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1.
目的对少突胶质前体细胞(OPCs)的分离、培养及传代方法进行改良,并建立少突胶质谱系限制细胞的体外分化模型,以模拟体内OPCs的发育过程。方法通过非特异性差异黏附法与A2B5-IgM抗体免疫筛选法结合,从胚胎大鼠脊髓来源的细胞悬液中分离、纯化OPCs,用含成纤维细胞生长因子-2和血小板源性生长因子的培养液作扩增培养;再以三碘甲状腺氨酸和神经营养因子-3诱导OPCs分化,最终分化为成熟的少突胶质细胞(OLs)。OPCs及其分化细胞的特性通过形态学观察和免疫化学染色法鉴定。结果 95%以上的细胞具有双极或三极突起的典型OPCs形态,并表达A2B5;在一定的培养条件下,OPCs可持续扩增和反复传代,且扩增的OPCs仍能维持其特有的形态和自我增殖的特性;进入分化进程的细胞将依次表达O4、O1、受体反应蛋白及髓鞘碱性蛋白等特异性分化抗原。结论分离的OPCs在形态、增殖以及分化格局等方面均与存在于胚胎脑区的O2A前体细胞(体内OPCs)相类似。 相似文献
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目的分析上海地区汉族人HLA-DQA1启动子(QAP)多态性,以及QAP与DQA1的连锁关系.方法采用PCR-RFLP分析DQA1等位基因多态性;采用PCR-SSO检测QAP多态性.结果在96个个体中检测到9种DQA1启动子(QAP)等位基因.QAP与DQA1之间有3种连锁格局①QAP与DQA1存在一对一关系;②一种QAP可与不同的DQA1组成多种单元型;③一种DQA1等位基因可受到多种类型的QAP调控.与意大利、德国人群比较发现QAP和QAP-DQA1单倍型频率在不同人群中存在差异.结论上海汉族人中未发现新的QAP等位基因,但QAP等位基因的频率以及与DQA1的连锁格局和白种人相比有明显差异. 相似文献
3.
目的 探讨激活的凝血因子Ⅱ(Ⅱ因子)能否诱导外周血单核细胞分化为卵巢上皮性癌(EOC)腹膜微环境肿瘤相关巨噬细胞.方法 分离正常女性外周血单核细胞和巨噬细胞(MO/MA)以及EOC腹水内肿瘤相关巨噬细胞(TAM);凝血因子Ⅱ刺激后,检测MO/MA和TAM表面Ⅱ因子受体PAR1、3、4表达,分析MO/MA在Ⅱ因子或(Ⅱ因子+水蛭素)刺激后CD14、CD68和CD163表达比例,ELISA检测Ⅱ因子刺激后巨噬细胞表达的细胞因子,Real-time PCR检测细胞因子、趋化因子mRNA表达.结果 MO/MA及TAM细胞表面上均有Ⅱ因子受体PARI、3、4表达;Ⅱ因子刺激后,MO/MA高表达CD14[(50.23±4.34)%]及CD163[(3.82±1.93)%],与Ⅱ因子+水蛭素刺激组[CD14(32.37±6.24)%,CD163(0.56±0.28)%]及培养液对照组[CD14(40.06±8.06)%,CD163(1.02±0.38)%]相比差异有统计学意义(P<0.05);ELISA结果示Ⅱ因子刺激后IL-8、IL-10及TGF-β分泌表现出时间依耐性特征,刺激后3h表达量达高峰;Real-time PCR显示IL-8、IL-10、IL-12、CXCR2、CCR2、CCL18mRNA表达上调,CXCR1和TGF-β表达下降.结论 激活的凝血因子Ⅱ能诱导外周血MO/MA分化为CD163highIL-10highIL-12highCCL18highIL-8high,具有类似肿瘤相关巨噬细胞特征的M2型巨噬细胞亚型;Ⅱ因子可能参与了EOC腹膜微环境浸润的TAM的分化和极化作用. 相似文献
4.
IDDM与HLA-DQA1及其启动子QAP 的相关性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 研究胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)的易感性与HLA-DQA1及其启动子QAP基因多态性是否存在关联。方法 采用PCR-RFLP分析DQA1等位基因多态性;采用PCR-SSO检测QAP多态性。结果 等位基因分析发现,患者中DQA1*0301、QAP3.2等位基因频率显著高于正常人(RR=2.80、2.43,P<0.01);而DQA1*0601、QAP4.2在患者中分布频率较正常人显著降低(RR=0.10,P<0.025)。启动子与结构基因连锁分析表明:QAP3.2-DQA1*0301单元型与IDDM关联,QAP3.1-DQA1*0301与IDDM无关联;QAP4.20-DQA1*0601则具有保护作用。结论 1.IDDM与HLA的关联不仅存在于结构基因,而且也存在于启动子;2.同一结构基因与不同的启动子连锁可呈现不同的关联格局。 相似文献
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ACL(+)复发性流产与亚甲基四氢叶酸还原酶C677T和A1298C位点突变关联的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨亚甲基四氢叶酸还原酶基因(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)C677T和A1298C位点突变与抗心磷脂抗体(anticard iolipin antibody,ACL)阳性复发性流产是否相关。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法,检测39例原因不明复发性流产和82例正常对照的亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C位点突变。结果:MTHFR 677 3种基因型(CC、CT和TT)在ACL(+)流产组和对照组分布有统计学差异(P=0.045),进一步分析表明,677TT在患者组中表达频率显著增大(P=0.026),T等位基因频率在患者组中也显著增大(P=0.018),MTHFR1298相关3种基因型(AA、AC和CC)和A、C等位基因频率在2组中分布无差异,同时发现8种C677T/A1298C连锁基因型,但都与ACL(+)复发性流产无关。结论:ACL(+)复发性流产与MTHFR C677T突变有关,表明除自身抗体有关的获得性凝血途径以外,遗传性凝血因素在此种类型的流产发生中也起一定的作用。 相似文献
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原因不明习惯性流产患者人类白细胞抗原-DQ区域基因多态性的研究 总被引:6,自引:1,他引:5
目的探讨原因不明习惯性流产易感性与人类白细胞抗原(HLA)-DQ区域基因多态性的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),分析32例原因不明习惯性流产患者(研究组)和54例无不良妊娠史正常妇女(对照组)的DQA1和DQB1基因型.结果研究组的DQB1*0604,0605等位基因频率(12.5%)较对照组频率(2.8%)显著增高(P<0.05),DQB1*0501,0502等位基因频率(3.1%)较对照组频率(11.1%)显著降低(P<0.05);两组间DQA1各等位基因频率无统计学差异.研究组的DQA1*01-DQB1*0604,0605单元型频率(12.5%)较对照组(2.8%)显著增高(P<0.05).结论DQB1*0604,0605等位基因与DQA1*01-DQB1*0604,0605单元型可能是该病的易感基因与易感单元型,而DQB1*0501,0502等位基因可能是防止该病发生的保护性因子. 相似文献
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目的 探索凝血因子Ⅻ刺激正常人外周血单核细胞(monocytes,MOs)后对卵巢癌细胞侵袭能力的影响.方法 正常女性外周血来源MOs在体外经Ⅻ因子刺激12h后,以卵巢癌患者腹水来源的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)为阳性对照,通过印度墨汁吞噬实验检测经Ⅻ因子刺激后,MOs吞噬功能的变化;检测经Ⅻ因子刺激后MOs培养上清对卵巢癌细胞系ES-2,SKOV-3,HO-8910体外侵袭能力的影响;采用AP-1、STAT、Inflammation-1、Oncogene-3家族转录因子试剂盒筛选Ⅻ因子可能通过何种细胞信号转导途径激活MOs.结果 (1)卵巢癌腹水来源的TAM和经Ⅻ因子刺激后MOs吞噬印度墨汁的比例分别为0.66±0.04和0.36±0.03,显著高于外周血来源的MOs(0.27±0.018)(P<0.01,P=0.033).(2)卵巢上皮性癌细胞ES-2在MOs+Ⅻ因子组上清为趋化诱导物时侵袭细胞数目为110.9±5.046,略少于腹水组(157.5±14.86),但显著高于使用普通培养基作为趋化诱导物的阴性对照组(39.14±10.91),在MOs+Ⅻ因子组上清中添加Ⅻ抑制剂西妥昔单抗后,侵袭细胞数量减少为42.43±9.097.结论 卵巢癌腹膜内上调的Ⅻ因子可能通过教育和诱导MOs向具有类似TAM特征的M2型巨噬细胞亚型分化,成为加速卵巢癌细胞在腹膜转移的诱导因素之一. 相似文献
9.
目的:探讨凝血因子Ⅻ能否诱导外周血单核细胞(MO)分化为卵巢癌(EOC)腹膜微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。方法:分离正常女性外周血MO,在体外经Ⅻ因子刺激,流式荧光激活细胞分选技术(FACS)检测刺激后CD14、CD68和CD163表达的比例;ELISA检测TNF-α、IL-4、IL-8、TGF-β、IL-10、MMP2等因子的表达;Real-timePCR检测IL-10、IL-8、CCL18、CCR2、TGF-β、CXCR1及CXCR2等细胞因子及相关受体mRNA的表达,添加Ⅻ因子抑制物-C1酯酶抑制剂(C1-INH)后检测相应mRNA转录变化。结果:经Ⅻ因子刺激后,MO表面CD14,CD163表达比例上调[CD14:(57.025±11.135)%,CD163:(1.09±0.21)%],与阴性对照组[CD14:(45.2±5.24)%,CD163:(0.7±0.08)%]相比有统计学差异(P0.05);经Ⅻ因子刺激后MO分泌IL-8,IL-10及TGF-β分泌表现出时间依赖性,IL-8及TGF-β于刺激后12h分泌达到高峰,IL-10分泌高峰为刺激后3h;刺激后IL-8,IL-10,CXCR2,CCR2以及CCL18mRNA的表达上调,添加C1-INH后,相应mRNA的转录水平下调。结论:凝血因子Ⅻ能诱导外周血MO分化成表型为CD14highCD163highIL-10highCCL18highIL-8high的单核巨噬细胞,类似TAM特征的巨噬细胞亚型,Ⅻ因子可能参与EOC腹膜微环境中浸润的MO分化,从而调控EOC的腹膜转移。 相似文献
10.
目的 :探讨HLA DQB1启动子区域基因多态性是否与原因不明习惯性流产发病存在关联。方法 :采用聚合酶链反应 序列特异性寡核苷酸探针杂交方法 ,对 32例原因不明习惯性流产患者和 5 3例正常妇女 ,分析DQB1启动子区域基因多态性。结果 :发现DQB1启动子等位基因频率在两组中无统计学上差异 ,而QBP6 2 DQB1 0 6 0 4 0 6 0 5单元型在患者组中的表达频率是 12 5 % ,在对照组中频率是 2 83% ,两者相比差异显著 (RR =4 9,P <0 0 5 )。此外 ,还发现了 6种中国人新的QBP DQB1的单元型。结论 :DQB1启动子与原因不明习惯性流产不存在直接关联 ,但与DQB1组成的单元型可能是导致该病易感性的因素。 相似文献