海南地区疑似肺结核患者非结核分枝杆菌感染特征

目的了解海南地区疑似肺结核患者非结核分枝杆菌(NTM)的菌种分布、耐药性及临床感染特征。方法收集2015年1月—2018年8月海南省某院疑似肺结核患者痰、肺泡灌洗液等呼吸道标本进行培养、菌种鉴定,对NTM感染情况、药敏结果,以及NTM肺部感染患者临床资料进行分析。结果共有833份疑似肺结核患者阳性呼吸道标本,其中126份初步鉴定为NTM,经菌种鉴定,检出结核分枝杆菌3株,检出非分枝杆菌属细菌3株,检出的4株NTM无法鉴定至种,最终116份标本中检出NTM118株。109例为单一NTM感染,7例为混合感染。有8种NTM菌种类型,主要以龟/脓肿分枝杆菌(41.5%)和胞内分枝杆菌(37.3%)为主。8种NTM菌种对8种一、二线抗结核药物呈不同程度的耐药,总耐药率最高的为异烟肼(96.6%),对8种抗结核药物全部耐药的比率高达32.2%。NTM肺部感染患者中男性少于女性,主要好发于中老年人,患者主要以海南沿海地区为主。NTM肺部感染患者主要临床表现为咳嗽咳痰、胸闷气促、血痰或咯血、食欲减退及体重下降,基础疾病既往有结核病史、支气管扩张、肺部感染及咯血,影像学表现为继发型肺结核、肺部空洞、胸膜肥厚、支气管扩张伴有肺气肿及肺部感染。结论海南地区NTM肺部感染主要是以龟/脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主,NTM对常用的抗结核药物均具有较高的耐药性,NTM肺部感染与肺结核应依据病原学检查进行鉴别。     

海南省肺部感染患者非结核分枝杆菌的菌种鉴定分析

  目的   通过对海南省肺部感染患者非结核分枝杆菌（NTM）进行菌种鉴定,探讨海南省NTM肺部感染菌种的类型及人群分布情况。  方法   收集2016年7月至2021年6月期间就诊于海南医学院第二附属医院疑似肺结核患者的呼吸道标本进行分枝杆菌培养,对培养阳性标本进行对硝基苯甲酸（PNB）/噻吩-2-羧酸肼（TCH）培养菌型初步鉴定,采用DNA微阵列芯片技术进行分枝杆菌菌种鉴定,无法确定菌种的菌株进一步采用基因测序法鉴定。  结果   共收集8 507例疑似肺结核患者的呼吸道标本,剔除重复病例后,有318例经PNB/TCH培养初步鉴定为NTM,315例经DNA微阵列芯片技术和热休克蛋白65（hsp65）基因测序鉴定为NTM。 其中308例患者为单一感染模式,6例MTB＋NTM和1例2种不同NTM的混合感染模式。快速生长分枝杆菌128株占40.5%,以龟/脓肿分枝杆菌为主（占32.9%）;缓慢生长分枝杆菌188株占59.5%,以胞内分枝杆菌为主（占39.6%）。 女性患者多于男性且好发于中老年人,男女性别比为0.79∶1。 男女性患者年龄分布差异有统计学意义（Z=2.200,P<0.05）,>40岁的患者占91.1%。  结论   海南省NTM肺部感染主要以龟/脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌感染为主,>40岁的女性中老年人为NTM侵袭的主要人群。     

DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的探讨DNA微阵列芯片法在海南地区结核病诊断及耐药性检测中的应用。方法采用抗酸杆菌涂片法、罗氏培养法、比例法药敏试验及DNA微阵列芯片法对海南地区的2069例疑似结核病患者痰标本进行检测,并对结核分枝杆菌检出率、耐药性及耐药基因突变特征进行分析。结果DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌检出率为明显高于罗氏培养法和抗酸杆菌涂片法(P<0.05)。以比例法药敏试验为金标准,DNA微阵列芯片法与比例法药敏试验检测耐利福平、耐异烟肼结核分枝杆菌及耐多药结核分杆菌的效果比较,差异有统计学意义(P<0.05),但均有较好的一致性(Kappa≥0.75)。耐利福平基因突变类型主要为rpoB531(C→T),占56.3%;耐异烟肼基因突变类型主要为KatG315(G→C),占84.6%;耐多药结核分杆菌基因突变类型主要为rpoB531+KatG315占54.6%。结论DNA微阵列芯片法可快速、准确地对海南地区疑似结核病患者的痰标本进行结核分枝杆菌及其耐药性检测,从而指导临床用药。     

线性探针技术在海南省结核病诊断及耐药性检测中的应用

目的 探讨线性探针技术在海南省结核病诊断及耐药性检测中临床应用。方法 分别采用结核菌涂片、罗氏培养法、比例法药敏及线性探针技术对海南省疑似结核病患者痰液标本进行检测,并对检测结核分枝杆菌、耐药性及耐药突变特点进行分析。结果 线性探针技术检测结核分枝杆菌阳性率（58.7%）明显高于结核菌涂片（40.2%）和罗氏培养（53.8%）,线性探针法与两种传统方法比较差异有统计学意义（P<0.05）;以比例法药敏为金标准,线性探针法对结核分枝杆菌耐利福平、异烟肼和耐多药结核分枝杆菌检测的特异性为89.27%、94.95%和91.45%,敏感性为94.38%、75.00%和75.68%,阴性预测值为94.62%、80.34%和5.60%,阳性预测值为85.71%、93.32%和84.85%,符合率为90.05%、85.34%和85.34%,线性探针技术与比例法药敏检测结核分枝杆菌利福平耐药性效果比较差异无统计学意义,且具有较好一致性,检测异烟肼耐药性差异有统计学意义,且两种方法之间一致性一般,检测耐多药结核分枝杆菌两种方法差异无统计学意义,但两种方法之间一致性一般;利福平耐药基因突变类型主要是 rpoB H531L,占57.14%,异烟肼耐药基因突变类型主要是katG S315T1,占91.89%,耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变类型主要为rpoB S531L+KatG S315T1,占56.06%。结论 线性探针技术可快速准确地从海南省疑似肺结核临床标本鉴定出结核分枝杆菌及耐多药结核分枝杆菌,并可直接快速检测临床标本耐药性从而指导临床用药。     

海南省某医院2014—2021年脓肿拟分枝杆菌分离鉴定及药物敏感性分析

目的 通过对海南医学院第二附属医院肺部感染患者脓肿拟分枝杆菌复合群(Mycobacteroides abscessus complex,MABC)进行菌种鉴定，探讨海南地区MABC肺部感染菌种类型、药物敏感性及人群分布情况。方法 收集2014—2021年期间就诊于海南医学院第二附属医院疑似肺结核患者的呼吸道标本并进行分枝杆菌分离培养，通过对硝基苯甲酸/噻吩-2-羧酸肼(PNB/TCH)培养基与DNA微阵列芯片法初步鉴定出非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)菌株，再采用hsp65及rpoB基因测序法鉴定MABC及其亚种，并采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验。结果 研究期间共收集3 025例疑似肺结核患者呼吸道标本，从123例患者呼吸道标本中分离培养鉴定出124株MABC菌株，包括脓肿拟分枝杆菌脓肿亚种(Mycobacteroides abscessus subsp.abscessus)74株，脓肿拟分枝杆菌马赛亚种(Mycobacteroides abscessus subsp.massiliense)38株，脓肿拟分枝杆菌博莱亚种(M...     

DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因的研究

目的采用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌INH耐药基因,为临床诊治提供实验依据。方法应用DNA微阵列芯片法和改良罗氏培养加比例法药敏试验对疑似结核病患者的150份痰液标本进行检测,并对检测的结果进行比较分析。结果 150份痰液标本的涂阳率为60.0%(90/150),DNA微阵列芯片法检测到结核分枝杆菌阳性率为62.7%(94/150),改良罗氏培养法阳性率为60.0%(90/150),比例法药敏试验异烟肼的耐药率为43.9%(36/82),异烟肼的kat G/inh A基因总突变率为35.1%(33/94);以改良罗氏培养加比例法药敏试验为标准,DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌阳性、异烟肼耐药性和敏感性的符合率分别为97.7%、86.1%和100.0%。结论 DNA微阵列法可快速准确地检测大部分疑似结核病临床标本的kat G和inh A基因突变,可用于临床耐药性的检测从而指导临床用药,也可用于临床诊断中的推广。     

基因芯片法与线性探针法对痰标本中结核分枝杆菌检测的应用价值

目的探讨基因芯片法与线性探针法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法海南医学院第二附属医院2018年3—7月门诊和住院的106例疑似肺结核患者纳入研究,采用基因芯片法、线性探针法对患者送检的痰进行检测,并与改良罗氏培养法进行比较;以比例法药敏试验为金标准,分析上述两种方法检测利福平和异烟肼耐药性的效能。结果对106份痰标本进行改良罗氏培养,阳性率为52.83%(56/106),经鉴定其中46份标本为MTB阳性。基因芯片法和线性探针法分别检出MTB46、53株,基因芯片法、线性探针法与改良罗氏培养法检测MTB结果比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对利福平的耐药性比较,差异均无统计学意义,且具有较好一致性(均P0.05,均Kappa0.75)。对利福平的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为84.62%、90.00%,线性探针法分别为84.62%、85.00%。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对异烟肼的耐药性比较,差异均无统计学意义,但一致性一般(均P0.05、均Kappa0.75)。对异烟肼的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为69.23%(18/26)、95.00%(19/20),线性探针法分别为65.38%(17/26)、85.00%(17/20)。结论基因芯片法和线性探针法均可准确、快速地从大部分疑似结核病患者的痰标本中鉴定出MTB,也适用于利福平和异烟肼耐药结果的快速检测,从而指导临床用药,值得临床推广。     

交叉引物恒温扩增技术在结核病中的诊断价值及其影响因素

目的 分析交叉引物恒温扩增技术（cross-primer isothermal amplification technology, CPA）在临床筛查、诊断结核病中的价值及其影响因素。方法 收集2018年1月1日—2021年12月31日在海南医学院第二附属医院的住院患者543例，其中结核患者179例、肺炎患者187例，其他疾病患者177例。对患者的痰液、肺泡灌洗液、胸水和中段尿等进行CPA检测、涂片镜检、培养法和基因检测，评估CPA检测对结核病诊断的价值及其影响因素分析，统计学分析采用SPSS 26.0进行。结果 CPA检测总阳性率为14.4%(78/543)，其中痰液标本阳性率29.1%(39/134)，在78例CPA检测阳性病人的分布中，结核组占首位69.2%(54/78)，其次为肺炎组21.8%(17/78)，其他疾病组占最低位9.0%(7/78)；以CPA检测为参照方法，涂片镜检“灵敏度”低于基因检测和培养法，而“特异度”高于培养法和基因检测，涂片镜检“漏诊率”高于基因检测和培养法；CPA检测阳性与性别、血沉和肺炎均有关；CPA检测与培养法和基因检测具有较好的一致性（Kappa...     

基因芯片技术在结核分枝杆菌耐药检测中的效果分析

目的 比较基因芯片和比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)在检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性中的应用效果。方法 选取2013年9月至2016年12月海南医学院第二附属医院598例涂阳肺结核住院患者的痰标本,具有传统药敏结果和基因芯片结果的484例患者纳入分析。采用基因芯片法检测rpoB、katG及inhA基因耐药突变位点及频率,以比例法药敏试验结果为金标准,比较两种方法的符合率。结果 基因芯片和比例法药敏试验检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性符合率为93.8%(454/484),对异烟肼的耐药性符合率为89.0%(431/484),对耐多药的符合率为95.5%(462/484)。118株检测到rpoB基因发生突变,优势突变位点为531,占56.8%(67/118);其次突变位点是526,占19.5%(23/118);516突变位点占12.7%(15/118)。97株检测到katG和inhA基因突变,最常见的突变位点是katG315,占82.5%(80/97),inhA均为-15突变类型,占14.4%(14/97)。结论 基因芯片法与比例法具有很好的一致性,可成为筛查结核分枝杆菌对利福平和异烟肼是否耐药的快速有效的方法。     

海南地区484株结核分枝杆菌菌株基因型特征分析

目的 了解海南地区结核分枝杆菌不同基因型流行特征,探讨基因分型用于评价本地区结核病控制中的应用价值。方法 本研究选取海南医学院第二附属医院自2013-2016年所有培养阳性结核分枝杆菌484株,采用SNP和Gao等推荐的12位点可变数目串联重复序列（variable number tandem repeat, VNTR）进行基因分型。结果 2013-2016年期间,484株结核分枝杆菌菌株中,北京基因型菌株279株,占57.6%,非北京基因型菌株205株,占42.4%,北京基因型菌株中包括91株(32.6%)古代北京基因型和188株(67.4%)现代北京基因型。北京基因型所占比例在四年间无显著变化,从2013年的59.6%到2016年的57.6%。采用3个高变VNTR位点基因分型后,成簇菌株数为0。结论 海南地区结核分枝杆菌存在明显的VNTR基因多态性,主要流行株仍以北京基因型为主,北京基因型所占比例在四年期间无显著性变化,且菌株成簇率较低,提示近期传播率低。