腹腔镜肝切除术中剔肝法联合滚凝法临床应用价值研究

目的 探讨腹腔镜肝切除术中剔肝法联合滚凝法的技术要点、有效性及可行性。方法 采用倾向评分匹配及回顾性病例对照研究方法,对2015年5月至2019年12月青岛大学附属医院肝胆胰外科同一治疗组收治的296例行腹腔镜肝切除术病人的临床资料进行分析,根据肝实质离断及肝断面止血方法不同,分为电凝组（133例,采用超声刀传统钳夹电凝）与剔肝组（163例,采用剔肝法联合滚凝法）,对比分析两组病人一般临床病理资料、术中及术后情况。结果 倾向评分匹配后共184例病人配对成功,各92例。两组病例在手术时间、中转开腹、术中输血、术后出血发生率、术后胆瘘发生率、排气时间方面差异无统计学意义（P＞0.05）,而在术中出血、术后肝周积液发生率、术后住院时间方面差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 剔肝法联合滚凝法为腹腔镜肝切除术提供了一种非常可靠实用的肝实质离断技术,能有效减少术中出血及术后肝周积液的发生,缩短术后住院时间。     

229例术后腹腔感染的分析

目的：探讨术后腹腔感染发生规律,提高对该类疾病的诊疗水平。方法：回顾性分析我院普通外科2013-01-2013-11术后并发腹腔感染和细菌培养阳性的229病例资料。结果：1229例患者检出共267株细菌;革兰氏阴性菌共180株（67.4%）,革兰氏阳性菌共75株（28.1%）,真菌共12株（4.5%）;38例为两种细菌混合感染。2不同细菌感染原因：大肠埃希菌116株,以肝叶切除/胆囊切除/胆道探查术（31.0%）、结直肠肿瘤切除术（20.7%）最常见;肠球菌共48株中以胰腺手术（33.3%）、肝叶切除/胆囊切除/胆道探查术（31.3%）最常发生;肺炎克雷伯菌共25株中以肝叶切除/胆囊切除/胆道探查术（28.0%）、肠切除/肠道造口还纳术（21.4%）发生最多。结论：腹部术后腹腔感染以革兰氏阴性杆菌感染最常见,不同手术后感染细菌谱存在差异,临床应根据手术方式、细菌培养结果选择治疗方案。     

低表达的microRNA-145对c-Myc表达的影响

目的:探讨microRNA(miR)-145是否通过调控c-Myc参与肝癌行为的调控.方法:实时定量PCR检测肝组织及细胞系miR-145表达水平:检测不同肝组织c-Myc的mRNA和蛋白表达量:通过转染上调miR-145在HepG2细胞表达后,检测转染前后空白组、实验组、阴性对照组HepG2中c-Myc的mRNA和蛋...     

微小RNA-223及其标靶基因c-myc在肝癌发病中的作用

目的 探讨微小RNA-223(miR-223)对原癌基因c-myc的调控及其在肝癌发病中的作用.方法 通过实时定量聚合酶链反应和Western blot检测正常肝脏组织、癌旁组织、肝癌组织及肝癌HepG2细胞、胎肝L02细胞中miR-223和c-myc的mRNA和蛋白质表达水平.构建miR-223模拟物(mimics)上调肝癌细胞HepG2中miR-223表达后,实时定量聚合酶链反应和Western blot 检测HepG2细胞中c-myc表达水平的变化.分别用独立样本t检验和单因素方差分析进行两组及多组数据间的比较,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 miR-223在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.055±0.015、0.030±0.008和0.020±0.016,肝癌组织低于正常肝组织(t=-0.031,P＜0.05).miR-223在HepG2细胞中的表达较L02细胞下调(0.005±0.003比0.011±0.006,t=12.74,P＜0.01).c-myc mRNA在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.029±0.023、0.136±0.071和0.425±0.026,肝癌组织高于正常肝组织(t=-0.317,P＜0.05);c-myc蛋白在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.137±O.015、0.299±0.033和0.439±0.027,差异有统计学意义(F=103.35,P＜0.01).miR-223 mimics转染HepG2细胞后,c-myc蛋白在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0.423±0.041、0.116±0.015和0.432±0.034,转染组较其他两组明显降低(F=94.93,P＜0.05).结论 miR-223在肝癌组织中表达下调,丧失其对c-myc表达的抑制而导致c-myc异常高表达可能是肝癌发生的重要机制.

Abstract：

Objective To investigate the regulatory role of microRNA-223 (miR-223) on c-myc and its role in hepatocarcinogenesis.Method miR-223 and c-myc mRNA expressions in normal tissue,paraneoplastic tissue,liver cancer tissue and liver cancer cells were tested with microRNA microarray and quantitative real-time PCR (qRT-PCR).C-myc protein expression was detected by Western blot.MiR-223mimic was transfected into HepG2 cells and the expression changes of c-myc mRNA and protein were tested with qRT-PCR and Western blot respectively.Results MiR-223 was down-regulated by 61.53% and 30.77% respectively in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues as compared to normal liver tissues and the expression of miR-223 was also decreased in HepG2 cell as compared to fetal liver cells L02,whereas the expressions of c-myc mRNA and protein increased in paraneoplastic and HCC tissues compared with normal liver tissues.It prompts that the expressions of miR-223 and c-myc are negatively correlated.No obvious difference found among c-myc mRNA expressions after miR-223 mimics transfection.Conclusions The cmyc abnormal high-expression may play a dynamic role in hepatocarcinogenesis due to the miR-223 downregulation.     

不同方法提取肝细胞质膜蛋白效率的比较

目的 比较两种提取方法对肝细胞质膜蛋白提取效率的差异,以提高肝细胞质膜蛋白的提取效率.方法 取用手术切取的47例肝细胞癌和43例正常肝组织,分别利用试剂盒和改良法提取肝细胞质蛋白和膜蛋白;BCA法进行蛋白定量后,通过Western blot检测提取出的质蛋白和膜蛋白样品中Na+/K+-ATPase和GAPDH相对含量,比较膜蛋白提取特异性.结果 利用改良提取法(B组)对正常肝细胞和肝癌细胞质膜蛋白的提取量分别为(1367.30±486.37)mg/L和(1059.80±226.29)mg/L,均明显高于试剂盒提取量(345.58±117.89)mg/L和(486.24±154.96)mg/L,P＜0.05);改良提取法提取蛋白中反映质蛋白的指标GAPDH含量显著低于试剂盒提取法(P＜0.05).结论 通过改良提取方法可有效提高肝细胞膜蛋白提取的丰度和特异性.

Abstract：

Objective To compare two extraction methods in extracting membrane protein of liver cell for improving membrane protein extraction efficiency.Methods Resected tissue from 47 cases of hepatocellular carcinoma (HCC) and 43 cases of normal liver were used to extract protein with extraction kit(A) and improved extraction method(B) ,protein quantitation was evaluated with BCA method,Na+/K+ -ATPase and GAPDH were detected between cytoplasmic protein sample and membrane protein sample to display the mixing level between them which was also the extraction specific of membrane protein.Results Liver cell plasma membrane protein extracted in group B was significantly higher than in group A [normal liver:( 1367.30 ±486.37) mg/L vs (345.58 ± 117.89) mg/L,HCC:( 1059.80 ± 226.29 ) mg/L vs (486.24 ± 154.96) mg/L,P＜0.05 respectively).Content of GAPDH in membrane protein extracted by improved extraction method was significantly less than that extracted by extraction kit ( P＜0.05 ).Conclusion The abundance and specificity of hepatocellular membrane protein extracted with improved extraction method was higher than with extraction kit respectively,which may improve the efficiency of membrane protein research.     

区域胆管、肝动脉、门静脉联合阻断治疗肝内胆管良性疾病的初步应用

目的探讨区域胆管和供应血管联合阻断在难治性肝内胆管疾病治疗中的价值。方法2007年3月～2010年5月对17例右肝内胆管结石、7例肝内型先天性胆管囊肿开展区域胆管和供应血管阻断治疗。对肝内胆管结石行肝内胆管切开取石、胆管注入封闭胶和区域胆管、肝动脉、门静脉阻断;对肝内型胆管囊肿经肝门分离病变胆管开口注入封闭胶后行区域动脉、门静脉、胆管阻断。所有患者术后3d、1周、2周复查肝功能,术后2周、1月、6月、1年行肝脏B超或CT随访。结果所有病例无肝衰、大出血、胆漏、严重感染等严重围手术期并发症;术后2周行肝脏B超或CT检查示病灶明显缩小或消失;术后1月和6月复查肝脏CT示病灶完全消失,病灶所在肝脏萎缩消失,残余肝脏代偿增生。结论通过病变区域胆管、肝动脉、门静脉联合阻断治疗某些难治性区域性良性肝内胆管疾病,可以达到较彻底的治疗效果,且能有效降低对患者的创伤,减少围手术期严重并发症的发生,明显提高该类患者的手术安全性。     

MicroRNA-377和组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝细胞癌中的表达及两者的相关性

目的:探讨microRNA-377(miR-377)与组蛋白甲基转移酶SMYD3在肝癌中的表达规律及与肝癌的相关性.方法:利用实时定量PCR分别检测不同肝组织及肝细胞系中miR-377表达水平, 应用实时定量PCR和Western blot分别检测不同肝组织及肝细胞系中SMYD3 mRNA和蛋白水平的表达情况. 通过转染miR-377模拟物上调其在肝癌细胞株HepG2中表达后, 应用实时定量PCR、Western blot分别检测转染前后HepG2中SMYD3 mRNA和蛋白表达的变化.结果:MiR-377 mRNA在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显降低(0.331±0.059, 0.139±0.064 vs 0.874±0.178, 均P <0.05);在HepG2中的表达较L-02明显降低(0.145±0.021 vs 0.868±0.194, P <0.05).SMYD3 mRNA和蛋白质在人肝癌旁组织和肝癌组织中的表达较正常肝脏明显升高(mRNA: 3.836±0.137, 5.836±0.965 vs 1.235±0.332;蛋白: 0.381±0.020, 0.484±0.030 vs 0.252±0.015;均P <0.05). SMYD3 mRNA和蛋白质在肝癌细胞系HepG2中的表达较正常肝细胞系L-02明显升高(mRNA: 0.845±0.047vs 0.348±0.134;蛋白: 0.575±0.008 vs 0.259±0.007, 均P <0.05). 转染miRNA-377模拟物上调HepG2中miR-377表达后转染组SMYD3mRNA和蛋白表达较空白组和阴性对照组均明显下降(mRNA: 0.125±0.010 vs 0.857±0.163, 0.779±0.167;蛋白: 0.092±0.026 vs0.347±0.040, 0.383±0.054, 均P <0.05).结论:miRNA-377在肝癌中表达明显下调,其靶基因SMY D3表达上调;表达下调的miRNA-377丧失对SMYD3表达的抑制可能是肝癌发生的重要机制.     

微创与开放胰十二指肠切除术围手术期预后的初步比较

目的:比较腹腔镜与开放胰十二指肠切除术围手术期临床疗效。方法:回顾分析2015年7月至2018年7月为96例患者行胰十二指肠切除术的临床资料,根据手术方式将患者分为微创组与开放组。对比分析两组患者术前情况(年龄、性别、黄疸、BMI、CA19-9、淋巴结有无肿大、术前合并症)、术中情况(手术时间、出血量)、术后相关指标(首次排气时间、首次进食时间、住院时间、肺部感染、切口感染、胰瘘、胃瘫、术后出血、死亡等)。根据学习曲线进一步将微创组分为初期组与进步组,比较两亚组术中及术后相关指标。结果:微创组与开放组术前临床资料差异均无统计学意义(P0.05)。微创组手术时间长于开放组(P0.05),术中出血量、住院时间、术后死亡率、胃瘫发生率及Clavien-Dindo分级3/4级并发症评分两组差异无统计学意义(P0.05),微创组术后排气时间、进食时间及术后肺部感染、切口感染、胰瘘发生率优于开放组(P0.05),但术后出血发生率高于开放组(P0.05)。微创组两亚组中,进步组术中出血量少于初期组(P0.05)。结论:与开放胰十二指肠切除术相比,微创胰十二指肠切除术安全、可行,不仅可有效缩短胃肠道功能恢复时间,还能减少肺部、切口相关并发症,降低胰瘘发生率。但微创手术难度大,手术时间长,术后出血发生率高,对术者技术要求较高。在突破技术节点、跨越较长的学习曲线后,微创胰十二指肠切除术是较好的选择。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的通过联合检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）、甲胎蛋白（AFP）在原发性肝癌患者血清及组织中的表达情况,探讨对原发性肝癌的诊断价值。方法分别采用ELISA和免疫组织化学法检测57例肝癌、74例肝炎后肝硬化患者和47例正常血清和肝组织GPC3、AFP表达水平,根据不同临床病理指标进行分组比较。结果 （1）肝癌患者、肝炎后肝硬化及正常对照者血清中GPC3水平分别为（212.6±137.5）、（60.9±27.8）、（39.5±18.7）ng/ml;肝癌患者血清GPC3浓度显著高于正常及肝炎后肝硬化患者（t=4.503,P〈0.05;t=6.045,P〈0.05）;血清GPC3、AFP联合检测原发性肝癌的敏感性和特异性为84.2%和95.7%,均显著高于任一单项检测（t=4.132,P〈0.05;t=6.514,P〈0.05）;（2）GPC3在肝癌组织表达高于癌旁和正常肝组织（t=3.724,P〈0.05;t=15.799,P〈0.05）;GPC3与肿瘤大小、肿瘤数目、HBsAg及AFP水平无明显相关,而与病理分级和临床分期有关;（3）AFP阳性肝癌血清GPC3阳性率为91.4%,而在AFP阴性肝癌中GPC3阳性率为59.1%。结论 GPC3联合AFP检测有助于提高原发性肝癌的确诊率,检测GPC3有助于提高AFP阴性患者肝癌的确诊率。