水飞蓟宾缓解油酸诱导的HepG2细胞脂质沉积的机制探讨

［摘要］　目的　构建油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,探索水飞蓟宾调节HepG2细胞脂质沉积的作用机制。方法　通过0.4 mM油酸刺激HepG2细胞24 h构建脂肪变性模型。根据实验目的设置对照组、油酸组（OA组）、油酸+水飞蓟宾组（OA+S组）、油酸+氯喹组（OA+CQ组）和油酸+氯喹+水飞蓟宾组（OA+CQ+S组）。每组4样本。通过油红O染色以及甘油三酯(TG)检测评估各干预组细胞脂质沉积情况。通过Western blot检测各干预组自噬标志蛋白LC3B的表达情况。结果　OA组HepG2细胞胞内染色脂滴数量明显多于对照组,且TG含量高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。OA+S组经水飞蓟宾干预后胞内染色脂滴数量减少,TG含量下降,与OA组比较差异有统计学意义（P<0.05）。OA+CQ+S组在油酸刺激后,用自噬抑制剂氯喹预处理1 h,再加水飞蓟宾干预24 h,HepG2细胞内出现显著脂质沉积,TG含量上升,与OA+S组比较差异有统计学意义（P<0.05）,而与OA组水平相当（P>0.05）。Western blot检测结果显示,OA组LC3BⅡ/LC3BⅠ水平较对照组降低（P<0.05）;OA+S组LC3BⅡ/LC3BⅠ水平显著高于OA组,与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）;OA+CQ组、OA+CQ+S组的LC3BⅡ/LC3BⅠ水平显著高于OA组和OA+S组（P<0.05）。结论　0.4 mM油酸可引起HepG2细胞脂肪变性。水飞蓟宾通过增强HepG2细胞自噬而改善油酸引起的脂质沉积。     

橘红桔梗植物饮品对小鼠急性肺损伤和支气管哮喘的预防作用研究

目的：观察橘红桔梗植物饮品（TPC）对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）和卵清蛋白诱导的小鼠支气管哮喘的影响,并分析其作用机制。方法：（1）将48只雄性C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、ALI组及低、中、高剂量（0.8、1.6和3.2 mL/d）TPC组,灌胃给药,每日1次,持续1周及地塞米松阳性对照组。采用脂多糖气管内滴注建立小鼠ALI模型。采用HE染色法观察肺组织病理变化;流式细胞分析仪检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中性粒细胞比例;ELISA检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10含量;同时检测肺组织匀浆中的髓过氧化物酶（MPO）活性及肺组织中I-κBα和NF-κB的蛋白含量。（2）将48只雌性C57BL/6小鼠随机分成空白对照组、支气管哮喘组及低、中、高剂量（0.8、1.6和3.2 mL/d）TPC组,灌胃给药,每日1次,持续1周及地塞米松组。采用卵清蛋白腹腔注射致敏和鼻内刺激建立支气管哮喘小鼠模型。采用HE染色和甲苯胺蓝染色法观察肺组织病理变化;ELISA检测小鼠血清中IgE、IL-5和IL-13含量。结果：与空白对...     

海带多糖拮抗肾上腺素致血管内膜接触性损伤的作用研究

目的：研究海带多糖拮抗肾上腺素致血管内膜接触性损伤、减少组织因子（TF）表达的作用。方法：建立肾上腺素致家兔股动脉内膜接触性损伤模型,将家兔分成5组,分别通过插管把生理盐水、肾上腺素-生理盐水液,低剂量、高剂量海带多糖-肾上腺素液和依诺肝素-肾上腺素液注入相应家兔组的游离股动脉中,保留25min。取与药物接触的股动脉段,常规切片,HE染色,观察血管内膜的完整情况;将切片作TF免疫组化,以血管平均灰度值反映TF在内皮层和内皮下组织的表达情况,灰度值与TF染色成反比。结果：股动脉血管内膜HE染色切片显示,生理盐水组内膜完整、光滑;肾上腺素组内皮层脱落、缺失;海带多糖低剂量组大体完整,内皮局部脱落;海带多糖高剂量组内皮层完整,局部可见与皮下组织分离;依诺肝素组较完整,局部表面粗糙。TF蛋白免疫组化显示,海带多糖低剂量组（68．75±13．21）、海带多糖高剂量组（85．00±7．37）和依诺肝素组（105．44±15．15）平均灰度值均明显高于肾上腺素组（41．12±10．12）（均P〈0．01）。结论：海带多糖能够保护血管内膜的完整性,减少TF表达。     

动脉粥样硬化与免疫

动脉粥样硬化是一种脂质驱动的慢性炎症性疾病,表现为富含载脂蛋白B的脂蛋白、免疫细胞以及细胞外基质在动脉内皮下积聚形成粥样斑块。修饰后的脂蛋白获得损伤相关分子模式特征,首先触发以单核-巨噬细胞为主的固有免疫反应,其次是获得性免疫反应。这些炎症反应通常是慢性的且无法消除,并可能导致动脉损伤以及血栓诱发的器官梗死。本文主要综述免疫系统在动脉粥样硬化发生发展过程中的作用以及目前动脉粥样硬化的主要免疫防治策略。     

肾上腺素损伤内皮致动脉血栓形成的实验研究

目的研究肾上腺素能否直接损伤血管内皮细胞（VEC）,引起血栓形成,为今后研究肾上腺素过度脱氨损伤VEC机制研究和研发特异性防护药物打下基础。方法将家兔分成3组,肾上腺素组、生理盐水组和依诺肝素组。通过插管于股动脉游离段分别注入肾上腺素-生理盐水液、生理盐水,依诺肝素-肾上腺素液,保留25min后,动脉插管连接生物信号记录系统,观察血压曲线,当曲线变为直线即为血栓堵塞形成,记录栓塞时间。取与药物接触的股动脉段做切片,观察血管内皮的病理变化。结果肾上腺素组（20．08±1．72）min的栓塞时间显著短于生理盐水组（56．55±4．39）min和依诺肝素组（53．73±5．06）min（P〈0．01）,生理盐水组栓塞时间与依诺肝素组无明显差别。形态学观察股动脉血管显示,生理盐水组内皮质完整、光滑;肾上腺素组断裂、脱落较严重;依诺肝素组较完整,局部表面粗糙。结论肾上腺素能够直接损伤VEC,导致动脉血栓形成。     

蒙古扁桃Ⅱ对型糖尿病大鼠的影响

目的探索蒙古扁桃对Ⅱ型糖尿病大鼠的影响。方法将60只大鼠分为空白组(10只)和模型组(50只),空白组喂给基础饲料,模型组采用高脂高糖饮食诱导加小剂量腹腔注射链尿佐菌素(STZ)溶液建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型。水煎法制备蒙古扁桃提取物。将模型复制成功的大鼠分为模型组,阳性药(二甲双胍)组,蒙古扁桃低、中、高(0.75、1.5、3 g·kg^-1)剂量组。给药4周后,测定大鼠血糖、糖化血红蛋白(GHb)、糖耐量、胰指数,免疫组化法检测胰岛素表达水平。结果与模型组比较,蒙古扁桃各剂量组空腹血糖明显降低(P<0.05),糖耐量明显增强(P<0.05),胰腺内胰岛素阳性表达明显增加(P<0.05),差异有统计学意义。结论蒙古扁桃可能通过提高胰岛素的表达降低Ⅱ型糖尿病大鼠空腹血糖、提高其糖耐量。