碱性成纤维细胞生长因子对受照后大鼠血脑屏障的影响

目的评价定量检测放射性血脑屏障（BBB）破坏的不同方法，探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对放射性BBB破坏的保护作用。方法60只急性放射性脑损伤模型大鼠（直线加速器6MeV电子束单次照射25Gy）分为单纯照射组和照射前尾静脉注射bFGF组（250ng／kg），并设未照射对照组；分别于照射后2、7和30d采用脑干-湿重法检测脑含水量，并用单次静脉注射3mg／kg伊文氏蓝（EB）后脑组织的EB含量法评估BBB破坏情况。结果照射后脑组织含水量和EB含量均较对照组明显增高，注射bFGF组脑组织含水量和EB含量均低于单纯照射组（P〈0．05）。受照后不同日期的脑组织EB含量差异有统计学意义（P〈0．05），而脑含水量差异没有统计学意义。结论注射EB后检测脑组织，浓度法较干湿重法测脑含水量能更好地反映BBB的破坏情况；bFGF对受照后BBB破坏有保护作用。     

Nurr1基因转染人脐血间充质干细胞诱导分化为多巴胺能神经元的实验研究

目的探讨外源性Nurrl基因修饰的人脐血间充质干细胞在基因重组成纤维细胞生长因子-8(FGF8)和音猬因子(Shh)诱导下体外分化为多巴胺能神经元的情况。方法间充质干细胞被随机分为A组(对照组)、B组(Nurrl组)、C组(FGF8+Shh组)及D组(Nurrl+FGF8+Shh),采用脂质体法将pcDNA3.1-Ntrr1转染B、D组间充质干细胞,Western blot观察Nurr1基因表达情况,并在神经元条件培养液中进行增殖培养和诱导分化,间接免疫荧光染色法鉴定细胞性质,高效液相色谱法测定多巴胺含量。结果Western blot结果显示转染后Nurr1蛋白表达明显增高。A组和B组未发现酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞,而C组和D组TH阳性细胞分别为10．12％±2．65％及25．36％±3．13％,多巴胺含量分别为(43．6±2．1)nmol／L及(83．2±3．5)nmol／L,差异均有显著性意义(P< 0．01)。结论人脐血间充质干细胞在FGF8和Shh诱导下可以分化为多巴胺能神经元,外源性Nurr1基因修饰后,分化为多巴胺能神经元的数量增加。     

不同剂量放射线照射对大鼠学习记忆能力的损害

目的 了解不同放射剂量对大鼠学习记忆能力的影响及其关系.方法 分组采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠进行全脑照射,剂量分别为10Gy、20 Gy、30 Gy、40 Gy,并设未照射组为对照.在照射前及照射后7d,20d,60d分别进行Morris水迷宫实验,分析各组大鼠行为学检测结果 ,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习记忆能力.同时观察各组脑组织病理变化.结果20Gy、30Gy、40Gy剂量组与对照组及10Gy组照射后不同时间点平均潜伏期和搜索策略差异有显著性(P＜0.05).20Gy组在放射后7d、20d平均逃避潜伏期[(66.57±11.49)s、(51.30±12.45)s]和搜索策略得分[(15.64±2.14)分、(19.64±2.28)分]明显下降,60d时潜伏期[(40.05±10.98)s]和搜索策略得分[(26.42±2.59)分]有所恢复,30 Gy和40Gy组在放射后60d仍没有恢复.30 Gy组和40Gy组病理检查显示神经元萎缩变性,白质梳松.结论 学习记忆能力检测可作为判断放射性脑损害的敏感指标,20Gy以上剂量放射线照射可降低大鼠学习记忆能力.     

不同剂量放射线照射对大鼠学习记忆能力的损害

目的了解不同放射剂量对大鼠学习记忆能力的影响及其关系。方法分组采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠进行全脑照射,剂量分别为10Gy、20Gy、30Gy、40Gy,并设未照射组为对照。在照射前及照射后7d,20d,60d分别进行Morris水迷宫实验,分析各组大鼠行为学检测结果,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习记忆能力。同时观察各组脑组织病理变化。结果20Gy、30Gy、40Gy剂量组与对照组及10Gy组照射后不同时间点平均潜伏期和搜索策略差异有显著性(P<0.05)。20Gy组在放射后7d、20d平均逃避潜伏期[(66.57±11.49)s、(51.30±12.45)s]和搜索策略得分[(15.64±2.14)分、(19.64±2.28)分]明显下降,60d时潜伏期[(40.05±10.98)s]和搜索策略得分[(26.42±2.59)分]有所恢复,30Gy和40Gy组在放射后60d仍没有恢复。30Gy组和40Gy组病理检查显示神经元萎缩变性,白质梳松。结论学习记忆能力检测可作为判断放射性脑损害的敏感指标,20Gy以上剂量放射线照射可降低大鼠学习记忆能力。     

外源性bFGF抑制辐射诱导的C17.2神经干细胞凋亡的实验研究

目的 观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对辐射诱导的C17.2神经干细胞(NSCs)凋亡的影响,探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在bFGF对辐射诱导的C17.2 NSCs凋亡的抑制效应中的作用. 方法 以直线加速器照射C17.2NSCs建立离体放射性损伤模型.MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测不同浓度的外源性bFGF和U0126对细胞凋亡的影响. 结果 外源性bFGF浓度为0～100ng/mL时,细胞凋亡率可由(12.78±1.04)%降低至(4.83±0.31)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);加入U0126后细胞凋亡率为(8.42±0.71)%.DMSO对照组为(4.71±0.42)%,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 外源性bFGF对辐射引起的C17.2 NSCs凋亡具有抑制作用,ERK1/2参与该效应.     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导神经干细胞凋亡的抑制效应

背景：已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一,而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用,但其机制尚不清楚。 目的：观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17.2神经干细胞凋亡的抑制作用。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,于2006-11/2008-06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。 材料：C17.2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。 方法：以直线加速器进行总量为8 Gy外照射C17.2神经干细胞建立离体放射性损伤模型,以1×107 L-1的细胞浓度接种C17.2神经干细胞悬液至96孔板,每孔加细胞悬液200 μL,按0,25,50,100 μg/L(0 μg/L作对照)分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。 主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果：随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高,C17.2神经干细胞增殖比明显增加(P < 0.01),呈现明显剂量-效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100 μg/L时活性最强,未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示：对照组细胞凋亡率高于25,50 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组(P < 0.01),25,50,100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比,差异具有显著性意义(P < 0.05~0.01)。 结论：外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17.2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。     

碱性成纤维细胞生长因子转基因治疗对放射性脑损伤大鼠学习记忆能力的改善作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)转基因治疗对放射性脑损伤(RIB)模型鼠学习记忆能力的影响,为探索治疗RIB的新途径提供实验基础.方法 PCR法克隆出bFGF基因片段,酶切后连接法构建bFGF-pcDNA3.1(+)质粒.分组采用直线加速器对Sprague-Dawley大鼠进行全脑单次25Gy照射,bFGF转基因治疗组采用侧脑室注射bFGF-pcDNA3.1(+)质粒,并设未照射组为对照.在照射前及照射后7d,20d,60d分别进行Moms水迷宫试验,分析各组大鼠行为学检测结果.采用平均逃避潜伏期和搜索策略2个指标评价大鼠学习记忆能力,同时观察各组脑组织病理变化.结果 各组大鼠放射前平均逃避潜伏期和搜索策略得分无统计学差异,bFGF治疗组、照射组和对照组在照射后不同时间点平均潜伏期和搜索策略差异有显著性(P<0.05)).bFGF治疗组在放射后7 d、20d平均逃避潜伏期[(68.42±11.35)s、(50.87±12.06)s]和搜索策略[(16.89±2.08)%、(19.98±2.14)%]明显下降,60d时潜伏期[(40.28±10.87)s]和搜索策略[(26.42±2.59)%]恢复至照射前水平,放射组60d后仍没有恢复.照射组病理检查显示海马和皮层神经元轻度变性.胞体萎缩,白质区域较对照组呈现组织结构梳松、血管周隙扩大等表现;bFGF治疗组病变程度明显较照射组轻.结论 25Gy射线照射可降低大鼠学习记忆能力,bFGF转基因治疗可逆转放射造成的大鼠学习记忆能力下降.     

血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗放射性脑损伤认知功能损害

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因转染同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗对SD大鼠放射性脑损伤认知功能损害的影响.方法 体外分离、纯化、培养大鼠MSCs.构建VEGF腺病毒载体.单次40Gy全脑照射成年SD大鼠,制备脑损伤模型.大鼠随机分为未照射组、单纯照射组和细胞移植3组.细胞移植组采用经尾静脉注射转染后的MSCs.各组大鼠在照射后1个月、2个月、3个月、4个月和6个月分别进行Morris水迷宫试验,采用平均逃避潜伏期和搜索策略两个指标评价大鼠学习认知能力.血管内皮细胞标志物VIII因子免疫组化染色,评价脑微血管密度改变.结果 照射组在3个月时血管密度与未照射组相比明显下降(P<0.05),4个月时开始出现明显的认知功能下降,平均潜伏期[(96.14±8.09)s]和搜索策略[(15.03±1.76)%]差异有显著性(P<0.05).细胞移植组大鼠的学习认知能力显著增加,平均潜伏期[(69.74±7.13)s]和搜索策略(23.74±1.51)%,与单纯照射组相比差异有显著性(P<0.05),在3个月和6个月时,脑微血管密度较单纯照射组显著增加(P<0.05).结论 VEGF基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗能够促进放射后大鼠脑微血管的再生和改善其认知功能.     

中风发病昼夜节律分析

目的 探讨中风发病时间的昼夜节律。方法 以光照时间（CT）为标识，回顾统计分析843例中风患者发病的时间以及排除其它伴发疾病后中风患者发病的昼夜节律性变化。结果 脑梗死、脑出血和蛛网膜下腔出血发病均有昼夜节律性变化，脑梗死在CT0～CT4有明显发病高峰，脑出血和蛛网膜下腔出血白天发病明显高于夜间。排除其它伴发疾病后中风患者发病仍有相似的昼夜节律。结论 中风发病有昼夜节律性，白天高夜间低。     

bFGF基因转染对放射诱导的C17.2神经干细胞凋亡的抑制作用

目的 观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对放射诱导的C17.2神经干细胞(NSCs)凋亡的抑制作用,为探索治疗放射性脑损伤(RE)的新途径奠定实验基础.方法 以直线加速器照射C17.2 NSCs建立离体放射性损伤模型,流式细胞仪检测凋亡率和坏死率,MTT法检测细胞活性并拟合生存曲线.构建含bFGF片段的真核表达体pcDNA3.1-bFGF质粒后,脂质体法转染C17.2 NSCs,观察转染pcDNA3.1-bFGF质粒后细胞对放射的耐受情况,并与对照组比较.结果 转染pcDNA3.1-bFGF的C17.2 NSCs放射后凋亡率和死亡率均显著低于转染空质粒组和对照组(P＜0.05).结论 外源性bFGF基因转染对放射诱导的C17.2 NSCs凋亡具有明显抑制作用,对RE有潜在的治疗价值.