抗CD132抗体介导同种异型抗原激活的T细胞凋亡

目的研究抗CD132单抗在体外对T细胞增殖的抑制作用以及其可能的临床应用价值。方法分离BALB/c、C57BL/6小鼠的脾细胞进行双向混合淋巴细胞培养(MLC)。分别于第一天(组1)或第三天(组2)加入抗CD132单抗(终浓度达到100mg·L-1)。用流式细胞技术检测细胞增殖(CFSE),T细胞凋亡(PE-CD3,FITC-Annexin-v)以及细胞分裂周期(propidiumiodidestain)。T细胞Survivin的表达则用免疫化学染色法检测。结果混合淋巴细胞培养的结果显示CFSE标记的脾细胞出现了不同程度的荧光强度减弱,提示不同分裂次数的细胞存在。与MLC组比较,组1和组2中均未发现有进一步细胞分裂的迹象存在。在第3天时,组1可以检测到部分T细胞凋亡,而在培养的最初两天并无此现象。在组2中,第4天处于G2/M期的细胞出现减少而凋亡细胞增多。对照组无此现象发生(P<0.01)。同时,在MLC组中可检测到survivin在T细胞表达,而在组1和组2中则未能检测到。结论研究表明阻断CD132信号途径可以通过诱导同种异型抗原活化的T细胞凋亡而抑制T细胞增殖。因此,抗CD132单抗很有希望成为器官移植中抗排斥的临床药物。     

术前输注供者脾细胞联合应用西罗莫司延长小鼠移植心存活时间的机理

目的探讨移植术前输注供者脾细胞(DST)联合应用西罗莫司(SRL)延长小鼠移植心存活时间的机理。方法单向混合淋巴细胞培养中的刺激细胞及静脉输注的脾细胞均采用经丝裂霉素C处理后失去增殖活性的Balb/c(H-2~d)小鼠脾细胞(包括体外实验和体内实验)。(1)体外实验:分为3组,空白对照组:取正常C57BL/6(H-2~b)小鼠(B6小鼠)的脾细胞作为反应细胞;SRL组:取用SRL(1.5μl·g~(-1)·d~(-1))灌胃7 d后的B6小鼠脾细胞作为反应细胞;DST SRL组:取行脾细胞静脉输注8 d、次日予SRL(1.5μl·g~(-1)·d~(-1))灌胃7 d后的B6小鼠的脾细胞作为反应细胞。观察各组在单向混合培养中的脾细胞增殖能力。(2)体内实验:Balb/c小鼠为供者,B6小鼠为受者,建立颈部异位心脏移植模型。实验分为3组,空白对照组:单纯行心脏移植;DST组:受者移植前8 d给予供者脾细胞静脉输注;DST SRL组:受者移植前8 d给予供者脾细胞静脉输注,次日予以SRL灌胃7d(1.5μl·g~(-1)·d~(-1))。术后观察各组移植心的存活时间、病理表现、受者淋巴细胞中CD4~ CD25~ 调节性T细胞(Tr细胞)和凋亡细胞比例的改变及同种抗原刺激后增殖活性变化。结果体外实验中,DST SRL组反应细胞增殖活性平均为(13.76±2.81)%,明显低于空白对照组(28.14%±5.53%,P<0.05)。体内实验中,空白对照组、DST SRL组以及DST组移植心平均存活时间分别为(8.6±0.48)d、(35±14.4)d和(4.83±0.52)d,DST SRL组存活时间显著延长(P<0.05);流式细胞术(FACS)分析显示DST SRL组脾细胞中CD4~ CD25~ Tr细胞比例平均为(3.39±0.21)%,明显高于空白对照组(1.57%±0.3%,P<0.05)。结论移植术前输注供者脾细胞联合应用西罗莫司可通过清除同种反应性T细胞克隆,增加受者体内CD4~ CD25~ Tr细胞的比例,减低对同种抗原的应答能力,从而延长同种小鼠移植心存活时间。     

Blockade of γc signals in combination with donor-specific transfusion induces cardiac allograft acceptance in murine models

The γc cytokines play an important role in proliferation and survival of T cells. Blocking the γc signals can cause the activated donor-reactive T cells losing the ability to proliferate, and getting into apoptosis pathway, which contributes to induction of the peripheral tolerance. In this study, we induced the transplant tolerance through blocking the γc in combination with donor-specific transfusion (DST) in the cardiac transplantation. Following DST, on the day 2, 4 and 6, C57BL/6 recipients received an...     

转化生长因子β1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。方法：以丝裂霉素处理的Balb／C（H-2^d）小鼠脾细胞为刺激细胞，羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）标记的C57BL／6（H-2^b）小鼠T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养（MLC）。分别设立对照组（TGF—β10ne／ml）、低浓度组（TGF—β1ng／ml）、中浓度组（TGF—β15ng／ml）和高浓度组（TGF-β1 20ng／ml）。MLC结束后利用Alamar Blue检测T细胞增殖活性，流式细胞仪检测CD3、CD25表达水平。同时设立白细胞介素．2（IL-2）组（TGF—β15ng／ml＋IL-2100U／ml），以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。结果：TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度，而且随着TGF-β1剂量加大，免疫抑制能力增强。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时，也可使CD25^＋T细胞比例上调，但并无明显的剂量依赖性。加入外源性IL-2后，T细胞增殖活性增强，同时CD25^＋T细胞比例降低。结论：TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖，并使CD25^＋T细胞比例增加，而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能，下调CD25^＋T细胞比例，说明外源性IL-2可以影响TGF-β1的生物学效应。     

阻断T细胞生长因子信号通路治疗移植物抗宿主病

目的探讨通过抗γ公共链单克隆抗体封闭T细胞生长因子受体治疗小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的效果。方法通过混合淋巴细胞培养观察抗γ公共链抗体在体外对T细胞的抑制作用。经静脉输注C57BL／6(H-2b)脾细胞给F1代小鼠(C57BL／6×Balb／cH-2b/d),建立移植物抗宿主病模型。对GVHD模型小鼠短期内给予抗γ公共链抗体,一共3次,并观察其治疗效果。结果抗γ公共链抗体可抑制T细胞增殖,使凋亡细胞数增加及M期细胞数下降。输注同种脾细胞能成功建立急性GVHD模型,主要引起肝脏损伤的病理改变。单次注射抗γ公共链抗体可使GVHD小鼠肝内浸润的淋巴细胞发生凋亡;短期内连续3次注射抗γ公共链抗体可使丙氨酸转氨酶、天冬氮酸转氨酶明显低于对照组(P<0．05),但肝内仍然可观察到淋巴细胞浸润。结论体外阻断T细胞生长因子受体途径可以完全清除反应性T细胞,亦适用于GVHD治疗;但短期治疗不能完全清除反应性T细胞。     

抗γc单克隆抗体联合供者特异性输注延长移植物存活

目的 探讨抗γ公共链单克隆抗体(抗γc单抗)联合供者脾细胞特异性输注(DST)诱导移植物长期存活的可行性及相关机制.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型,组Ⅰ为单纯实施心脏移植组,组Ⅱ于移植前给予DST,组Ⅲ术前予DST联合抗γc单克隆抗体处理,术后观察移植物的存活时间及相关指标.结果 组Ⅲ心脏移植物平均存活时间明显长于组Ⅰ及组Ⅱ (P＜0.05).FACS分析显示组Ⅲ受者脾细胞中Tr比例较组Ⅰ及组Ⅱ显著增高(P＜0.05),同时脾细胞增殖活性明显减低(P＜0.05).结论 抗γ公共链单克隆抗体联合DST通过增加供者体内Tr的比例,减低对同种抗原的应答能力,显著延长同种心脏移植模型中移植物存活时间.     

一氧化氮对心血管系统的调控

冯清平教授从事NO对心血管系统调控的研究多年，曾在Circulation发表近20篇有关论文。冯教授现在已经成为加拿大心血管药理学专家，多年参与该国国家医药科研资助基金委员会。此文系冯教授他自己研究的NO对心血管系统影响的总结性文章。本刊特邀作稿以飨读者。冯教授系我刊外籍编委。     

一氧化氮对心血管系统的调控

(编者按:冯清平教授从事NO对心血管系统调控的研究多年,曾在Circulation发表近20篇有关论文.冯教授现在已经成为加拿大心血管药理学专家,多年参与该国国家医药科研资助基金委员会.此文系冯教授他自己研究的NO对心血管系统影响的总结性文章.本刊特邀作稿以飨读者.冯教授系我刊外籍编委.)     

输注脾细胞建立输血相关的移植物抗宿主模型

目的探讨输注同种脾细胞建立小鼠输血相关的移植物抗宿主(TA-GVHD)模型及其特点。方法分离C57BL/6(H-2b)脾细胞,分别经静脉输注给Balb/c(H-2d)裸鼠与F1代(C57BL/6×Balb/c H-2b/d),建立输血相关的移植物抗宿主模型。活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein diacetate succini midyl ester,CFSE)标记供者脾细胞,通过流式细胞仪分析供者细胞在受者体内的增殖;免疫组化分析供者脾细胞survivin的表达;检测Balb/c裸鼠体内抗供者抗体及IL-10浓度;分析皮肤、小肠、肝脏的病理变化。结果输注同种脾细胞成功建立急性TA-GVHD模型。受者脾脏及外周可以检测到标记后增殖的供者细胞。小鼠的病理改变主要出现在肝脏,浸润细胞早期表达survivin。小肠及皮肤未见明显的病理改变。TA-GVHD裸鼠第7天IL-10、抗-Balb/c显著升高。结论输注同种脾细胞可以建立TA-GVHD模型,并具有简单、快速、稳定的特性,为诊断、治疗GVHD提供了良好的模型。