SELEX实验中两种富集方法的比较

比较指数富集系统进化配体 (SELEX)实验中 ,液相筛选与固 液相筛选方法的差异对筛选富集库亲和力的影响。液相筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固 液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较 ,前一种方法更容易富集到与靶目标结合的目的序列。     

GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽

目的 体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法 首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b／p50和pET22b／p65，并在大肠杆菌E．coli BL-21中诱导表达，后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果 经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50、p65蛋白，GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论 证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用，这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。     

核因子-κB活化参与Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(英文)

目的：研究核因子-κB(NF-κB)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核/巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)中的作用。方法： 采用凝胶迁移率变动分析检测NF-κB的DNA结合活性变化，以免疫组化观测细胞内REL P65的核转位，用细胞ELISA法检测细胞内MCP-1及IκBα蛋白含量变化。结果： 不同浓度(10、25、50、100 mg/L)Ox-LDL刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞NF-κB的DNA结合活性增强，50 mg/L Ox-LDL活化MCs效果最明显(8.50±1.14，P＜0.01 vs control； P＜0.05 vs 10, 25和100 mg/L Ox-LDL)。Ox-LDL刺激MCs 30-240 min均可以活化NF-κB，60 min时相点活性最强(11.0±2.11，P＜0.01 vs control； P＜0.05 vs 30 min or 240 min)。以50 mg/L Ox-LDL刺激MCs 1 h后，细胞内IκBα蛋白水平最低(0.050±0.006，n=5,P＜0.01 vs control)，作用24 h MCP-1表达水平最高(0.331±0.016， n=5,P＜0.01 vs control)。NF-κB活化的同时伴有REL P65核转位。上述效应可被NF-κB特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)所抑制。结论： Ox-LDL刺激人肾小球系膜细胞产生MCP-1是由NF-κB调控，NF-κB参与了脂质肾损害的发病过程。     

直肠癌保肛术后患者对肠道症状的认知程度及自我护理的调查

目的调查直肠癌保肛术后患者对肠道症状的认知情况及自我护理现况。方法电话回访240例直肠癌保肛术3～38个月后患者,其中男148例、女92例,年龄均为30岁以上,了解患者肠道症状及其自我护理措施。结果多数患者工作生活中有明显的腹胀、腹泻、大便失禁、排便急迫、便秘和排便不尽感等肠道症状,采取相应的自我护理措施后效果不佳。结论护理人员应高度重视患者术后的肠道症状,指导患者选择合理切实的肠道症状自我护理措施,并积极监控患者所实施自我护理措施的有效性。     

应用负压封闭引流综合治疗慢性难愈性创面的临床体会

目的 探讨应用负压封闭引流(VSD)综合治疗慢性难愈性创面的临床疗效,为临床应用、推广提供治疗依据.方法 选择40例慢性难愈性创面患者,其中20例行VSD序贯治疗,包括全身综合治疗、创面清创、常规换药、VSD治疗和手术治疗来修复难愈性创面(观察组),20例采用除去VSD治疗的传统治疗(对照组),对两组创面换药次数、创面愈合情况、手术成功率进行比较.结果 40例患者中观察组创面换药次数明显少于对照组[(13.55±6.87)次比(29.25±24.13)次,t=2.319,P<0.05];10例非手术患者中观察组可促进创面愈合,治愈率明显高于对照组(100％比40％,P<0.05);30例手术患者中观察组手术修复成功率明显高于对照组(100％比60％,P<0.05).结论 VSD对于难愈性创面,尤其窦道性创面及肌腱甚至骨质外露创面均有显著效果,值得推广应用.     

氮气窒息急救护理2例

通过对某化工区发生的2例氮气窒息患者救治资料的回顾, 总结氮气引起窒息患者的院前急救体会, 以期提高对氮气窒息患者的抢救成功率。本次事故中工业氮气储罐属于密闭空间, 在检修时其氮气含量仍然较高, 导致氧含量较低(事故发生的密闭空间事后检测氧体积分数为10.5%)。员工违规操作, 进罐前没有检测氧含量及佩戴空气呼吸器, 导致2名员工因缺氧受到不同程度的损伤。院前处理过程中, 医护人员及时出警, 第一目击者正确施救, 对提高伤者痊愈有十分重要的意义。     

p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定

目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法借助于生物传感器技术分析NF-κBp65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L.竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强.结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κBDNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能.     

p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

目的：获得NF－κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因，并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法：利用引物二聚体搭桥技术，扩增p65亚基DNA结合域基因片段，并将基克隆入酵母双杂交载体pG-BKT7 DNA-BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109，在SD／Trp选择培养基上培养，观察转化株的生长情况。按尿素／SDS法抽提酵母蛋白，用SDS－PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株β－半乳糖苷酶的活性。结果：获得p65 DNA结合域基因片段，并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达，对酵母细胞无毒性作用，无自身激活活性。结论：NF－κB p65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因，用于肽库筛选，捕捉与之相互作用的多肽。     

核因子-κB的结构和功能研究进展

1986年,Sen和Baltimore首先从B淋巴细胞核抽提物中,检测到一种能与免疫球蛋白κ链基因增强子κB序列(5'- GGGATTTCC-3')特异结合,并能促进κ链基因表达的核蛋白因子,称之为核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB).此后,NF-κB在许多领域被受关注.近来发现,NF-κB能与调控免疫应答、炎症反应、细胞分化和生长、细胞粘附和细胞凋亡所必需的许多细胞因子、粘附因子等基因启动子或增强子部位的κB位点发生特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在机体的免疫应答、炎症反应和细胞的生长发育等方面发挥着重要的作用[1].     

107177名无偿献血者中检出弱D9例

本站自1997年开始检测无偿献血者RhD血型,至2005年3月,107177名无偿献血者中检出Rh阴性258名,占0.24%,其中弱D9名,占Rh阴性献血者的3.5%,报告如下。1材料与方法1.1试剂初筛试剂抗-D(Ig M)(Baso公司);确证试剂抗-D1(IgG,991018,20011102,20040408);抗-D2(IgG Ig M,991117,BMK0207C,BMD0302D);木瓜酶/抗球蛋白,抗-C、-c、-E、-e;筛选细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),谱细胞(Ⅰ~Ⅹ)(上海血液中心)。1.2血型血清学方法盐水法、木瓜酶法、抗球蛋白法均严格按文献[1]方法要求操作。盐水法初筛结果为阴性后,同时用木瓜酶法、抗球蛋白法进一步确认。结…