不同促细胞分裂因子对人神经干细胞定向分化的影响

目的观察不同促细胞分裂因子对人神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法对人NSCs用无血清DMEM培养基行原代培养的同时,分别加入表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、维甲酸(RA)等因子,观察其对NSCs定向分化的作用。结果EGF培养的NSCs,克隆球形成慢且较松散,经血清诱导分化后,主要为星形胶质细胞,仅有少数神经元。而bFGF培养的NSCs则生长良好。在加血清诱导分化后,不同浓度bFGF培养的NSCs分化的细胞不同。bFGF与EGF共同培养的NSCs,其生长及神经球形成良好。在加血清诱导分化后,分化的神经细胞比例更接近脑内神经细胞的组分。NGF对神经球的形成无明显影响,但可促使其向神经元分化。RA使神经克隆球形成,可使NSCs直接分化为神经元细胞的比例明显增加。结论不同促细胞分裂因子对人NSCs的增殖及定向分化均有一定影响。     

外源性p21WAF1/CIP1基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性p21^WAF1／CIP1基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响．方法：采用脂质体介导法将p21^WAF1／CIP1基因质粒转导人人胶质瘤细胞系SHG44细胞，然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察。结果：酶切电泳和斑点杂交显示p21^WAF1／CIP1基因成功的转染至SHG44细胞。转染p21^WAF1／CIP1基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生；生长速度明显慢于亲代细胞，其倍增时间约是对照细胞的二倍；细胞周期发生明显改变，G1期明显增多，S期明显减少．结论：外源性p21^WAF1／CIP1基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用，并可诱导细胞凋亡产生。     

神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型

目的：建立一个方便、有效的动物实验模型以研究神经干细胞移植治疗脑缺血的可行性。方法：实验于2004—09／2005—10在第四军医大学全军神经外科研究所完成。健康家猫12只，随机分为缺血再灌注组（10只）和假手术组（2只），参照四血管阻塞法制作猫全脑缺血模型。先用显微手术的方法分离家猫双侧椎动脉并电凝，永久性闭塞双侧椎动脉。24h后再分离双侧颈总动脉，用动脉夹阻断血流。用含表皮生长因子的无血清培养基原代分离培养小鼠神经干细胞。将原代培养的小鼠神经干细胞移植到全脑缺血再灌注损伤模型的一侧大脑皮层中，假手术组猫大脑皮层注射同量的磷酸盐缓冲溶液；用免疫荧光技术检测移植1个月后的小鼠神经干细胞。结果：实验家猫12只，进入结果分析9只。（1）缺血再灌注组10只家猫经缺血再灌注损伤后死亡2只，1只夹闭血管后始终未出现静息脑电波，模型制作成功7只，成功率70％。假手术组家猫全部存活。缺血再灌注损伤后的家猫均出现不同程度的肢体瘫痪及平衡失调表现。饲养1周后，肢体瘫痪及平衡失调表现均逐渐有所改善。②原代培养细胞在无血清培养基中生长2—3d后，大部分细胞死亡，只有少数以单细胞形式悬浮生长。部分细胞分裂形成几个到几十个细胞的细胞团。到7—10d时可生长成有数十个到数百个细胞的细胞团，也呈悬浮生长。这些悬浮生长的细胞在含血清培养基中能够贴壁生长并部份分化成神经微丝抗原阳性的神经元及胶质纤维酸性蛋白抗原阳性的神经胶质细胞。（3）细胞移植后，家猫症状有所改善，但移植侧与对侧肢体瘫痪及平衡失调表现改善无明显差别。④免疫荧光方法检测小鼠神经干细胞移植到猫前脑后1个月仍有大量存活，部份细胞分化为神经元及神经胶质细胞，部份细胞向猫脑组织中迁移。迁移深度0．1—0．2mm。呈弥散性分布。沿针道侧壁贴附的细胞呈圆形，迁移到脑组织深部的细胞大多呈梭形。海马及对侧脑皮层等远隔部位未检测到阳性细胞存在。不同个体间未发现明显差异。⑤缺血再灌注组脑皮层及海马CA1区苏木精-伊红染色示典型的迟发性神经元坏死。结论：小鼠神经干细胞在猫全脑缺血模型中能够存活、迁移并分化；成功建立一个神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型。     

电刺激三叉神经节定位注射治疗三叉神经痛

0　引言　对于经过药物和周围神经支封闭治疗效果不佳或无效的三叉神经痛患者 ,目前多采用射频热凝半月节和开颅微血管减压手术 ,但两种方法对并发心脑血管疾病的老年患者仍具有一定的风险性 ,我们采用电刺激三叉神经节定位注射法治疗三叉神经痛 ,取得了较好疗效 .1　对象和方法1.1　对象　 1999 0 7/ 2 0 0 1 0 7收治 2 5 (男 16,女 9)例三叉神经痛患者 ,治疗前均经内科采用药物和封闭治疗效果不佳或无效 .年龄 63～ 82岁 ,平均年龄 66岁 ,病程 3～ 2 7ａ;Ⅱ支 4例 ,Ⅲ支 7例 ,Ⅰ +Ⅱ支 3例 ,Ⅱ +Ⅲ支 11例 .三叉神经痛伴高血压者 13例 ,冠…     

小鼠神经干细胞对胶质瘤趋向性实验研究

目的 探讨小鼠神经干细胞（NSCs）在体外和体内对胶质瘤细胞的趋向性。方法 将原代培养6d的小鼠NSCs悬液离心、收集备用。制备C6胶质瘤细胞、3T3成纤维细胞爬片，随后与NSCs共同培养3d。用荧光染料Hoeehst33342标记NSCs，借助立体定向技术于胶质瘤动物模型内接种NSCs，观察NSCs在胶质瘤动物模型脑内的分布情况。结果 小鼠NSCs对C6细胞有明显的趋向性。体内实验见肿瘤组织内满布标记的NSCs。结论 小鼠NSCs无论在体外或体内对胶质瘤细胞均有一定的趋向性。     

An experimental study on nerve regeneration and spinal neurons after CO2 laser anastomosis of rat sciatic nerve

Objective: Many methods have been used in an attempt to seal the epineurium and to prevent axonal outgrowth.In this study, the rat sciatic nerves were repaired with CO2 laser, the nerve regeneration and the morphology of spinal anterior horn neurons were investigated. Methods: Seventy-two male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 6 groups of 12 rats. The animals were designed to observe the electrophysiology, the histopathology and the morphology of spinal anterior horn neurons. One of the rat sciatic nerve anastomosed with CO2 laser, the contralateral nerve was reconstructed by microsuture technique. At 2, 4, 6, 8 weeks postoperatively, neuromuscular functions, the regeneration of axons and neurons were evaluated by the electro-physiological and histopathological studies. The rats were killed at 4, 6 weeks postoperatively. Results: The recovery of toe spread and myodynamia in laser groups was better than that in suture groups (P＜0.05). The latency of foot withdraw caused by radiate heat and neuromuscular conduction velocity in laser groups were faster than that in suture groups (P＜0.05). The density of nerve fibers, percentage of axons passing through anastomotic area and numbers of neurons were better in laser groups than in suture groups. At 8 weeks postoperatively, the first grade dendrites of anterior horn neurons grew well. Their diameter, length, volume and total volume were much higher than that in control group. (P＜0.05, P＜0.01). Conclusion: CO2 laser repairing was effective in promoting the regeneration and the recovery of sciatic nerves in its earlypost-trauma stage. In addition, laser repairing was found to reduce regenerating axons misdirection and forming neuroma.     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠脑弥漫性轴索损伤中的表达

0　引言　碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growthfactor,b FGF)作为新的神经营养因子对神经再生的研究是近年的热点 ,研究表明 ,b FGF能促进体内外受损伤神经元的存活和突起生长 .广泛分布于成熟和未成熟的中枢神经系统内 ,主要由神经元、巨噬细胞和胶质细胞产生 [1 ] ,b FGF是一种具有生物学活性的多肽 ,具有促进胶质细胞、血管内皮细胞生存活化以及新生毛细血管的形成 ,在中枢神经系统内 ,其神经活性广泛 ,能保护神经元 ,促进神经生长 ,b FGF在保护神经元免受各种因素所致神经元变性和死亡中发挥着重要作用 .b FGF参与弥…     

Endostatin裸DNA对人脑胶质瘤的抑瘤效应

目的：探讨endostatin裸DNA对裸鼠皮下脑胶质瘤生长的影响特点。方法：用脂质体包埋法将endostatin基因的真核表达载体pcDNA-S-Endo注入裸鼠皮下SHG44人脑胶质瘤内,观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,结合免疫组化、电镜、微血管和瘤体坏死区计数,确定endostatin裸DNA治疗人脑胶质瘤的特点。结果：Endostatin裸DNA在荷瘤裸鼠体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤血管生成能力显下降,肿瘤生长受到抑制,抑瘤率达到41．6％。结论：Endostatin裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长41．6％。结论：Endostatin裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长,它是通过抑制肿瘤血管生成,导致肿瘤坏死实现的。本研究为应用裸DNA药物治疗人脑质瘤奠定了初步基础。     

二次脑损伤对弥漫性脑损伤后神经元损伤影响的实验观察

0　引言　二次脑损伤（secondary brain injury, SBI）理论系英国爱丁堡大学神经外科专家Miller在1978年首次提出,低血压和低氧血症是最常见的SBI因素,可以明显提高患者的死亡率和致残率,有关SBI因素可增加脑损伤患者的死亡率和致残率的研究国外进行了大量的临床统计工作,但关于SBI因素可加重弥漫性脑损伤（diffuse brain injury, DBI）的动物实验研究甚少［1,2］. 本研究在Marmarou DBI的基础上,制成低血压性SBI模型,观察室上区皮层神经元的损伤数目,旨在探讨SBI因素低血压是否可增加神经元的损伤程度,从而加重DBI.     

Cyclin A表达与人脑胶质瘤细胞增殖活性及其病理分级的关系

目的研究人脑胶质瘤中cyclin A表达与肿瘤细胞增殖活性及其病理分级的关系.方法采用免疫组化方法检测42例人脑胶质瘤标本中cyclin A和PCNA的表达水平,计算cyclin A阳性率和标记指数,以及PCNA阳性率和标记指数,分析它们与胶质瘤病理分级的关系.结果随着人脑胶质瘤病理分级的增高,cyclin A的阳性率和平均标记指数明显升高.在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中其标记指数分别是(0.15±0.42),(1.59±1.95),(5.76±5.85)和(6.74±6.33);Ⅰ,Ⅱ级和Ⅲ,Ⅳ级间有显著性差异(P<0.01);其阳性率分别是11%,75%,71%和82%,在Ⅰ级与Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级间有显著性差异(P<0.05).PCNA标记指数随脑胶质瘤恶性程度提高而升高.Cyclin A与PCNA的表达呈正相关(r=0.858,P<0.01).结论人脑胶质瘤中cyclin A蛋白的阳性表达与细胞增殖活性和组织学分级密切相关,它可能参与了人脑胶质瘤细胞的恶性转化.