排序方式: 共有62条查询结果,搜索用时 671 毫秒
1.
红霉素基因工程研究的快速发展依赖于相关的分子生物学技术,本文概括介绍了红霉素基因工程研究中常用的五种途径和相关技术:染色体重组、链霉菌表达系统、大肠埃希氏菌表达系统、糖多孢红霉菌突变体表达系统和无细胞体系,并对各种途径进行了评述。 相似文献
2.
eryA基因直接控制着红霉素母环6-脱氧-红霉内酯B的合成,在红霉素生物合成过程中具有重要作用。本文克隆了eryA基因的启动子PeryA,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,构建了大肠埃希菌-糖多孢红霉菌穿梭型质粒。PEG介导原生质体转化法将穿梭型质粒分别转入糖多孢红霉菌A226与变铅青链霉菌JT46,荧光显微镜检测发现,此启动子在两菌株中都具有功能。随后,以变铅青链霉菌JT46为宿主,对PeryA启动子区域进行了深入研究,结果发现该启动子的-35区并不是必需的,仅有-10区、长度为41bp的该启动子在链霉菌中仍具有功能。定点突变证明-10区对于该启动子是必不可少的。因此,41bp的该启动子片段可作为链霉菌的有效启动子,这是迄今为止所发现的最短的启动子之一,可用于构建新的链霉菌表达载体。 相似文献
3.
磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(phosphopantetheinyl transferase,PPTase)可将辅酶A上的4’-磷酸泛酰巯基乙胺转移到载体蛋白(carrierprotein,CP)保守的丝氨酸残基侧链羟基上,使载体蛋白由无活性的脱辅基(apo-)形式转变为活性全蛋白(holo-)形式。活性载体蛋白负责酰基的转移,在脂肪酸、聚酮和非核糖体多肽等物质的合成过程中发挥重要作用。PPTase分为“AcpS”型、“Sfp”型和“结构域”型,其修饰载体蛋白的机制有三个模型假说。PPTase已在聚酮和非核糖体多肽基因工程研究中得到初步应用。 相似文献
4.
目的研究不同因素对溴化氰切割融合蛋白的影响。方法将含有pThioHisA-G13重组质粒的BL21工程菌,经IPTG诱导后,超声破碎,分离并溶解包涵体,再选择不同量的溴化氰、酸浓度及不同溶剂等条件进行溴化氰切割试验,Tricine-SDS-PAGE检测切割效果。结果溴化氰的量,酸浓度及不同溶剂对溴化氰切割包涵体的效果均有影响。结论高效率的切割需要在酸性条件下进行;以尿素作为促溶剂比70%的甲酸更有利于小肽的切割。 相似文献
5.
用Red系统敲除大肠杆菌O157:H7的ecs4553以及ecs4563基因 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157:H7的突变体.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5'端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除.结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157:H7突变菌株.结论:为进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础. 相似文献
6.
红色糖多孢菌A226-YA突变体构建及产物分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:用红色糖多孢菌(前称糖多孢红霉菌)KR6突变体合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,同时,KR6突变体不合成红霉素。方法:以红色糖多孢菌A226基因组DNA为模板,用重叠PCR技术扩增KR6酶域中Tyr2699密码子TAC突变为A1a密码子GCC的1000bpDNA序列,克隆到载体pWHM3上构建同源重组质粒pWHM3-YA。将pWHM3-YA转化到A226中,并整合到红霉素合成基因座,经染色体二次重组后筛选TAC突变为GCC的突变体A226-YA,再进行突变体A226-YA产物分析。结果:通过染色体同源重组,构建了红色糖多孢菌突变菌株A226-YA,Zabspec Fab质谱分析结果显示A226-YA突变体合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,而没有检测到红霉素。结论:突变Tyr2699能有效失活KR6,但3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的产量较低。 相似文献
7.
分泌型重组人生长激素工程菌的构建与表达条件的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建分泌型重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)工程茵,优化工程茵表达条件。方法:应用,17启动子与ompA,引导序列构建分泌型表达rhGH工程茵,采用多因素正交优选法初步筛选培养基成分,进而考察葡萄糖对rhGH表达量的影响。在此培养基基础上优化诱导表达条件,分别考察了诱导起始茵密度、诱导温度、诱导剂浓度和诱导表达时间对rhGH表达量的影响。结果与结论:构建了高效分泌型表达rhGH工程茵,在优化培养基中摇瓶培养至D600值约为9.2,37℃进行诱导,IPTG浓度0.5mmol/L,诱导后继续培养10—12h,rhGH分泌表达量可达到140—160mg/L培养液,目的蛋白占周质总蛋白的30%-40%。 相似文献
8.
目的研究p43蛋白抑制新生血管生成是否通过诱导细胞凋亡来实现。方法用不同浓度的p43蛋白(0,10,50,100μg/m1)作用于HUVEC细胞12h,检测细胞体外管腔形成能力的变化,同时检测细胞周期变化,并通过胞内总半肽天冬酶(caspase)活性检测、caspase3和caspase7基因水平的变化及DNA片段化检测等方法,研究p43蛋白对HUVEC细胞凋亡的影响。结果与结论p43蛋白可明显抑制HUVEC细胞体外管腔形成,并随着p43蛋白浓度的升高抑制作用不断增强;不同浓度的I)43蛋白对HUVEC细胞周期没有明显影响,不能诱导HUVEC细胞凋亡。p43蛋白抑制新生血管的生成不是通过诱导细胞凋亡来实现的。 相似文献
9.
目的 运用酵母双杂交技术从人肝cDNA文库中筛选出与埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV传染病中的生物学功能.方法 利用重组PCR技术构建诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,将诱饵菌株与人肝cDNA文库菌株进行杂交筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA测序和生物信息学分析,然后再利用酵母回复性实验进一步验证,排除假阳性结果.结果 成功构建了诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,筛选出6个可能与GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分别是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP.酵母回复性实验进一步说明了COMMD1和APOA2与NP蛋白可能存在相互作用.结论 酵母双杂交筛选出多个可能与EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕获蛋白,为研究EBOV的致病机制提供了参考. 相似文献
10.
目的验证所设计的Mps1小干扰RNA(siRNA)的特异性,为其应用于肿瘤治疗提供研究基础。方法针对Mps1基因的5’端设计合成一个siRNA(简称为siMps1),利用Western印迹检测siMps1的干扰效果,以及干扰后对肿瘤细胞的增殖和有丝分裂的影响。进一步构建稳定表达siMps1的细胞系SW480-YFPMps1siR/shRNA,检测过表达外源Mps1能否恢复其内源基因缺失的表型。结果转染siMps1能够降低细胞中的Mps1蛋白水平,导致有丝分裂指数降低,染色体中期排列异常;进而通过克隆形成实验发现,HeLaS3细胞转染siMps1后大量死亡,出现多核细胞;构建的稳定细胞系SW480-YFPMps1siR/shRNA能够恢复Mps1缺失后的表型。结论该设计得到的siMps1具有很高特异性,有望应用于肿瘤的治疗中。 相似文献