多重环介导等温扩增快速检测沙门菌、副溶血弧菌和单核细胞增生性李斯特菌方法的建立

目的：建立能够同时检测沙门菌、副溶血弧菌（VPH）和单核细胞增生性李斯特菌（LM）的多重环介导等温扩增（mLAMP）方法。方法分别针对沙门菌 bcfD 基因、VPH 的 tlh 基因和 LM的 iap 基因设计 mLAMP 引物,以LAMP 进行单重 LAMP 检测。实时浊度监测扩增结果,优化引物浓度配比,进而建立此3种食源性致病菌的mLAMP 检测体系,以 PCR 检测灵敏性作为比较,进行特异性和灵敏性分析。结果实时浊度监测表明,该 mLAMP体系具有良好特异性,可在45 min 内一次性检测以上3种致病菌,且无非特异扩增产生。这3种菌的检测最低限分别为300 fg／μl、4．2 pg／μl 和4．5 pg／μl,与 PCR 检测灵敏度相当。结论该多重 LAMP 可同时检测食品中的沙门菌、VPH 和 LM,可作为大规模样品的初筛或传统方法的辅助方法,用于快速判定样品中是否含有这3种致病菌。     

肠杆菌耐药性研究进展

在过去的三十多年的时间里,由于大量滥用抗生素,细菌形成的耐药问题越来越严重,尤其是肠杆菌带来的耐药严重的威胁着感染病人的恢复.肠杆菌形成的耐药包括自身固有耐药和获得性耐药,在很大程度上与细菌自身的基因发生改变有关.该文从这两方面对肠杆菌的耐药机制进行综述.     

PCR产物直接测序快速识别病原菌

[目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法.[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌.[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增.[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法.     

从外环境分离军团杆菌的研究

我们通过腹腔注射嗜肺军团杆菌(Lp)感染豚鼠证明,感染后第4～5天剖杀取脾和肺脏新鲜切面压印于BCYE_α培养基是再分离Lp的最佳条件,又比较了离心和钾明矾絮凝两种集菌法对再分离Lp的影响,结果发现后者分离效果好。从而摸索出从外环境分离军团杆菌的合适程序:钾明矾絮凝—豚鼠—BCYE_α培养基。为了验证此法的实际应用价值,我们从北京某两宾馆空调系统采集水样29份,分离出6株Lp,说明这一方法是可行的。     

解放军疾控所SPF动物房的工艺设计

解放军疾病预防控制所,为履行职能和任务,在业务办公大楼12层建设了SPF动物实验设施,面积约240 m2。文章介绍了作者的设计思路和建设方案。同时还介绍了SPF动物房的建设经验。     

志贺氏菌致病机制研究进展

志贺氏菌属是一类不形成芽孢的革兰氏阴性致病菌,能够通过侵袭大肠引起患者典型菌痢症状,如发热、腹痛、腹泻等。本文就志贺氏菌质粒和染色体上的毒力相关基因以及志贺氏菌的Ⅲ型分泌系统和侵袭机制等方面的研究进展作一综述。     

脉冲场凝胶电泳技术在食物中毒分子流行病学调查中的应用

目的 探讨一种快速准确的分析由细菌引发的食物中毒的分子流行病调查方法,有效地追踪溯源和控制传染源.方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)的方法对一起食物中毒分离的12株奇异变形杆菌进行分型.结果 这起暴发事件的PFGE试验结果显示,同起事件的DNA带完全一致. 结论 PFGE具有分型力强、重复性高等特点,能直观地判断分离菌的亲缘关系,及时查明暴发流行的传染源,从而有效地控制疫情的蔓延,PFGE可以作为暴发流行中对细菌进行鉴定的分析技术.     

口服霍乱疫苗快速免疫程序探讨

目的探索能于1周内完成的口服霍乱疫苗快速免疫程序,以适合短期军事行动和突发公共卫生事件应急处置的需求。方法选取符合受试标准的100名健康新兵,采用随机单盲的方法分为A、B、C、D4个组,A组第1天服2粒、第3天服1粒;B组第1天服2粒、第7天服1粒;C组按标准免疫程序,即第1、7、28天各服1粒;D组按标准免疫程序第1、7、28天各服1粒安慰剂。于首次接种前和首次接种后14 d、30 d、60 d分别抽取受试者静脉血,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体(IgG)水平。结果首次接种后14 d、30 d,A、B、C组IgG阳性率差异无显著性(P>0.05);首次接种后60 d,A、B、C组IgG阳性率分别为40.0%、72.0%和68.0%,B组阳性率显著高于A组(P<0.05),与C组差异无显著性(P>0.05);首次接种后14 d、30 d、60 d,A、B、C组IgG阳性率均显著高于D组(P<0.05)。结论第1天服2粒、第7天服1粒的受试者IgG阳性率最高,与按标准免疫程序接种者阳性率差异无显著性,且在2个月内保持稳定,能达到1周内完成接种、稳定保护2个月的预定目标,适于短期军事行动和突发公共卫生事件应急处置需求。     

面向未来 着眼发展 提高军事医学科研规划水平

我院的“九五”规划制订工作采取自上而下，自下而上，上下结合；院与研究所、医院相结合；领导、机关与专家相结合；全面调研、科学分析与系统论证相结合的方法，经过近两年的充分调研和科学论证，比较圆满地完成了制订工作。本文对我院制订规划的基本思路和做法进行分析总结，旨在为科研单位制订规划提供一些有益的启示。     

痢疾杆菌GST-IpaH4.5载体构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建痢疾杆菌GST-IpaH4.5融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌（E.coli）中诱导表达。方法以痢疾杆菌福氏2a 301株全基因组为模板,PCR扩增痢疾杆菌ipaH4.5基因,在ipaH4.5的上游加上BamHⅠ酶切位点,下游加上XholⅠ酶切位点,将ipaH4.5基因定向插入质粒pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-IpaH4.5并转化E.coliDH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定,DNA序列正确后提取质粒转化E.coli BL21,筛选阳性转化子,异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达结果。结果成功构建IpaH4.5原核表达质粒pGEX-IpaH4.5并表达出大小约86 000Mr的GST-IpaH4.5融合蛋白。结论 GST-IpaH4.5融合表达载体的构建,为进一步纯化IpaH4.5蛋白和研究其在痢疾杆菌致病机制中的作用奠定了基础。