云南省普洱市思茅区大面积野鼠自毙疫情实验室检测结果与分析

目的 调查引起云南省普洱市思茅区大面积野鼠自毙疫情的病原体,以便为采取相应措施提供科学依据。方法 通过现场流行病学调查,采集119只自毙野鼠样本,解剖取脏器进行鼠疫耶尔森菌病原体分离、噬菌体裂解实验、F1抗原、caf1基因等病原学、免疫学及分子生物学检测,以排除鼠疫。同时,脏器样本接种绵羊血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、沙氏琼脂培养基等营养培养基和选择性培养基,分离培养细菌、真菌类病原体;选取10只组织腐败较轻的自毙鼠,按肺组织、脑组织、腹腔脏器组织分为3份样本后,研磨、离心,再以0.22μm滤膜过滤,收集离心上清液、滤膜滤出液和滤膜截留残渣共9份样本,腹腔接种雄性、体质量30~40g昆明小鼠,每组2只,每只0.5ml。另接种0.5ml Hank’s液2只鼠作对照。共接种昆明小鼠20只。死亡小鼠解剖观察病理变化,取脏器组织接种上述培养基进行细菌分离培养。结果 鼠疫耶尔森菌病原学、免疫学和分子生物学检测均为阴性;自毙野鼠脏器镜检、分离培养及接种实验动物均检出G- 短小杆菌,经梅里埃VITEK 2GN、GP卡、16S rRNA扩增鉴定为多杀巴斯德菌 (Pasteurella multocida,Pm) ,概率为99%;分离到的G+粗大杆菌为腊样芽孢杆菌,概率为99%。结论 多杀巴斯德菌可能是这次发生野鼠大面积死亡的病原菌。该病原体的生物学特性及危害值得进一步关注。     

长期使用敌鼠钠盐地区杀灭黄胸鼠的效果评价

目的评价长期使用敌鼠钠盐的地区敌鼠钠盐对黄胸鼠的毒杀效果。方法现场使用不同浓度毒饵进行7d饱和投药。结果0.10%和0.16%稻谷毒饵的盗食率分别为35.99%和26.21%,灭效分别为79.44%和92.70%。0.10%小麦毒饵的盗食率和灭效分别为38.36%和85.92%。2种稻谷毒饵的盗食率差异有显著性(χ2=12.97,P<0.01),灭效差异无显著性(χ2=0.32,P>0.05)。相同浓度的敌鼠钠盐稻谷和小麦毒饵之间盗食率和灭效差异均无显著性(χ2=0.64,P>0.05;χ2=0.03,P>0.05)。结论该地使用敌鼠钠盐防制黄胸鼠仍有良好效果,不宜盲目提高药物的使用浓度,但灭鼠药物的轮换使用应予以重视。     

三种有机磷杀虫剂对印鼠客蚤的灭效研究

目的 实验室测试乐斯本、辛硫磷、敌敌畏3种杀虫剂对印鼠客蚤的杀灭效果。方法 瓶膜法。结果 （1）3种杀虫剂半数致死浓度LG50乐为5．9615mg／L，LC50半为6．7873mg／L，LC50敌为7．8343mg／L。（2）敌敌畏浓度在100、200mg／L时的KT50分别为9．0和4．2min，24h死亡率均为100％；辛硫磷在这2个浓度的KT50分别为44．5和23．6min，24h死亡率分别为98．7％和9718％；乐斯本在这2个浓度的24h死亡率分别为98．9％和100％。（3）浓度为100、200mg／L时，敌敌畏18min的击倒率分别为94．5％和100％，辛硫磷17min的击倒率分别为24．4％和41．1％。（4）残效：在浓度为50、100、200mg／L时，辛硫磷30d残效30min无击倒，24h死亡率为0；敌敌畏30d残效24h死亡率分别为0、16.7％、31．0％，效果较差。结论 3种药物在同一浓度下的速杀作用效果敌敌畏〉辛硫磷〉乐斯本，可将速杀效果好的与残效作用好的杀虫剂混配用于灭蚤。     

鼠疫耶尔森菌纤维蛋白溶解酶原激活因子蛋白及其特异性片段的原核表达

目的 重组表达鼠疫耶尔森菌纤维蛋白溶解酶原激活因子(Plasminogen activator,Pla)蛋白及其特异性片段并检测其免疫反应性.方法 以鼠疫EV76株为模板,PCR扩增pla、pla-c基因,并与质粒原核表达载体(prokaryotic expression vector,pET)32a(+)连接,将pET32a(+)-pla、pET32a(+)-pla-c分别转化E.coli BL21(DE3)诱导表达;产物经镍离子金属螯合亲和层析纯化,免疫印迹(Western blot)法鉴定其免疫反应性.结果 所表达的Pla蛋白相对分子质量(Mr)为52.8×103,以包涵体形式存在;Pla-c蛋白Mr为24.0×103,以可溶形式存在;这两个蛋白质均可与鼠疫免疫血清产生特异结合反应.结论 所表达的鼠疫菌Pla及其特异性片段具有免疫反应性,为辅助诊断鼠疫提供了选择.     

鼠疫菌质粒上标识基因的筛选

目的 筛选鼠疫菌质粒上保守、稳定、特异的DNA标识序列.方法 选择32条源于鼠疫菌质粒上DNA序列,采用常规PCR技术,对云南家、野鼠两型共40株鼠疫菌、47株非鼠疫菌、鼠疫菌疫苗株EV76(阳性对照),进行了特异性验证试验和稳定性鉴定试验.结果 筛选出4对相对保守、稳定、特异的DNA标识序列:YPMT1.05c,YPMT1.03c,YPMT1.42及YPMT1.04c.结论 所筛选的4对鼠疫菌DNA标识序列,可用于鼠疫快速诊断.     

多飞剋对印鼠客蚤杀灭效果试验研究

目的:观察杀虫剂多飞剋对印鼠客蚤实验室的杀灭效果。方法:用甁膜法。结果:(1)半数致死浓度LC50:0.00023942%(0.000027331%---0.00020973%);(2)随着药物浓度的逐渐增加,KT50呈现有规律的缩短,24小时死亡率也逐渐增高;(3)当药物浓度为0.00125%、0.0025%、0.005%、0.01%时,KT50在7分钟以内,9分钟内击倒均大于87.0%,24小时死亡率均大于87.0%,24小时死亡率均大于94.0%;(4)残效:0.0025%、0.005%、0.01%三种浓度210天内残效实验30分钟内的击倒率均为100.0%,120天残效的24小时死亡率均大于90.0%;结论:多飞剋10%乳油对印鼠客蚤杀灭效果较好,具有高效、速杀、残效较好等优点,可用于大面积来蚤。     

功夫对印鼠客蚤杀灭效果试验研究

目的 :观察杀虫剂功夫对印鼠客蚤实验室的杀灭效果。方法 :用瓶膜法。结果 :(1)半数致死浓度LC50 :0 .0 0 16 75 14 % (0 .0 0 180 113%～ 0 .0 0 15 5 798% ) ;(2 )随着药物浓度的逐渐增加 ,KT50 呈现有规律的缩短 ,2 4小时死亡率也逐渐增高 :(3)当药物浓度为 0 .0 0 5 %、0 .0 1%时 ,KT50 在 7分钟以内 ,16分钟内击倒率均大于 80 .0 % ,2 4小时死亡率均大于 5 5 .0 % ;(4)残效 :0 .0 0 2 5 %、0 .0 0 5 %、0 .0 1%三种浓度 15 0天内残效实验 30分钟内的击倒率均为 10 0 .0 % ,2 4小时死亡率均大于 6 4 .0 % :结论 :功夫 2 .5 %乳油对印鼠客蚤杀灭效果较好 ,具有高效、速杀、残效较好、对人畜安全等优点 ,可用于大面积灭蚤。     

云南省鼠疫防治联防工作成效显著

云南家鼠鼠疫流行十分猖獗,为控制其流行态势,从2001 年起在全省开展鼠疫防治联防工作。4 年来在各级政府的领导及各有关部门的共同努力下,通过有组织地开展大规模的灭鼠、灭蚤及群众性爱国卫生运动等工作。使人间鼠疫病例数从开展联防前的122例/年下降为0例;鼠间疫点从开展联防前的140 个/年下降为13个;取得了显著的社会和经济效益。     

鼠疫血清抗体谱的研究进展

目的 利用蛋白芯片技术对鼠疫血清进行检测,分析其血清抗体谱.方法 用制备好的蛋白芯片和未知的血清进行杂交后荧光检测并数据分析.结果 发现具有抗原性,免疫原性的相关蛋白.结论 通过分析血清抗体谱而得到新的具有免疫原性的蛋白作为潜在的候选疫苗组;得到新的可以用于鼠疫菌诊断的抗原,作为目前血清学检测的辅助诊断抗原;通过对系列血清抗体变化趋势以及不同种属间抗体谱的区别的分析,加深对鼠疫菌致病机制的认识.     

鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应

目的 克隆表达鼠疫菌caf1基因上的特异性片段并检测.方法 分别选取F1上C端(caf1-C)及N端(caf1-N)两段B细胞表位进行克隆表达;PCR扩增目的基因,并与表达质粒pET32a(+)进行连接,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)并诱导表达;表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,并以Western-blot法检测其抗原与抗体反应.结果 分别诱导表达出大小为26000的Caf1-C和25000的Caf1-N两个片段,2个重组蛋白均以可溶形式存在,并与鼠疫免疫血清有良好的反应.结论 克隆表达出具有抗原与抗体反应的鼠疫菌F1抗原上的两段B细胞表位,为鉴定是否是F1位点交叉奠定了基础.