NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路在 HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的 探讨Nod样受体蛋3炎性体(nod-like receptor protein-3, NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)/白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)信号通路介导的高糖缺氧复氧诱导人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cells,HK-2)的损伤。方法 采用数字表法将人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为5组(n=5),即低糖组(NG组)、低糖缺氧复氧组(NHR组)、高糖组(HG组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖缺氧复氧+NLRP3抑制剂BAY11-7082(5μmol/L)组(HHR-BAY组)。采用高糖(30mmol/L)刺激72h建立高糖模型,缺氧4h复氧2h建立缺氧复氧模型。CCK-8检测细胞存活率;酶标仪测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)含量;ELISA法检测IL-1β含量和caspase-1活性;免疫印迹法和免疫荧光法检测细胞NLRP3蛋白的表达。结果 与NG组比较,NHR组与HG组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0.05);分别与HG组和NHR组比较,HHR组ROS和IL-1β含量,caspase-1活性,NLRP3表达升高,细胞存活率,SOD活性降低(P均<0.05);而NLRP3抑制剂BAY11-7082预处理可显著抑制细胞损伤和氧化应激水平,下调NLRP3蛋白水平,caspase-1活性和IL-1β含量(P均<0.05)。结论 NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路参与了高糖缺氧复氧诱导的HK-2细胞损伤过程。     

蛋白激酶Cβ2在高糖与缺氧/复氧诱导的心肌细胞焦亡中的作用

目的:探讨蛋白激酶Cβ2 (protein kinase Cβ2, PKCβ2）在高糖与缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, HR）诱导的心肌细胞焦亡中的作用。方法:将培养的H9c2心肌细胞按随机数字表法分为5组（每组6孔）：低糖组（LG组）、低糖缺氧/复氧组（LG+HR组）、高糖组（HG组）、高糖...     

睡眠剥夺对大鼠凝血功能及血红蛋白的影响

目的:探讨睡眠剥夺(SD)对大鼠凝血功能及血红蛋白的影响。方法:将32只健康成年雄性SD大鼠(220±10)g采用随机数字表法分为正常笼饲养组(CN组)、大平台饲养组(TC组)、睡眠剥夺组(SD组)及睡眠剥夺恢复组(SR组),每组各8只。采用改良多平台睡眠剥夺法(MMPM)建立睡眠剥夺模型,连续剥夺5d,颈内静脉采血,置于抗凝管内,采用全自动血液分析仪进行血细胞计数,包括白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)、血红蛋白(Hb)含量及血小板(PLT)计数;采用自动分析仪检测止血参数,包括活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(FIB)。结果:与CN组和TC组比较,SD组大鼠毛色暗淡,易激惹,体重减轻(P0.05);WBC明显增加(P0.05),RBC及Hb含量明显减少(P0.05),PLT差异无统计学意义(P0.05);APTT、PT及TT值明显延长(P0.05),FIB值明显降低(P0.05)。与SD组比较,SR组大鼠WBC明显下降(P0.05),RBC及Hb含量明显增加(P0.05),PLT及体重差异无统计学意义(P0.05);APTT、PT及TT值明显缩短(P0.05),FIB值明显升高(P0.05)。SR组与CN组及TC组比较,体重明显减轻(P0.05),其余值差异无统计学意义(P0.05)。CN组与TC组比较,体重、WBC、RBC、Hb、PLT、APTT、PT、TT及FIB值均差异无统计学意义(均P0.05)。结论:持续长时间SD可能导致大鼠凝血功能障碍及贫血倾向,睡眠剥夺后可通过延长合适的睡眠时间来改善机体的凝血功能障碍及贫血倾向。     

TXNIP在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在人肾小管上皮细胞HK-2高糖缺氧复氧损伤中的作用。方法将HK-2细胞随机分为三组(n=6):高糖组(HG组),高糖缺氧复氧组(HHR组),高糖缺氧复氧+TXNIP干扰组(HHR-siRNA组)。采用高糖刺激72 h,缺氧4 h复氧2 h的方法建立高糖缺氧复氧模型。CCK-8和乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞活性,活性氧(ROS)检测细胞氧化应激水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和Caspase-1,Western blot法检测TXNIP和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白-3(NLRP3)的表达。结果与HG组相比较,HHR组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3升高,而CCK-8降低,差异有统计学意义(P0.05);与HHR组相比较,HHR-si RNA组LDH、ROS、IL-1β、Caspase-1、凋亡指数、TXNIP、NLRP3降低,而CCK-8升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TXNIP在HK-2细胞高糖缺氧复氧损伤中发挥了重要作用,抑制TXNIP可以降低高糖缺氧复氧损伤。     

胃饥饿素在糖尿病神经病理性疼痛中的作用及对大鼠脊髓P2X4/NLRP3表达的影响

目的:探讨胃饥饿素(Ghrelin)在糖尿病神经病理性疼痛中的作用及对大鼠脊髓嘌呤受体2X-4/NOD样受体-3(P2X4/NLRP3)表达的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为5组,每组8只:正常+Ghrelin组(NG组)、正常+[D-Lys3]-GHRP-6组(ND组)、糖尿病组(D组)、糖尿病+Ghrelin组(DG组)、糖尿病+Ghrelin+[D-Lys3]-GHRP-6组(DGD组)。[D-Lys3]-GHRP-6为Ghrelin特异性抑制剂。NG组腹腔注射Ghrelin 200μg/kg 6周,ND组腹腔注射[D-Lys3]-GHRP-6 50 mg/kg 6周。腹腔注射1%链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液60 mg/kg制备大鼠糖尿病模型,造模成功后3 d,腹腔注射Ghrelin 200μg/kg 6周,DGD组腹腔注射Ghrelin 200μg/kg+[D-Lys3]-GHRP-6 50 mg/kg 6周。分别于第2,4,6周测定大鼠机械痛阈(MWT)及坐骨神经导速率(MNCV);6周后处死大鼠,尼氏染色观察脊髓病理学变化,电镜观察腓肠神经病理学改变,Western blot法检测脊髓Ghrelin、P2X4、NLRP3和IL-1β表达水平。结果:与NG组比较,ND组脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜显示细胞结构正常,MWT和MNCV无明显变化,P2X4、NLRP3、IL-1β表达水平差异无统计学意义(P>0.05);D组脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜显示细胞部分受损,MWT、MNCV显著降低;Ghrelin表达降低,P2X4、NLRP3、IL-1β显著升高(P<0.05)。与D组比较,DG组中脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜显示细胞结构相对正常,MWT和MNCV明显升高,Ghrelin表达升高,P2X4、NLRP3、IL-1β表达降低(P<0.05)。与DG组比较,DGD组中脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜细胞结构破坏严重,MWT和MNCV明显降低,Ghrelin表达降低,P2X4、NLRP3、IL-1β表达升高(P<0.05)。结论:Ghrelin可能通过P2X4/NLRP3通路参与了糖尿病神经病理性疼痛的调控。