一种新的糖肽类抗生素雷莫拉宁研究进展

雷莫拉宁（Ramoplanin、A16686、MDL62，198）是一种新型的糖肽类抗生素，主要抑制革兰氏阳性菌的生长。其纯品是由A1、A2、A3三个组分组成的混合物，其中A2为主要成分，占80％。雷莫拉宁能够特异而迅速地抑制革兰氏阳性菌细菌壁的生物合成。这种抑制作用与万古霉素（Vancomycin)和替考拉宁（Teicoplanin)的抑菌机制不同。体外试验表明，雷莫拉宁对葡萄球菌的抑菌率是万古霉素和替考拉宁的4－8倍，而对链球菌、肠球菌、棒状杆菌、梭菌等多种革兰氏阳性菌都有很强的抑菌活性。另外，雷莫拉宁对许多具有耐药性的病原菌有很好的抑菌效果。雷莫拉宁的细胞毒性较小且无交叉耐药问题。但因其分子量较大，故胃肠道难于吸收，目前，雷莫拉宁主要开发为外用药物。雷莫拉宁在治疗痤疮、感染性外伤以及腹泻感染等病症上已取得了良好的效果，并且已进入了临床试验。     

临床分离产IMP-1型金属酶非发酵菌的耐药机制研究

从临床收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌共50株,进行头孢他啶和2-巯基乙醇的表型协同试验(CAZ ME),然后进行金属酶IMP-1基因的PCR检测。选取IMP-1阳性株测序,用PCR方法检测有无一类整合子基因(IntI1)。表型的检测发现有28株为协同阳性,其中铜绿假单胞菌27株,鲍曼不动杆菌1株。PCR和测序检测出其中一株铜绿假单胞菌含有IMP-1基因,同时也含有IntI1基因。首次在中国西部地区发现产IMP-1型金属酶、同时也含有一类整合子的铜绿假单胞菌,对于临床上研究细菌的耐药性传播具有重要意义。     

铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究

目的研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用。方法以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法扩增rhlR基因。利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证。同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率。结果rhlR的全基因序列为726bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致。大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103。体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白。重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用。     

铜绿假单胞菌生物被膜形成能力与基因型的相关性分析

目的 探讨铜绿假单胞菌（PA）临床分离株的粘附性、生物被膜形成能力及其与基因型的相关性。方法 采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析；通过肠杆菌基因间重复一致序列-PCR（ERIC—PCR）技术绘制48株PA的指纹图谱，应用计算机软件建立遗传相似性系数矩阵及聚类分析树状图。结果 48株临床分离PA菌株生物被膜的形成能力不同。生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性，PA在17％遗传相似性系数上分为A、B、C、D、E五个基因型，生物被膜形成能力强的PA大都属于D型，其遗传相似性系数为42％。结论 绝大多数临床分离的PA株具有较强的生物被膜形成能力；生物被膜形成能力不同的PA在基因型上表现出多态性；生物被膜形成能力较强的PA在基因型上表现出一定的相似性。     

鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立检测鸭疱疹病毒1型(鸭瘟病毒)的实时荧光定量PCR方法,为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法根据病毒DNA聚合酶基因的序列,设计引物和探针,采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR,用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照,构建标准曲线,对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价,同时与传统PCR方法进行比较研究。结果标准曲线表明在2.3×105~2.3×10拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为1.22~6.69以及2.09~8.84,说明有较好的重复性;对非鸭瘟病毒DNA无扩增,说明有很好的特异性;在对病毒DNA的检测方面,比传统PCR的敏感性高出104倍。结论成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。     

藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究

目的 :探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV-1)的作用及机理 ,为进一步开发该药提供理论依据。方法 :采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV-1感染的Vero细胞 ,以 50%组织细胞感染量 (TCID₅₀ ) ,细胞病变效应(CPE) ,MTT法和核酸分子杂交作为评价指标。结果 :MTT法测得紫金标的 50 %抑制浓度 (IC₅₀ )为 29.46mg·L^-1,50%中毒浓度 (TC₅₀ )为 1 077mg·L^-1,治疗指数 (TI)为 36.56 ,结果表明紫金标有明显抑制HSV-1的作用 ,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比。紫金标无直接灭活HSV-1的作用 ,也不能影响病毒的释放 ;但可干扰HSV -1对宿主细胞的吸附。不同浓度的紫金标能明显抑制HSV-1gD基因复制和mRNA表达。结论 :紫金标具有显著的抗HSV-1的作用 ,能抑制HSV-1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV-1gD基因复制与转录。     

2012-2016年鲍曼不动杆菌季度性耐药规律分析

目的 了解我院鲍曼不动杆菌耐药率,从时间角度分析鲍曼不动杆菌的耐药规律变化,可为合理应用抗菌药物和预防控制医院感染提供数据。方法 采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定仪对细菌进行鉴定及药敏,选择我院2012年1月至2016年12月从临床分离的鲍曼不动杆菌8196株(研究组),铜绿假单胞菌6656株(对照组)为研究对象。按季度为时间单位,统计分析鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌对亚胺培南,哌拉西林/他唑巴坦,头孢吡肟,庆大霉素,妥布霉素,环丙沙星,左氧氟沙星的耐药规律。结果 鲍曼不动杆菌对常用抗生素的耐药率随季度变化而改变,呈现一定的规律性,第一季度最高(27. 6%～86. 2%),第三季度最低(18. 3%～60. 0%)。第一季度耐药率和第三季度耐药率比较差异有统计学意义(P<0. 05)。对照组铜绿假单胞菌耐药率无季度变化规律。结论 鲍曼不动杆菌对亚胺培南,哌拉西林/他唑巴坦,头孢吡肟,庆大霉素,妥布霉素,环丙沙星,左氧氟沙星抗菌药物耐药率存在明显的季度性变化规律,鲍曼不动杆菌耐药性变化可能与季节气温气压有关。     

成人B群链球菌血流感染临床及实验室检查分析

摘要：目的 通过对B群链球菌引起的临床感染，特别是非妊娠成人B群链球菌血流感染的临床、实验室检验指标以及药敏结果进行分析，为临床诊治提供一定依据。方法 回顾收集2012年1月至2018年12月四川大学华西医院临床分离的B群链球菌菌株信息，筛选血培养阳性同时临床诊断为血流感染的患者信息，分析临床和实验室数据结果。结果 276株非重复株B群链球菌分离自男性比例略高于女性，占52.5%，患者平均年龄为(49.2±19.8)岁，分离标本前3位分别是尿液(43.5%)、皮肤软组织及伤口分泌物(25.4%)和血液(10.5%)。22例确诊血流感染患者中，男性患者比例更高占86.4%，平均年龄为(50.8±17.5)岁，所有血流感染患者均有基础疾病，肝胆相关疾病及肿瘤分别占36.4%，泌尿生殖系统疾病占22.7%，合并感染性心内膜炎占13.6%。典型临床表型为发热。血流感染经治疗患者中19例好转出院，2例死亡，1例自动出院。B群链球菌血流感染常规炎性指标与其他链球菌血流感染数据相比无特异性。血流感染分离菌株对克林霉素和左氧氟沙星耐药率较高分别为79.2%和45.5%，对青霉素、氨苄西林、万古霉素和利奈唑胺未发现耐药株。结论 成人B群链球菌血流感染者主要为中年男性，多合并有基础疾病，临床及实验室检查无特异性，对于发热患者应尽早规范采集血培养以明确诊断，青霉素是B群链球菌感染的首选治疗药物，保持着较高的敏感性，克林霉素以及左氧氟沙星耐药率较高，不推荐经验使用，临床治疗时应重视药敏结果，避免不合理用药。B群链球菌血流感染者经临床合理诊治预后较好。     

四川大学华西医院2012?2018年肺外结核患者结核分枝杆菌培养情况分析

  目的  分析四川大学华西医院近7年肺外结核患者送检的结核培养标本的结核分枝杆菌分离情况,为结核的临床诊疗提供依据。  方法  回顾性分析四川大学华西医院2012年1月至2018年12月肺外来源的结核培养标本10 003份,对肺外来源标本培养的阳性率、人口学特征、科室分布、肺外结核的部位等进行统计分析。  结果  10 003份肺外来源的结核标本中,培养阳性382份,阳性率3.8%,占我院结核培养阳性的26.6%（382/1 438）;以15～24岁的青少年占比最多（20.2%,77/382）,年龄中位数为39岁;在各类型标本中,占比前3位的标本类型依次为脓汁（19.1%,73/382）、脑脊液(16.2%,62/382)、关节液（15.7%,60/382）;培养阳性率最高的为分泌物标本（33.3%,3/9）,其次为脓汁（16.0%,73/456）,脑脊液阳性率最低（1.0%,62/6 096）;在各科室的分布中,阳性占比前3位的科室依次为骨科（24.3%,93/382）、结核科（10.2%,39/382）、神经内科（7.3%,28/382）;住院患者肺外结核常见部位为骨关节（包括脊椎和关节）（41.5%,113/272）、脑膜（16.2%,44/272）、胸膜腔（13.2%,36/272）;住院患者中合并肺部改变的肺外结核占60.3%（158/262）,不同部位合并肺部改变比例最高为皮肤结核（84.6%,11/13）,其次是腹膜腔结核（84.0%,21/25）、胸膜腔结核（83.3%,30/36）,骨关节结核中关节结核合并肺部改变比例最少（26.0%,20/77）,较脊椎结核合并肺部改变的比例（50.0%,17/34）低（P<0.05）。  结论  肺外结核在我院的占比较高,发病人群年轻化,肺外结核标本培养的阳性率较低,尤其是脑脊液标本。应重视提高结核培养的阳性率和结核的联合检测。     

艰难梭菌腹泻及实验室诊断

目的探讨艰难梭菌A&B毒素测定在临床应用价值,分析艰难梭菌毒素感染的临床特点。方法对四川大学华西医院2011-02/08收集的155份住院腹泻患者大便标本,采用VIDAS艰难梭菌A&B毒素检测试剂盒进行毒素检测。根据A&B毒素检测结果,将研究对象分为3组:艰难梭菌毒素检测阳性(CDAB阳性)组、艰难梭菌毒素检测灰区组和艰难梭菌毒素检测阴性组。对3组的实验室检测数据和临床资料进行分析比较,实验数据包括大便常规、血常规、生化检测以及粪便镜下微生物学检查,临床资料包括患者的年龄性别、使用抗生素与预后情况等。结果共检测了155例腹泻患者的大便标本,其中艰难梭菌A&B毒素阳性17例(10.97%),可疑6例(3.87%)。155例腹泻患者分为艰难梭菌毒素阳性、可疑和阴性3组进行实验室检测结果比较分析,大便隐血试验在阳性组和阴性组间有统计学差异(P=0.027)。3组病患的临床资料分析显示,抗真菌药物和质子泵抑制剂的使用可能是引起艰难梭菌感染的危险因素。结论艰难梭菌A&B毒素检测技术成熟并已商品化,该方法快速、简单、特异性高,可以作为艰难梭菌临床感染的辅助诊断指标。大便隐血试验可提示艰难梭菌感染,但不具有特异性。