单侧液压脑损伤对大鼠双侧海马GFAP表达和CA1区突触传递的影响

目的研究单侧液压脑损伤(FPI)对大鼠双侧海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达和CA1区突触传递的影响。方法建立大鼠单侧液压脑损伤模型,脑标本分为对照组(包括正常对照和假手术对照)、FPI损伤同侧组和FPI损伤对侧组。免疫组化法检测海马水平切片GFAP表达,对海马CA1区锥体神经元进行细胞内记录。结果FPI大鼠双侧海马齿状回门区和CA1区GFAP表达均比对照组明显增强。FPI损伤同侧组兴奋性输入-输出关系曲线的斜率比其他两组显著增大(P<0.05);FPI损伤同侧组和对侧组双脉冲易化(PPF)比值和抑制性突触后电位(IPSP)幅值均比对照组显著减小(P<0.05);FPI损伤同侧组和对侧组双脉冲抑制(PPD)比值均比对照组显著增大(P<0.05)。结论大鼠单侧液压脑损伤对双侧海马均可产生影响,导致双侧海马CA1区兴奋性突触传递增强,抑制性突触传递减弱。     

不同促细胞分裂因子对人神经干细胞定向分化的影响

目的观察不同促细胞分裂因子对人神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法对人NSCs用无血清DMEM培养基行原代培养的同时,分别加入表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、维甲酸(RA)等因子,观察其对NSCs定向分化的作用。结果EGF培养的NSCs,克隆球形成慢且较松散,经血清诱导分化后,主要为星形胶质细胞,仅有少数神经元。而bFGF培养的NSCs则生长良好。在加血清诱导分化后,不同浓度bFGF培养的NSCs分化的细胞不同。bFGF与EGF共同培养的NSCs,其生长及神经球形成良好。在加血清诱导分化后,分化的神经细胞比例更接近脑内神经细胞的组分。NGF对神经球的形成无明显影响,但可促使其向神经元分化。RA使神经克隆球形成,可使NSCs直接分化为神经元细胞的比例明显增加。结论不同促细胞分裂因子对人NSCs的增殖及定向分化均有一定影响。     

针对MAGE-1基因RNAi在恶性胶质瘤SHG-44细胞中的作用研究

目的构建抑制黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)的siRNA表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建RNA干涉(RNAi)质粒载体。利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后SHG-44细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干扰效果。结果重组构建的pSUPER-MAGE-1载体经双酶切电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成功插入到预计位点,并且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的SHG-44多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干涉作用。结论成功构建了针对MAGE-1基因的siRNA表达载体,抑制SHG-44细胞中的MAGE-1分子的表达。     

RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

目的：通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸（siRNA）表达载体，鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞中对MAGE．1基因表达的干涉作用。方法：化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE—1基因寡核苷酸链，克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上，重组构建核糖核酸干扰（RNAi）质粒载体。利用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜，检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达，以了解siRNA的干涉效果。结果：重组构建的pSUPER—MAGE—1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析，表明寡核苷酸链成功地插入至预计位点，且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达经RT—PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测，2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论：载体的成功构建并能对U87细胞中的MAGE—1分子进行RNAi，为进一步研究MAGE—1在肿瘤中的作用，分析基因功能，展开肿瘤基因治疗奠定了基础。     

补阳还五汤临证新用三则

补阳还五汤 ,出自清·王清任《医林改错》 ,其具有益气活血、化瘀通络的功效。笔者应用此方治疗多种疑难杂症疗效显著。现将临床治验举例如下 :1　短暂性脑缺血发作〔例一〕李某 ,女 ,58岁。头晕半年 ,加重伴发作性半身麻木 10天 ,于 2 0 0 2年 2月 16日就诊。自述 10天前午睡起床后突然发作眩晕、恶心欲吐 ,伴右半身麻木不适 ,约半小时后自行缓解 ,此后间断发作。查体 :BP14 0 / 95mmHg ,心肺未见明显异常 ,舌质暗淡 ,苔薄白 ,脉沉细缓。作脑彩超示 :两侧椎动脉、基底动脉、两侧大脑前动脉供血不足。本病属中医学“中风先兆”之范畴 ,证…     

神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型

目的：建立一个方便、有效的动物实验模型以研究神经干细胞移植治疗脑缺血的可行性。方法：实验于2004—09／2005—10在第四军医大学全军神经外科研究所完成。健康家猫12只，随机分为缺血再灌注组（10只）和假手术组（2只），参照四血管阻塞法制作猫全脑缺血模型。先用显微手术的方法分离家猫双侧椎动脉并电凝，永久性闭塞双侧椎动脉。24h后再分离双侧颈总动脉，用动脉夹阻断血流。用含表皮生长因子的无血清培养基原代分离培养小鼠神经干细胞。将原代培养的小鼠神经干细胞移植到全脑缺血再灌注损伤模型的一侧大脑皮层中，假手术组猫大脑皮层注射同量的磷酸盐缓冲溶液；用免疫荧光技术检测移植1个月后的小鼠神经干细胞。结果：实验家猫12只，进入结果分析9只。（1）缺血再灌注组10只家猫经缺血再灌注损伤后死亡2只，1只夹闭血管后始终未出现静息脑电波，模型制作成功7只，成功率70％。假手术组家猫全部存活。缺血再灌注损伤后的家猫均出现不同程度的肢体瘫痪及平衡失调表现。饲养1周后，肢体瘫痪及平衡失调表现均逐渐有所改善。②原代培养细胞在无血清培养基中生长2—3d后，大部分细胞死亡，只有少数以单细胞形式悬浮生长。部分细胞分裂形成几个到几十个细胞的细胞团。到7—10d时可生长成有数十个到数百个细胞的细胞团，也呈悬浮生长。这些悬浮生长的细胞在含血清培养基中能够贴壁生长并部份分化成神经微丝抗原阳性的神经元及胶质纤维酸性蛋白抗原阳性的神经胶质细胞。（3）细胞移植后，家猫症状有所改善，但移植侧与对侧肢体瘫痪及平衡失调表现改善无明显差别。④免疫荧光方法检测小鼠神经干细胞移植到猫前脑后1个月仍有大量存活，部份细胞分化为神经元及神经胶质细胞，部份细胞向猫脑组织中迁移。迁移深度0．1—0．2mm。呈弥散性分布。沿针道侧壁贴附的细胞呈圆形，迁移到脑组织深部的细胞大多呈梭形。海马及对侧脑皮层等远隔部位未检测到阳性细胞存在。不同个体间未发现明显差异。⑤缺血再灌注组脑皮层及海马CA1区苏木精-伊红染色示典型的迟发性神经元坏死。结论：小鼠神经干细胞在猫全脑缺血模型中能够存活、迁移并分化；成功建立一个神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型。     

磁共振胰胆管成像在婴幼儿胆管疾患中的应用

目的:探讨磁共振胰胆管成像(MRCP)在婴幼儿胆管疾患的诊断价值.方法:搜集本院2004年4月～2005年9月行MRCP检查并经手术病理证实的47例婴幼儿胆管疾患的病例进行回顾性分析.结果:胆管闭锁22例;胆汁黏稠综合征1例;先天性胆管扩张症24例,其中合并胰胆管合流、胆石症、胆泥沉积症各1例.MRCP能直接显示胆管树及胰管的形态,明确胆管闭锁、扩张、梗阻的部位、范围,定性诊断率达95.6%.结论:MRCP不用对比剂,无损伤,在婴幼儿胆管疾患的诊断中敏感性及定性诊断率高,是首选诊断方法.     

小鼠神经干细胞对胶质瘤趋向性实验研究

目的 探讨小鼠神经干细胞（NSCs）在体外和体内对胶质瘤细胞的趋向性。方法 将原代培养6d的小鼠NSCs悬液离心、收集备用。制备C6胶质瘤细胞、3T3成纤维细胞爬片，随后与NSCs共同培养3d。用荧光染料Hoeehst33342标记NSCs，借助立体定向技术于胶质瘤动物模型内接种NSCs，观察NSCs在胶质瘤动物模型脑内的分布情况。结果 小鼠NSCs对C6细胞有明显的趋向性。体内实验见肿瘤组织内满布标记的NSCs。结论 小鼠NSCs无论在体外或体内对胶质瘤细胞均有一定的趋向性。     

高+Gz负荷下犬心血管系统反应特性

目的探讨犬＋Ｇｚ负荷中、负荷后心电图、动脉血压反应特性。方法将压力传感器导管置于６只麻醉犬的升主动脉和髂总动脉,以测量犬暴露于＋１Ｇｚ、＋３Ｇｚ、＋５Ｇｚ、＋７Ｇｚ的血压,并采用Ａ导联持续监测心电图。结果（１）Ｐ波高度受＋Ｇｚ负荷的影响,负荷前、后１ｍｉｎ内差异显著（＋Ｇｚ负荷前Ｐ波２．３±０．２ｍＶ,＋３Ｇｚ后４．５±０．５ｍＶ,＋５Ｇｚ后４．８±０．３ｍＶ,＋７Ｇｚ后５．３±０．７ｍＶＰ＜０．０５）。（２）高＋Ｇｚ负荷时,髂总动脉血压表现为平均动脉压增高,脉压减低。（３）＋Ｇｚ终止后,升主动脉血压（ＡＰ）出现一过性增高（＋７Ｇｚ前ＡＰ１７．２９±５．５９／１１．３１±３．８６ｋＰａ,＋７Ｇｚ后第３０ｓ２７．５３±６．１２／２０．６２±１．８６ｋＰａ,Ｐ＜０．０１）。结论Ｐ波高度的变化反映心房移位,这可能是心律失常的原因。在高＋Ｇｚ负荷条件下,心血管功能不全,组织灌注压是一个重要的生理参数。＋Ｇｚ负荷终止后即刻,动脉血压极度增高,为血管性衰竭的表现     

藻酸双脂钠治疗肺心病难治性心衰89例临床观察

目的：观察藻酸双酯钠(PSS)对肺心病难治性心衰的治疗作用。方法：选择89例经常规治疗无效或效果不佳的肺心病心衰病人给予PSS0．1-0．15g入液静滴10—15d。结果：PSS可降低血黏度、肺动脉压，减轻心脏负荷、改善心衰。结论：PSS为治疗肺心病难治性心衰的可行药物之一。