肝片吸虫分泌抗原基因的克隆

本文报道从肝片吸虫成虫基因文库中筛选出 3个表达肝片吸虫分泌抗原的重组子,以及对 3个重组抗原基因初步表达的研究。平均长度 2.0 kb的肝片吸虫 DNA 的 San 3AI 部分酶切片段与 BamHI 酶切、脱磷的 pUC18载体连接并转化大肠杆菌 E.coli DH5α,构建肝片吸虫基因文库大小为 1.5×10~5 重组子。采用免疫印迹方法,用肝片吸虫分泌抗原制备的兔抗血清(1:50)和酶联 A蛋白(HRP-Protein A 1:40),经过初筛、复筛获得 3个反应较强的阳性克隆:pFH16,pFH23,pFH48。对这3个抗原基因表达产物的检测表明,重组子 pFH16 中抗原基因表达最强,pFH48 次之,pFH23 最弱。上述3个肝片吸虫分泌抗原基因的克隆为进一步研究抗原基因表达、重组抗原的免疫原性和动物保护试验打下了良好的基础。     

用限制性核酸内切酶分析钩端端螺旋体DNA的研究

For the application of restriction endonuclease analysis in typing and identifying leptospira, we selected some serovars and isolates, and analysed preliminarily their DNA with four restriction enzymes, EcoR I, Bgl II, Hha I, and Hind III. The DNA samples were isolated from the reference strains and isolates as follows: Serovar lai 56601, 017 (the virulent strain for PDH model of guinea pig), Serovar autumnalis 56606, Serovar manhao II 67020, and isolates 87112 and 87369. Each 2 micrograms of DNA was digested with 20mu of restriction enzyme at 37 degrees C for 2h and electrophoresed in 0.8% agarose gel. The gels were stained in ethidium bromide and photographed with UV light. In our experiments, apparently different restriction patterns of serovar lai 017 were observed with four restriction enzymes. Serovar lai, serovar autumnalis and serovar manhao II showed different patterns with EcoR I, especially in high molecular regions. We also observed in serovar lai 017 a distinct 10.5kb band which was obscure in 56601, the reference strain of serovar lai, after EcoR I digestion. The three serovars showed some delicate differences in Hind III restriction pattern. The two isolates from Apodemus agrarius in Sichuan (1987) 87112 and 87369 had patterns identical to those of serovar lai 56601, 017 with EcoR I, and 87112 also had a pattern identical to 56601, 017 with Hind III. Our results indicate that selected three serovars can be identified by analysis of their DNA with EcoR I and Hind III. It is suggested that restriction endonuclease analysis be a good method in typing and identify leptospira and in studying the differences of special DNA molecules.     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选用钩体赖型56601株、017株、秋季型56606株、曼耗2型67020株、1987年分离株87112、87369株,用内切酶EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ、Hha Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析其DNA,结果表明:钩体017株的四种内切酶图谱明显不同,在EcoR Ⅰ酶切图谱上,赖型、秋季型、曼耗2型钩体DNA的主要差别在高分子区带,赖型强毒力株017较同型弱毒力株56601在10.5kb处染色较深;三型钩体的Hind Ⅲ酶切图谱仅有细小差异;分离株87112和87369的EcoR I 酶切图谱与赖型56601和017基本一致。在HindⅢ酶切图谱上,分离株87112与赖型56601株、017株相似。提示:限制性核酸内切酶分析可以作为钩体分型和鉴定的手段。     

几个血清型钩端螺旋体DNA碱基组成的测定

作者用热变性温度法测定了几个血清型钩端螺旋体的DNA碱基组成(G+C mo 1％)。问号钩端螺旋体赖型017株为36.8％,黄疸出血型8244株为35.5％,波摩拿型109株为36.1％,犬型611株为35.2％,双曲钩端螺旋体帕托克型Patoc Ⅰ株39.1％,其中赖型017株的DNA碱基组成属首次报道。     

致病性与非致病性钩端螺旋体蛋白电泳及单克隆抗体识别抗原的比较

作者用SDS—PAGE和Western blot分析了三株钩端螺旋体的全细胞蛋白电泳图谱及McAb识别的抗原分子。三株钩体在10％SDS—PAGE中均被分出40多条清晰的区带,其中致病性的问号钩端螺旋体赖型017株,秋季型606株蛋白电泳图谱的平均相似性为90％,与非     

强力霉素治疗钩端螺旋体病研究

强力霉素(DOX)治疗早期钩端螺旋体(钩体)病的研究,国内尚未见报告。随机采用DOX治疗钩体病19例,并以青霉素G(PNC-G)治疗15例作对照。两组病例都治愈,其主要征候持续时间无显著差异。但PNC-G组发生赫氏反应(JHR)11例(73.3％),其中1例(9.1％)演变成肺弥漫性出血,而DOX组无JHR发生。DOX和PNC-G对新分离出的8株钩体的体外抗菌活性良好。检测3例DOX组病人的血药浓度,服药期中都显著高于最低抑菌浓度。     

庆大霉素治疗钩端螺旋体病探讨

作者以Cox固体培养基培养黄疸出血群赖型017株钩体,并以杯碟法观察抑菌环,揭示庆大霉素有抑制钩体生长的作用。临床随机分组观察结果表明:庆大霉素治疗早期钩体病有效,仅个别病例发生赫氏反应。     

四川省钩端螺旋体病肺弥漫性出血抢救及其主要病原体赖型钩端螺旋体的独特性

钩端螺旋体病(以下简称钩体病)是四川省常见病之一,发病时间集中在秋收季节,农民因下田劳动受染,1980～1989年呈现暴发流行达94县次。肺弥漫性出血(以下简称PDH)是导致四川省钩体病患者死亡的主要原因,占该病死因的98％。经过多年现场观察发现PDH的发生发展有严格规律性,独特的临床征象和病理变化,是一种国内外文献未系统报道过的一种临床病理实体(Special clinico-pathological entity)。通过乐山市几个县长期现场研究,及实验室研究,发现PDH是由数量多、毒力强、致病力大的钩体引起的,在四川、贵州、湖南、湖北     

致病性与非致病性钩端螺旋体蛋白电泳及单克隆抗体识别抗原的比较

作者用SDS-PAGE和Western印迹分析了三株钩体全细胞蛋白电泳图谱及McAb识别的抗原分子。致病性问号钩端螺旋体017株、606株蛋白电泳图谱平均相似性为90％,与非致病性双曲钩端螺旋体patoc Ⅰ株相比,分别为32％,31％;与McAb LB_1 识别的抗原图谱相比,017株与606株基本一致,与patoc Ⅰ株均完全不同。提示该分析方法在区分致病性与非致病性钩体上具有一定意义。     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选取钩端螺旋体(简称钩体)赖型017株、赖型56601株、秋季型56606株、曼耗2型67020株;1987年分离的87112株和87369株按本窒方法提取DNA,用BgIⅡ、EcoRI;Hha Ⅰ和Hind Ⅲ20u37C°消化2ug钩体DNA2小时,予0.8％琼脂糖凝胶上100V电泳4小时后照象记录。结果显示:不同内切酶对同一钩体DNA酶切显示不同图谱,EcoRI酶切图谱上,赖型、秋季型和曼耗2型明显不同,主要差别在高分子区带,赖型参考菌株56601与同型强