异源双链泳动分析法在研究HIV基因变异中的应用

异源双链泳动分析法 (heteroduplex mobility assay,HMA)是当前 HIV基因分析中较简便的一种方法。它可在较短时间内对大量的 HIV样品进行分型和初步的基因分析 ,了解追踪在不同时间不同地区和不同人群中流行的病毒亚型以及病毒在单个个体内的基因变异水平 ,为 HIV的诊断、预防和治疗提供科学依据     

NucliSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor1.5方法测定HIV-1病毒载量的比较研究

目的进行NuchSens HIV-1 QT和Amplicor HIV-1 monitor 1．5检测相同临床样品HIV-1病毒载量值之间的比较研究。方法收集临床样本82份，使用两种方法测定病毒载量，对病毒载量值进行统计分析。结果未测到核酸的和两种方法病毒载量对数值之差小于0．5的占88．9％；用△log10 VL〈0．5的56份样本统计两种方法的相关性，相关系数为0．956。结论NucliSens HIV-1 QT和Amphcor HIV-1 monitor 1．5两种方法测定的HIV病毒载量值有很好的相关性。     

SARS病人外周血T淋巴细胞的动态变化及其在发病进程和发病机理中的意义

目的 :通过研究严重急性呼吸综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS)患者外周血免疫细胞的动态变化 ,探讨外周血免疫细胞在SARS发病进程中的意义 ,初步探讨SARS的发病机理 ,并为SARS的诊断和治疗提供有力的实验室依据。方法 :回顾性动态观察我院收治的已治愈SARS病例和SARS死亡病例外周血CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞 ,评估外周血免疫细胞在SARS发病进程及预后中的作用。实验方法为流式细胞术检测和分析免疫细胞表面特异性荧光抗体标记 ,T细胞表面标志组合为CD3 CD8 CD4 5 CD4。结果 :所有治愈的SARS病人的CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞都有不同程度的可逆性下降 ,而所有的死亡病例有不可逆性显著下降 ,直至死亡。T细胞下降程度和维持的时间与病情密切相关。普通型SARS病例最低CD4 + T淋巴细胞数为 30 5± 15 0cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 139± 6 9cells μl(P <0 .0 0 1) ,普通型SARS病例最低CD8+ T淋巴细胞数为 2 2 3± 89cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 171± 92cells μl(P <0 .0 0 1)。所有普通型病例和大部分重型病例T淋巴细胞恢复正常 ,个别重型病例低于正常或接近正常 ,恢复后普通型平均为 991± 2 86cells μl,重型平均为 5 4 5± 2 2 5cells μl。恢复时间有所不同 ,普通型平均为 17± 5天     

HIV暴露婴儿出生后不同时段核酸定性检测结果分析

目的通过对已知感染状态的艾滋病病毒(HIV)暴露婴儿0～72 h、4～6 w干血斑样本核酸定性检测结果进行分析,探讨婴儿早期定性检测结果的准确性。方法收集117名已知HIV感染状态的婴儿出生后0～72 h、4～6 w干血斑(DBS)样本,用罗氏HIV-1核酸检测试剂盒对样本进行HIV核酸定性检测,比较感染婴儿两个时段检测结果。结果 117名已知HIV感染状态的婴儿,包括109名未感染婴儿和8名感染婴儿。109名未感染婴儿在0～72 h、4～6 w核酸定性检测特异度分别为98.2%,99.1%;8名感染婴儿中,8名婴儿在4～6 w核酸定性检测阳性,7名婴儿在0～72 h检测结果为阳性。结论婴儿出生后0～72 h检测特异度较高并有利于早发现宫内感染婴儿,同时,为避免漏检,4～6 w龄时应再次进行检测。     

不同类型样本用于HIV基因型耐药检测研究进展

随着艾滋病(AIDS)抗病毒治疗的推广,艾滋病死亡人数大幅度减少。然而抗病毒药物的压力促使病毒基因发生耐药性的突变,艾滋病病毒(HIV)耐药的检测已经成为HIV预防和治疗的一个重要方面。目前,用于基因型耐药检测的样本类型主要包括液体样本和滤纸片载体样本。液体样本包括全血、血浆、血清,滤纸片载体样本包括干血斑(DBS)、干浆斑(DPS)、干血清斑(DSS)。文章通过对以上样本类型用于检测的特点进行总结,比较它们之间的优缺点,综述各样本类型的使用范围及应用前景。     

绝对计数系统的临床应用评估

传统的CD4阳性淋巴细胞的检测方法是通过计数外周血总白细胞和淋巴细胞百分比来计算T淋巴细胞亚群的绝对数。这一方法需用手工或血细胞计数仪来计数总白细胞(WBC)和各分类白细胞，再用流式细胞仪或显微镜得出淋巴细胞亚群百分比，相乘得出CD4T淋巴细胞的绝对数。这种双平台方法由于多步骤测定方法，得到的结果误差很大，一定程度上限制了其临床应用。     

核酸序列扩增早期诊断人类免疫缺陷病毒感染

人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)是艾滋病的病原体 ,ＨＩＶ的早期诊断具有非常重要的意义。目前 ,用于诊断ＨＩＶ早期感染的方法主要有细胞培养 (病毒分离 )、Ｐ2 4抗原检测和核酸检测。适合于ＨＩＶ的早期诊断[1 ,2 ] 。为此 ,我们采用核酸序列扩增对几组可能处于ＨＩＶ感染早期的高危人群的 86份样品进行了检测 ,并结合抗体检测结果进行分析 ,报告如下。一、材料和方法1 .研究对象 :来自四川、云南、河南和北京的ＨＩＶ 1抗体阳性母亲的婴儿、ＨＩＶ 1抗体阳性的配偶、ＨＩＶ 1抗体检测阴性 ,但自述近段时间有过高危行为的人群及发生针刺事故的…     

干血斑样本用于人类免疫缺陷病毒1型前病毒基因诊断的研究

目的研究干血斑（DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染前病毒DNA基因诊断的可行性。方法采集59例静脉吸毒HIV-1感染者和22名HIV-1阴性健康人EDTA抗凝静脉全血5ml，保存全血1ml，另用50μl制备干血斑样本后，分离血浆。QIAamp Blood Mini试剂盒和10％Chelex 100树脂分别提取全血和干血斑中细胞DNA。Roche Cobas Amplicor逆转录聚合酶链反应检测HIV-1感染者血浆病毒载量。HIV-1Env基因Gp41区，gag基因，pol基因分别用2对外侧和内侧引物，按照套式PCR方法，进行扩增。以HIV-1任何两个基因区扩增结果组合判断HIV-1感染。结果在重复2～3次的前提下，59份DBS样本HIV-1感染基因诊断敏感度93％（95％可信区间89％～97％），34份全血样本94％（95％可信区间89％～98％）。疋。检验显示，两种样本用于HIV-1基因诊断时差异无统计学意义。22份两种阴性样本特异性均为100％（95％可信区间95．93％～100％）。8份血浆病毒载量（VL）〉4．0 Log的DBS样本用于基因诊断的可重复性和HIV-1感染样本检出率优于5份VL〈4．0 Log样本。18对全血和DBS样本HIV-1基因诊断一致性分析，符合率94％，一份DBS样本HIV-1特异三个基因片段均未扩增。结论干血斑样本易采集，便于运输，保存条件低，费用低廉，用于HIV-1基因诊断时与全血样本检测结果无显著性差异，病毒载量〈4．0 Log的样本，为增加检出概率需要对样本重复检测。DBS样本HIV-1基因诊断方法适合于无条件立即处理血样本的偏远地区或采样困难的感染者的诊断，及HIV-1母婴垂直传播研究中婴幼儿感染的早期诊断。     

佳息患联合施多宁治疗艾滋病病毒1型感染的免疫反应效果

目的　 观察非核苷类逆转录酶抑制剂施多宁与蛋白酶抑制剂佳息患联合用于治疗艾滋病病毒 1型 (HIV 1 )后的机体免疫反应。 方法　2 0例HIV 1慢性感染者 ,在治疗前后定期采集外周血 ,分离血浆及单个核细胞 ,检测病毒载量及T淋巴细胞亚群。 结果　治疗后 ,病人血浆中HIV 1核糖核酸 (RNA)含量降低 ,CD+ 4T淋巴细胞数量增多 ,其免疫系统活化指标趋向于正常。 结论　施多宁与佳息患联合治疗有效地抑制了HIV 1的复制 ,并提示机体免疫功能得以部分改善