定量PCR分析仪的临床应用前景——AG-9900 Robo Master全自动荧光定量PCR分析仪

荧光探针杂交定量PCR技术和全自动定量PCR分析仪的出现,使PCR扩增和产物分析整个过程完全在同一个封闭系统下完成,并在分析软件支持下实现对PCR扩增产物进行实时动态监测和自动得出定量结果。彻底解决了PCR技术中扩增产物污染和不能定量的问题,为PCR技术作为常规检测技术应用于临床开辟了广阔的前景。     

D-二聚体在各类肝病中的应用价值

[目的]通过D-二聚体（DD）检测与临床病症的紧密结合，对肝病患者的诊断治疗、病情监测、预后以及并发DIC进行研究和分析。[方法]对临床确诊的急性肝炎组（AH）、慢性肝炎组（CH）、肝硬化代偿组（LC-1）、肝硬化失代偿组（LC-2）、重型肝炎组、肝癌未转移组（CA-1）、肝癌转移组（CA-2）和健康对照组（N）进行DD水平及其它相关指标的测定和分析。[结果]1．与N、AH、CH比较，DD水平在LC-2、CSH、CA-2均P〈0．001；CA-2与所有组比较均P〈0．001。2．DD在CSH和CA-2的异常率最高，均为100％，而在LC-2、CA-1、LC-1的异常率依次为95％、71％和58％。3．DD在严重肝病出血和无出血组之间，以及在严重肝病脑病组和无脑病组之间均具有极显著性差异（P〈0．001）。4．DD在肝硬化腹水和无腹水组之间具有极显著性差异（P〈0．001）；在肝硬化静脉曲张和无静脉曲张组之间具有极显著性差异（P〈0．005）。5．DD在严重肝病死亡组和有效组之间具有极显著性差异（P〈0．001）。6．肝病并发DIC患者DD水平100％升高，其中大部分呈现10倍以上增高。[结论]1．DD水平是随着肝病的严重程度而递增，DD定量可以作为肝病病情严重程度的诊断指标之一。2．DD不仅对转移期肝癌具有很好的诊断价值，而且对未转移肝癌和转移肝癌具有一定的鉴别价值。3．DD对肝病患者的出血、肝性脑病、腹水及静脉曲张均具有一定的临床价值。4．DD水平对肝病的预后具有重要的评估价值。5．高DD水平对肝病并发DIC具有重要的诊断意义。     

临床实验室仪器间比对实验探讨

目的 按照ISO15189要求对两台强生VITROS 3600化学发光分析仪上的相同项目进行比对试验,以评估检测结果的一致性.方法 分别使用两台仪器对anti-HCV的精密度,准确度进行验证试验,并对临床收集的Anti-HCV阴性10份、阳性10份和弱阳性20份血清样本共40份进行比对试验,检测结果行统计学分析.结果 两台仪器阴性和阳性质控品批内精密度变异系数分别为5％、4％、7.14％和7.23％,批间精密度分别为9.47％、7.7％和8.04％、7.6％,均小于ISO15189要求的CV(15％),两仪器准确度为100％,质控品检测结果差异无统计学意义(P＜0.05).临床样本检测结果相关性分析R2 =0.9984,具有良好的一致性.结论 两台强生VITROS 3600化学发光分析仪检测结果,一致性良好,具有可比性.     

气单胞菌不同种的流行及耐药性

目的：加强对气单胞菌感染的认识，我们分析了141株气单胞菌不同种感染的分布特点、对抗菌药物的耐药率及不同种耐药率的比较．为临床估计病情及选择抗菌药物提供客观依据。方法：有感染的临床表现者标本常规进行培养、分离和鉴定，同时用纸片扩散法及琼脂稀释法测定了气单胞菌对常用抗菌药物的敏感性。结果：气单胞菌的构成占肠道外分离菌的6．9％．占肠道感染菌的3．2％。气单胞菌主要来源于血液，其次为粪便和腹水。141株气单胞菌，包括嗜水气单胞菌54株(38．3％)、温和气单胞菌53株(37．6％)、豚鼠气单胞菌19株(13．5％)及简氏气单胞菌和杀鲑气单胞菌等其他气单胞菌15株(10．6)。主要发生夏秋季．71．6％产生β-溶血素。气单胞菌对抗菌药物的耐药，以氨苄西林最严重为78．3％，其次为头孢唑林48．0％、复方磺胺甲噁唑28．8％和头孢美唑30．5％，对亚胺培南及第三代头孢菌素也有一定程度的耐药。肠道感染的气单胞菌虽然均为院外感染，但除对氯霉素、磷霉素及左氧氟沙星外的其他抗菌药的耐药率均在10％以上。气单胞菌3个种的耐药率比较，无明显差别。结论：气单胞菌感染以嗜水气单胞菌及温和气单胞菌为主．易发生于夏秋季节，致病性强．对抗生素的耐药较普遍，气单胞菌3个种的耐药率比较多无明显差别。临床医师应根据药敏试验结果选用抗菌药物。     

90例小儿HCV感染患者血清型与基因型分布特点初探

[目的]了解小儿HCV感染患者血清型与基因型特点，为临床诊治提供有用实验室数据。[方法]对90例抗-HCV总抗体和HCV-RNA检测为阳性、临床明确诊断为HCV感染患者进行血清样本的基因型和血清型检测。患者年龄在1．5-13岁之问，血清型检测使用美国雅培Murex HCV Serotyping 1-6 Assay ELISA试剂盒，基因分型用自建引物特异性HCV基因分型法，分型标准采用Simmons法。[结果]90例HCV患者血清分出基因型的90例，检出率100％，其中1a型1例（0．9％），1b型59例（65．5％），1b／2a型29例（32．2％），2a型1例（0．9％）。分出血清型的49例，检出率为54．4％，1型40例（44．4％），2型8例（9％），1＋4混合型1例（0．9％）。未分出血清型的15例（16．6％），无反应的29例（32．2％）。基因型与血清型结果进行比较，同时可分出基因型与血清型的有49例，总检出率54．4％。[结论]HCV患儿血清基因型主要以1b型为主，血清型主要以1型为主。未分出血清型的样本建议进行HCV基因序列分析。     

HBV感染慢性肝病患者血清GP73浓度对肝纤维化程度的诊断意义

目的 探讨血清GP73浓度与慢性HBV肝病患者肝纤维化程度之间的关系,以评估GP73在慢性HBV患者中的临床诊断价值.方法 选取慢性HBV感染者761名,分别进行FibroScan检测和血清GP73测试.结果 血清GP73浓度与肝硬度相关（r=0.601）,ROC曲线下面积为0.76.GP73用于诊断显著肝纤维化（≥F2）的敏感性和特异性分别为62.81％和80.05％（cut off值：76.6ng/ml）.结论 GP73可能是一种诊断慢性HBV感染者显著肝纤维化的新标志物.     

6例布氏杆菌病的诊治

目的加强对布氏杆菌临床及实验特征的认识，以利及时诊断与治疗。方法分析我院诊治的布氏杆菌病6例。患者标本进行常规血液培养，鉴定，药敏及血清凝集试验。结果6例患者均为疫区的农民，临床表现有发热、呈波状热、畏寒、大汗、关节痛。6例中有4例有肝炎及肝炎肝硬化病史，脾大，白细胞均偏低，血红蛋白3例，血小板3例均低于正常值。血沉检测5例中3例高于正常，转氨酶5例高于正常。细菌呈小球杆状或短杆状，单个、成对或短链排列，革兰染色不宜着色，延长时间呈革兰染色阴性，生长缓慢。培养阳性的5株布氏杆菌对四环素、米诺环素、复方磺胺甲口恶唑、左氧氟沙星等均敏感。用广谱抗生素无效，细胞内抗菌药联合应用效果明显。结论城市医院临床及检验医师应高度重视布氏杆菌病，早期诊断，正确治疗。     

肝功能实验室检查(二)

三、反映肝脏胆排泄、分泌及解毒功能的代谢指标肝脏是人体重要的排泄器官之一,无论是体内代谢物如胆红素和胆汁酸,或是外源性药物,它们都是首先由肝细胞摄取,然后在肝细胞内转化或结合,最后经肝细胞微细胆管转运系统排泄至胆管,或经肝细胞分泌至血中。肝实质受损时,肝脏排泄分泌功能发生相应变化,影响相应物质的排泄。检测这些物质在血液中的水平,有助于了解肝脏     

乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析

目的将乙型脑炎病毒NS1蛋白基因克隆至pET28-a( )表达载体,构建原核表达载体pET-NS1,并使该基因在E.coli中高效表达,为进一步研制乙脑早期诊断试剂奠定基础。方法根据GenBank中提供的乙型脑炎病毒SA14-14-2株全基因序列设计引物,通过反转录及巢式PCR方法扩增目的片段,测序后连接pET28-a( )载体,构建重组表达载体pET-NS1,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增出了1300bp的基因片段,与预期大小一致,测序后经Blast验证与已发表乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1蛋白基因序列同源性为100%,成功克隆至表达载体pET28-a( )并获得高效表达,表达产物分子量约为45kD,Western blot分析表明该表达产物具有良好抗原性。结论该表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性为乙脑的诊断试剂开发提供了依据。     

HBV血清标志物实验室检测的临床意义

乙型病毒性肝炎的病原体是HBV.自20世纪60年代中期发现HBsAg以来,人们对HBV的研究有了突破性进展.