ala^1142序列GGTGCG突变成SerPro编码序列AGCCCT。HPLC—HRMS分析证实A226-SP菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B（DOEB）,同时检测到其中间产物C18H34O6,但没有发现红霉素产物。结论：Gly^1141Ala^1142位于KR6酮还原酶的重要功能位点,红色糖多孢菌A226-SP突变体可以合成酮内酯类化合物。     

糖多孢红霉菌bldD基因提高活跃链霉菌诺西肽产量的研究

目的将糖多孢红霉菌bldD基因转入活跃链霉菌（Streptomyces actuosus）N-H,探讨其对诺西肽产量的影响。方法将bldD基因连接到链霉菌整合型表达载体pZMW上构建pZMW-bldD质粒,利用PEG介导的原生质体转化方法将重组质粒pZMW-bldD及对照质粒pZMW-vgb分别导入活跃链霉菌,通过对枯草芽孢杆菌抑菌试验和分光光度计法测定发酵液中诺西肽产量。结果成功构建了活跃链霉菌N-H/pZMW-bldD工程菌株及对照菌株N-H/pZMW-vgb。与出发菌株N-H相比,N-H/pZMW-bldD菌株诺西肽产量提高了68%;与对照菌株N-H/pZMW-vgb相比,N-H/pZMW-bldD菌株诺西肽产量提高了19%。结论在活跃链霉菌中导入糖多孢红霉菌bldD基因可以提高诺西肽产量,其作用效果较vgb基因更为明显,说明bldD基因对抗生素产量的提高具有广谱性。     

bldD基因过量表达对红色糖多孢菌红霉素产量及孢子形成的影响

目的通过增加红色糖多孢菌调控基因bldD拷贝,获得红霉素高产菌株,并探讨bldD基因过量表达对红色糖多孢菌形态分化的影响。方法以红色糖多孢菌A226为出发菌株,通过染色体同源重组方法获得红色糖多孢菌A226bldD基因失活突变菌株A226-△bldD。将bldD基因表达质粒pZMW-bldD分别导入突变株A226-△bldD及出发菌株A226中,获得A226-△bldD/bldD菌株和A226/bldD菌株,利用TLC法和HPLC法对其发酵产物进行分析,并观察孢子生长状况。结果红色糖多孢菌A226中bldD基因失活后产红霉素水平明显降低,不能形成孢子;bldD基因的回复表达使A226-△bldD突变菌株产红霉素能力得到恢复,且孢子形成恢复正常;在红色糖多孢菌A226中过量表达bldD基因可提高红霉素产量,较出发菌株A226提高20%,同时可使孢子形成时间提前。结论在红色糖多孢菌中过量表达bldD基因,可获得红霉素高产菌株,同时会影响红色糖多孢菌形态分化进程。     

红色糖多孢菌ΔSACE_0065,ΔSACE_2559和ΔSACE_2565突变体构建及对孢子分化的影响

目的构建红色糖多孢菌ΔSACE_0065、ΔSACE_2559和ΔSACE_2565三个突变体并研究其功能。方法将待失活目的基因的上下游同源片段依次连接到pUCTSR质粒Thio抗性基因（tsr）两侧,利用PEG介导的原生质体转化法将线性DNA同源片段转入红色糖多孢菌A226内,通过同源重组使目的基因失活,最后将构建出的三个突变株与出发菌株A226及ΔbldD突变株进行比较,观察孢子生长有无差异。结果与结论成功构建ΔSACE_0065、ΔSACE_2559和ΔSACE_2565三个突变株;与A226相比,ΔSACE_0065和ΔSACE_2559气生菌丝和孢子形成推迟,而ΔSACE_2565突变株的生长情况则无明显变化,提示红色糖多孢菌SACE_0065、SACE_2559基因参与其形态分化的调控。     

银杏黄酮魔芋精粉对大鼠抗氧化及减肥作用的影响

目的:为改善和提高魔芋食品保健功效,将微量银杏黄酮配伍加入魔芋精粉(复配物)中,研究魔芋及其复配物对大鼠肌体抗氧化、降血脂和减肥作用的影响。方法:将Wistar大鼠随机分成4组,设置对照,分别饲喂不同组分的饲料,检测、分析与比较魔芋及其复配物对血液和肝脏的抗氧化能力、血脂水平和体重的影响。结果:与魔芋精粉组相比,复配物组明显降低了大鼠血清和肝脏丙二醛含量和提高了超氧化物歧化酶的活性,增强了血液中谷胱甘肽过氧化物酶活性;使血液的高密度脂蛋白胆固醇浓度上升与总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇浓度下降,甘油三酯水平显著降低;而魔芋与其复配物比,减肥作用差异不显著。结论:复配物能显著提高魔芋食品的抗氧化能力,降低血脂水平,改善和调节脂质代谢,而对魔芋的减肥作用无明显影响。     

产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G^-突变体的构建

糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(ΔG),其中去除了EryG上S-腺苷甲硫氨酸结合区域对应的290bp DNA片段。将该片段克隆于质粒pWHM3,构建了同源重组质粒pWHMΔG。PEG介导原生质体转化法将pWHMΔG转入糖多孢红霉菌A226中,通过染色体同源重组突变染色体上eryG基因。利用薄层层析、PCR和质谱方法筛选出一株eryG基因突变的糖多孢红霉菌A226G-突变体,此突变体主要积累中间产物红霉素C而不再合成红霉素A。通过eryG基因的功能补偿,糖多孢红霉菌基因工程菌A226G-G 可以恢复红霉素A的合成能力。